跌打藥酒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究

廖曉嘉 陳君銳 周燕雙

跌打藥酒是我公司優(yōu)良產(chǎn)品之一，收載于衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第九冊(cè)，由當(dāng)歸、川芎、赤芍、牡丹皮、劉寄奴、三棱、土鱉蟲、三七、紅花、澤瀉、澤蘭、桃仁、莪術(shù)等組成的中藥復(fù)方制劑，具有活血散瘀，消腫止痛作用。臨床上主要用于跌打損傷，筋骨酸痛［1］。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有常規(guī)的乙醇量檢驗(yàn)，現(xiàn)我們對(duì)原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定性與定量方法的研究，能更好的對(duì)跌打藥酒進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。

1 實(shí)驗(yàn)儀器和藥品

CMAG REPROSTARⅡ型號(hào)成像系統(tǒng);Sartorius-CPA225D型號(hào)的電子天秤;Agilent1200高效液相色譜儀(DAD檢測(cè)器);KQ-500DE型超聲波清洗器;Agilent-C18 ODS(250 mm×4.6 mm×5 m)色譜柱;硅膠G板(青島海洋化工研究所生產(chǎn));甲醇為Merck KGaA色譜純;其余試劑均為分析純;當(dāng)歸對(duì)照藥材(批號(hào)：120927-201014)、川芎對(duì)照藥材(批號(hào)：120918-200809)、芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：110736-201035)、丹皮酚對(duì)照品(批號(hào)：110708-200505)，均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所;跌打藥酒供試品和缺當(dāng)歸和川芎、赤芍、牡丹皮陰性對(duì)照供試品，由廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 川芎和當(dāng)歸的薄層色譜鑒別 取供試品和缺川芎、當(dāng)歸陰性樣品，分別作為供試品溶液和陰性對(duì)照溶液。另取川芎、當(dāng)歸對(duì)照藥材各1.0 g，分別加石油醚(30～60℃)25 ml，超聲處理15 min，濾過(guò)，濾液自然揮干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，分別制成川芎、當(dāng)歸對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(8∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照溶液在相應(yīng)位置上未見相同斑點(diǎn)［2］。結(jié)果見圖 1。

圖1 川芎和當(dāng)歸薄層色譜圖

2.2 赤芍的薄層色譜鑒別 取供試品和缺赤芍陰性對(duì)照樣品各30 ml，分別置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0 ml溶解，用水飽和的正丁醇提取2次，每次30 ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次20 ml，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，加在中性氧化鋁柱(100～200目，5 g，內(nèi)徑1.5 cm)上，用甲醇40 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4 μl，分別條帶狀點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷－甲醇－水(30∶8∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照溶液在相應(yīng)位置上未見相同斑點(diǎn)。結(jié)果見圖2。

圖2 赤芍薄層色譜圖

2.3 牡丹皮藥材含量測(cè)定

2.3.1 選擇丹皮酚的檢測(cè)波長(zhǎng) 配制丹皮酚對(duì)照品溶液及缺牡丹皮的跌打藥酒陰性對(duì)照溶液，在Agilent1200高效液相色譜儀(DAD檢測(cè)器)下，200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。掃描得：丹皮酚對(duì)照品溶液在274nm處有較強(qiáng)的吸收波長(zhǎng)，缺牡丹皮的跌打藥酒陰性對(duì)照溶液，在274nm處無(wú)吸收波長(zhǎng)。故選擇274 nm為丹皮酚檢測(cè)波長(zhǎng)，結(jié)果見圖3～4。

圖3 丹皮酚光譜圖

圖4 跌打藥酒(缺牡丹皮)陰性光譜圖

2.3.2 色譜分析條件 色譜柱：Agilent-C18 ODS(250 mm×4.6 mm ×5 m);流動(dòng)相：甲醇-水(45∶55);檢測(cè)波長(zhǎng);274nm;進(jìn)樣量：10 μl。理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算應(yīng)不低于 4000［3］。

2.3.3 供試品溶液制備

2.3.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含20 μg的溶液，即得。

2.3.3.2 供試品溶液的制備 取跌打藥酒30 ml，精密量取，蒸干，殘?jiān)右掖既芙獠⒍ㄈ葜?0 ml，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，即得［4］。

2.3.3.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 取缺牡丹皮藥材的跌打藥酒30ml，同法制成缺牡丹皮的陰性對(duì)照溶液。

2.3.4 考察供試品的專屬性：按以上的色譜條件，對(duì)丹皮酚對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺牡丹皮的陰性對(duì)照溶液，進(jìn)行液相色譜進(jìn)樣分析，結(jié)果陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見圖5～7。

2.3.5 考察線性關(guān)系 取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇配制成每 1ml含丹皮酚 2.5272、5.0544、10.1089、20.2178、40.4356、80.8712、160.1742 g 的溶液。分別吸取10 μl，進(jìn)行液相色譜分析，計(jì)算回歸方程為：Y=63.152x－34.43，R=0.9999.說(shuō)明丹皮酚在2.5272～160.1742 g呈線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，按上述色譜條件進(jìn)行連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得丹皮酚峰面積，并計(jì)算峰面積的RSD=0.66%。

圖5 丹皮酚對(duì)照品色譜圖

圖6 供試品溶液色譜圖

圖7 缺牡丹皮陰性對(duì)照溶液色譜圖

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 μl，按上述色譜條件進(jìn)行分析，分別在0、4、8、16、24 h進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD=1.55%。供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.8 供試品的重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品6份(同一批號(hào))，按上述方法制備供試品溶液，同時(shí)按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算含量。RSD=0.62%。

2.3.9 測(cè)定加樣回收率 取已知含量的跌打藥酒6份各30 ml，精密量取，在加入相應(yīng)量的丹皮酚對(duì)照品溶液，按上述制定的方法進(jìn)行測(cè)定與分析，得丹皮酚的含量，計(jì)算加樣回收率，回收率為98.44%，RSD=1.22%，結(jié)果見表1。

表1 跌打藥酒加樣回收率測(cè)定結(jié)果

2.2.10 供試品測(cè)定 按上述的制備方法及色譜條件對(duì)跌打藥酒三批進(jìn)行測(cè)定分析與計(jì)算，結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 牡丹皮藥材是該制劑中主要成份之一，具有清熱涼血、活血化瘀作用，而牡丹皮的主要含量為丹皮酚。故選擇它進(jìn)行高效液相色譜法的定量分析。從而監(jiān)控該制劑的質(zhì)量。

3.2 增加當(dāng)歸、川芎、赤芍藥材進(jìn)行薄層色譜的定型鑒別，這樣更全面的控制跌打藥酒的質(zhì)量。

［1］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)－中藥成方制劑(第19冊(cè))，1998.226．

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典(2005年版)．一部．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，233，附錄Ⅵ B，Ⅵ D

［3］ 李萍，丹皮酚片劑中丹皮酚含量的測(cè)定，中國(guó)醫(yī)藥指南，2008，18(6)：18，28．

［4］ 周燕雙，黃惠蓮，跌打傷科酒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析與研究，中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，01(6)：1-2．