maspin和Ets-1在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義

徐韶杰，尚培中，李 偉，蔡大偉，韓雪梅，王靜波

宮頸鱗狀細(xì)胞癌是婦科常見的上皮來源惡性腫瘤，近年來發(fā)病率呈上升趨勢［1-2］。目前手術(shù)切除是其主要的治療方式，放療或化療是重要的輔助手段。盡管如此，不少患者在治療期間出現(xiàn)癌細(xì)胞的擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致預(yù)后不良。近年研究表明，抑癌基因maspin和轉(zhuǎn)錄因子Ets-1在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用。本研究應(yīng)用免疫組化EnVisionTM法對(duì)原發(fā)性宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織進(jìn)行maspin和Ets-1檢測，旨在探討兩者在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性，為判斷預(yù)后、指導(dǎo)臨床治療提供客觀參考指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集解放軍316醫(yī)院和解放軍251醫(yī)院2006年1月4日—2012年10月25日原發(fā)性宮頸鱗狀細(xì)胞癌根治性手術(shù)切除標(biāo)本70例，年齡42～81歲，平均58歲，≥58歲45例，＜58歲25例。腫瘤最大徑2.5～4.5 cm，平均3 cm，≥3 cm 47例，＜3 cm 23例。同時(shí)選取距腫瘤0.3 cm處癌旁組織標(biāo)本30例作為對(duì)照。病例均無其他嚴(yán)重內(nèi)科疾病或其他惡性腫瘤，術(shù)前均未行化療、放療及免疫治療。

1.2 方法 濃縮型maspin鼠抗人單克隆抗體及即用型Ets-1兔抗人多克隆抗體均由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供，其中濃縮型maspin按1:150作為工作濃度。免疫組化染色采用EnVisionTM法，操作步驟參照相應(yīng)的說明書進(jìn)行。陽性對(duì)照切片由提供試劑公司提供，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)［3］背景染色清晰，陽性反應(yīng)呈黃色或棕黃色顆粒。結(jié)果判讀由兩位病理科醫(yī)師在10個(gè)高倍視野下觀察陽性細(xì)胞所占的比率，規(guī)定陽性細(xì)胞率＜20%為陰性，≥20%為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman檢驗(yàn)，α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 maspin和Ets-1在宮頸鱗狀細(xì)胞癌及癌旁組織中的表達(dá) maspin和Ets-1在宮頸鱗狀細(xì)胞癌及癌旁組織中陽性反應(yīng)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，見圖1、2。maspin陽性表達(dá)率在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中為37.14%(26/70)，在癌旁組織中為70.00%(21/30)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.10，P ＜0.05)。Ets-1陽性表達(dá)率在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中為64.28%(45/70)，在癌旁組織中為 13.33%(4/30)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.82，P ＜0.05)。

2.2 maspin和Ets-1表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 maspin表達(dá)陽性率在年齡及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但在腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期及增殖活性Ki-67間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Ets-1表達(dá)陽性率在年齡及腫瘤大小間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但在組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及增殖活性Ki-67間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

圖1 maspin在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織中的表達(dá)(EnVisionTM法×100)

圖2 Ets-1在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織中的表達(dá)(En-VisionTM法×100)

表1 maspin和Ets-1表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

2.3 maspin和Ets-1在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 70例宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中，maspin和Ets-1表達(dá)同時(shí)陽性者11例，同時(shí)陰性者10例，maspin陽性、Ets-1陰性者15例，maspin陰性、Ets-1陽性者34例，兩者呈顯著負(fù)相關(guān)(r=－0.35，P＜0.05)。

