增加7個(gè)STR基因位點(diǎn)在二聯(lián)體親子鑒定中的應(yīng)用

王 旻，陳 玫，于衛(wèi)建，孟慶麗

(大連市血液中心，遼寧大連 116001)

增加7個(gè)STR基因位點(diǎn)在二聯(lián)體親子鑒定中的應(yīng)用

王 旻，陳 玫，于衛(wèi)建，孟慶麗

(大連市血液中心，遼寧大連 116001)

目的 在二聯(lián)體親子鑒定出現(xiàn)位點(diǎn)完全匹配但累積親權(quán)指數(shù)(PI)較低的情況下，增加檢測位點(diǎn)。方法 選擇STR_Typer_10_v1熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒，對(duì)47例累計(jì)親權(quán)指數(shù)較低的二聯(lián)體親子鑒定增加D11S2368，D13S325，D18S1364，D22 -GATA198B05，D2S1772，D7S3048，D8S1132 這 7 個(gè)位點(diǎn)的檢測。結(jié)果 通過增加7個(gè)STR基因位點(diǎn)的檢測，有27例提高到99.974%以上，有14例增加到99.99%以上，增加STR檢測沒有觀察到基因突變的現(xiàn)象。二聯(lián)體檢測的累計(jì)親權(quán)指數(shù)有不同程度的增加，有8例從102以下提高到104以上。結(jié)論

增加檢測位點(diǎn)后二聯(lián)體的檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，結(jié)論更可靠，司法鑒定人的執(zhí)業(yè)風(fēng)險(xiǎn)大大降低。

STR;二聯(lián)體;親子鑒定

短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)是目前在親權(quán)鑒定和個(gè)體識(shí)別中應(yīng)用最廣泛的長度多態(tài)性遺傳標(biāo)記，其長度多態(tài)性來源于重復(fù)單位拷貝數(shù)的個(gè)體差異。目前國內(nèi)做親子鑒定所用試劑盒(如identifiler、powerplex等)絕大多數(shù)是進(jìn)口的，并不是針對(duì)中國漢族人群專門研制的，尤其是在二聯(lián)體案件，會(huì)出現(xiàn)位點(diǎn)突變或累積親權(quán)指數(shù)較低的情況，這樣就會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果和鑒定結(jié)論。本研究選用了珠?？频堑腟TR-typer10G試劑盒對(duì)二聯(lián)體親子概率低的案例增加檢測位點(diǎn)以提高結(jié)論的可信程度。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

美國ABI公司3130型基因分析儀。STR_Typer_10_v1熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒(珠海科登公司，中國)，該試劑除 D12S391，D18S1364與常規(guī)用的Sinofiler試劑盒的位點(diǎn)重復(fù)外，增加了D11S2368，D13S325 D18S1364，D22 - GATA198B05，D2S1772，D7S3048，D8S1132這7個(gè)位點(diǎn)的檢測。

1.2 標(biāo) 本

選擇2009年和2010年度在大連市血液中心用美國ABI公司Sinofiler試劑盒進(jìn)行親子鑒定檢測的二聯(lián)體標(biāo)本47例。這些案例各基因座均符合遺傳定律但累積親權(quán)指數(shù)較低。

1.3 操作步驟

常 規(guī) Chelex法 提 取 檢 材 DNA［5］。應(yīng) 用 珠 海STRtyper10G試劑盒，PCR同步擴(kuò)增10個(gè)位點(diǎn)基因片段。擴(kuò)增體系共10 μL，其中5×PCR混合液 2 μL，10 × 引物 1 μL，Taq 酶 0.2 μL，模板 DNA 1.5 μL，雙蒸水5.3 μL。擴(kuò)增程序按試劑盒要求設(shè)置。具體如下:95°C預(yù)變性2 min后，然后進(jìn)入94°C變性30 s，61°C 退火 1 min，70°C 延伸1 min共5 個(gè)循環(huán);再進(jìn)入92°C 變性30 s，61°C 退火1 min，70°C 延伸1 min共25個(gè)循環(huán)，然后60°C 45 min即可。

擴(kuò)增產(chǎn)物變性后，應(yīng)用ABI-3130全自動(dòng)基因測序儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳。電泳體系包括8.7 μL的甲酰胺，0.3 μL的0～500分子量內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)物和1 μL的擴(kuò)增產(chǎn)物。

應(yīng)用ABI-3130儀器附帶的GeneMapper軟件進(jìn)行結(jié)果分析。

2 結(jié) 果

47個(gè)案例經(jīng)珠海STRtyper10G試劑檢測后，與原先用Sinofiler試劑基因位點(diǎn)檢測結(jié)果累加，計(jì)算其總的累積親權(quán)指數(shù)及親子概率。結(jié)果有27例提高到99.974%以上，有14例增加到99.99%以上。沒有觀察到基因突變的現(xiàn)象。如表1和圖1。

表1 47個(gè)案例(無基因突變)總的累積親權(quán)指數(shù)(PI)及親子概率(RCP)結(jié)果Tab 1 Cumulative parental rights index(PI)and paternity probability(RCP)of 47 cases(mutations)

續(xù)表

圖1 47個(gè)案例總的累積親權(quán)指數(shù)圖Fig 1 Cumulative parental rights index(PI)of 47 cases

3 討 論

國內(nèi)做親子鑒定所用試劑盒(如 identifiler、powerplex等)絕大多數(shù)是進(jìn)口的，其中包含了低多態(tài)性STR基因座，這些基因座在中國漢族人群中的雜合度、個(gè)體識(shí)別能力、非父排除率、多態(tài)信息含量較差，在物證學(xué)檢驗(yàn)(包括親權(quán)鑒定)的作用有限，尤其是對(duì)于二聯(lián)體的案件，其缺點(diǎn)尤為突出。在鑒定實(shí)踐中，二聯(lián)體的鑒定并不是少數(shù)。檢驗(yàn)多少個(gè)STR基因座、親權(quán)概率達(dá)到多少才可以認(rèn)定父權(quán)關(guān)系，即親權(quán)關(guān)系的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室或不同文獻(xiàn)并不相同［1，4，7］。目前有關(guān)三聯(lián)體親子鑒定有了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，在鑒定實(shí)踐中做到了有標(biāo)準(zhǔn)可循，但是二聯(lián)體親子鑒定現(xiàn)在依然無法滿足鑒定實(shí)踐的需求。國內(nèi)已有許多報(bào)道認(rèn)為在作單親案鑒定時(shí)，需要檢測更多的基因座［1-2，5-6］。

本文所選的案例，用常規(guī)Sinofiler試劑盒檢測除性染色體外，15個(gè)位點(diǎn)完全相符，依常理是不能排除親子關(guān)系的。但是，由于累計(jì)親權(quán)指數(shù)過低，RCP值又＜99.974%，就會(huì)給司法鑒定人的判斷帶來疑問，必須增加檢測的位點(diǎn)。

本研究發(fā)現(xiàn)，使用STRtyper10G試劑盒作為常規(guī)親子鑒定Sinofiler試劑的補(bǔ)充試劑，增加7個(gè)檢測位點(diǎn)，使得二聯(lián)體檢測的累計(jì)親權(quán)指數(shù)會(huì)有不同程度的增加，有27例的親子概率增加到99.974%以上，有14例增加到99.99%以上，增加STR檢測沒有觀察到基因突變的現(xiàn)象。二聯(lián)體檢測的累計(jì)親權(quán)指數(shù)有不同程度的增加，有8例從102以下提高到104以上，最多增加一萬倍以上(第25例)。這樣一來，二聯(lián)體的檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，結(jié)論更可靠，司法鑒定人的執(zhí)業(yè)風(fēng)險(xiǎn)也大大降低。

若應(yīng)用常規(guī)Sinofiler試劑盒進(jìn)行日常單親親子鑒定，存在一些漏判非父的風(fēng)險(xiǎn)，必要時(shí)應(yīng)增加檢測指標(biāo)。在日常工作中，應(yīng)該多選擇一些在中國漢族人群中具有高度多態(tài)性的STR遺傳位點(diǎn)，為法醫(yī)學(xué)個(gè)體識(shí)別和親子鑒定選擇適合的工具。

:

［1］柳燕，李莉.單親親子鑒定的分析研究［J］.法醫(yī)學(xué)雜志，2002，18(2):86.

［2］王琳，王毅，王曉梅，等.親子鑒定中二聯(lián)體鑒定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)的探討［J］.分子診斷與治療雜志，2010，2(3):172-175.

［3］程大霖，李莉.個(gè)體識(shí)別和親子鑒定理論與實(shí)踐［M］.北京:中國檢察出版社，2001:18-21.

［4］朱運(yùn)良，黃艷梅，伍新堯.單親案親權(quán)鑒定結(jié)果判定策略［J］.法醫(yī)學(xué)雜志，2006，22(4):281-284.

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［6］伍新堯，童大躍，朱運(yùn)良，等.用STR分型技術(shù)作親權(quán)鑒定時(shí)判斷標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版)，2010，31(1):5 -6.

［7］薛天羽，成建定，張晉湘.華南地區(qū)漢族群體15個(gè)STR基因座的遺傳多態(tài)性調(diào)查［J］.中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版)，2009，30(3s):48 -49.

Increase of 7 STR loci enhance the accurate in paternity identification

WANG Min，CHEN Mei，YU Wei-jian，MENG Qing-li
(Dalian Blood Center，Dalian116001，China)

［Abstract］ObjectiveOn the paternity of the two conjoined sites exactly matches the cumulative parental rights index(PI)，lower case，to increase the detection sites.MethodsSelect STR_Typer_10_v1 fluorescently labeled multiplex PCR kit，diad paternity of 47 cases of total parental rights index lower increase D11S2368，D13S325 D18S1364，D22 - GATA198B05，D2S1772，D7S3048，D8S1132 7 detection.ResultsBy increasing the detection of 7 STR loci，27 cases increased to more than 99.974%，14 cases increased to 99.99%increase in STR did not observe the phenomenon of gene mutation is detected.Two conjoined detect the cumulative index of parental rights has increased in varying degrees，eight cases from the following 102 to 104 above.ConclusionIncrease of 7 STR loci enhances the accurate in paternity identification，and makes the conclusion more reliable;reduce the risk of forensic practice greatly.

［Key words］STR;diad;patemity identification

D919

A

1671-7295(2013)02-0170-03

王旻，陳玫，于衛(wèi)建，等.增加7個(gè)STR基因位點(diǎn)在二聯(lián)體親子鑒定中的應(yīng)用［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35(2):170 -172.

10.11724/jdmu.2013.02.19

王 旻(1978-)，男，遼寧大連人，主管技師。E-mail:wangmin_dl@126.com

2012-12-07;

2013-03-01)