3 討論

maspin基因是一種腫瘤抑制基因，位于染色體18q21.3，由6個(gè)內(nèi)含子和7個(gè)外顯子構(gòu)成。第1個(gè)外顯子不編碼蛋白質(zhì)，其啟動(dòng)區(qū)無TATA盒，但富含GC［4］。maspin蛋白屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的一種，相對(duì)分子量為42 000，其C端位點(diǎn)環(huán)為主要的反應(yīng)部位，該區(qū)域高度保守，如其變異可影響maspin蛋白功能;其N端有識(shí)別靶蛋白和結(jié)合膠原作用的P1殘端。maspin蛋白在人體正常甲狀腺、乳腺及前列腺等組織中呈高水平表達(dá)，通過降低腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)侵襲能力、抑制新生血管形成等多種途徑發(fā)揮抑制腫瘤的作用。在乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌和卵巢癌等腫瘤中，maspin呈低表達(dá)或表達(dá)缺失，表明其異常表達(dá)參與了多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［5-7］。本實(shí)驗(yàn)表明，maspin在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織，推測maspin在良性病變或正常組織中呈高水平表達(dá)，而在惡性病變組織中呈低水平表達(dá)，這與張遠(yuǎn)起等［3］研究結(jié)論相符。分析maspin與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)與患者年齡及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，這與maspin具有抑制癌細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移結(jié)論［8］不符。說明maspin在不同組織中的功能表現(xiàn)不盡相同，可能與其C端活性位點(diǎn)環(huán)功能有關(guān)。成少華等［9］研究了胃癌組織中maspin的表達(dá)，結(jié)果顯示在高、中分化組高于低分化組、TNMⅠ～Ⅱ期高于Ⅲ～Ⅳ期。本實(shí)驗(yàn)顯示，maspin與腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)及TNM分期有關(guān)，且分化程度越高，其表達(dá)水平相對(duì)亦高，顯示maspin可在一定程度上反映腫瘤的惡性程度。Ki-67是一種核增殖標(biāo)志物，其表達(dá)與細(xì)胞的增殖活性密切相關(guān)。Ki-67在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)，其表達(dá)水平越高，腫瘤細(xì)胞增殖就越快，也就更易于發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移［10-11］。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，maspin在Ki-67高表達(dá)者中的陽性率低于Ki-67低表達(dá)者，推測maspin具有與Ki-67相反的功能。

Ets(E26 transformation-specific)家族轉(zhuǎn)錄因子主要包括Ets-1和Ets-2，其結(jié)構(gòu)均有一特異的DNA結(jié)合序列，影響著Ets-1和Ets-2的活性［12］。Ets-1基因位于染色體11q23，其編碼的蛋白質(zhì)相對(duì)分子量為54 000。Ets-1能夠調(diào)節(jié)一系列與細(xì)胞外基質(zhì)重建有關(guān)的基因表達(dá)，如尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化物(uPA)，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-1、3、9，整合素β-2等，這些物質(zhì)可降解細(xì)胞外基質(zhì)，使細(xì)胞黏附能力降低，有利于腫瘤細(xì)胞的游走、浸潤生長和轉(zhuǎn)移。Ets-1在肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌等多種實(shí)體腫瘤中呈高表達(dá)［13-15］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Ets-1在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)，且明顯高于癌旁組織，這與鄭麗娟等［16］研究結(jié)論相符。Ets-1在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與患者年齡及腫瘤大小無關(guān)，而與組織學(xué)分級(jí)、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且在增殖活性Ki-67表達(dá)越高的患者中其表達(dá)亦越高，因而推測Ets-1的高表達(dá)預(yù)示著宮頸鱗狀細(xì)胞癌惡性度高、預(yù)后不良。這與Ets-1在腫瘤浸潤過程中主要參與細(xì)胞外基質(zhì)重塑、降解有關(guān)［17］。

對(duì)一些腫瘤標(biāo)志物的免疫組化研究，有助于預(yù)測宮頸鱗狀細(xì)胞癌對(duì)放療的敏感性，作為新輔助化療療效的預(yù)測指標(biāo)，也為分子靶向治療帶來了新的曙光［18-21］。本研究結(jié)果顯示maspin與Ets-1之間呈顯著負(fù)相關(guān)，可見兩者之間存在信號(hào)傳導(dǎo)進(jìn)而相互調(diào)節(jié)，其機(jī)制可能與maspin的結(jié)構(gòu)有關(guān)，在maspin啟動(dòng)子區(qū)域存在多個(gè)重要轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合點(diǎn)，其中就包括Ets-1［8］。資料顯示，maspin能夠直接抑制培養(yǎng)基中血管內(nèi)皮細(xì)胞向堿性纖維生長因子和血管內(nèi)皮生長因子的運(yùn)動(dòng)，抑制有絲分裂和血管的生成［22］。然而，有絲分裂信號(hào)可以改變Ets-1的磷酸化狀態(tài)，使其磷酸化，進(jìn)而抑制其DNA結(jié)合能力，由此可知，有絲分裂信號(hào)可抑制Ets-1活性［12］。

綜上所述，在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中，maspin表達(dá)下調(diào)，而Ets-1表達(dá)上調(diào)，前者與腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期及增殖活性Ki-67顯著相關(guān)，后者與組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及增殖活性Ki-67顯著相關(guān)。兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，共同參與了宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展。探討它們的生物學(xué)功能及其相關(guān)作用機(jī)制，有利于對(duì)宮頸鱗狀細(xì)胞癌的綜合治療和預(yù)后評(píng)估。

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