大孔樹(shù)脂純化五味子總木脂素、總?cè)乒に囇芯?/h1>
2013-09-14 08:47:52莫永俊汪春泉趙曉宏
中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2013年5期
莫永俊 汪春泉 王 琦 趙曉宏
1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心，吉林長(zhǎng)春 130118；2.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京100193
五味子 Schisandra chinensis（Turcz.）Baill 為著名中藥，具有益氣生津、斂肺滋腎、止瀉、安神等功效，其主要活性成分為總木脂素和總?cè)啤，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，五味子總木脂素具有保護(hù)心肌、降血壓、降血脂等功效[2]，三萜類物質(zhì)具有抗病毒、抗腫瘤等功效[3-4]。大孔樹(shù)脂具有交換速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長(zhǎng)等諸多優(yōu)點(diǎn)，對(duì)各類中藥有效組分以及中藥復(fù)方有效部位的精制純化發(fā)揮了重要的作用[5-6]。本文旨在應(yīng)用大孔吸附樹(shù)脂同時(shí)純化五味子中總木脂素總?cè)?，以?shù)脂對(duì)總木脂素的吸附解析性能為主要考察指標(biāo)，兼顧總?cè)频奈浇馕雎?，篩選適宜的大孔樹(shù)脂類型，確定最佳的純化工藝。本文首次采用梯度洗脫法同時(shí)純化五味子總木脂素總?cè)疲K產(chǎn)品中有效物質(zhì)含量顯著提高，為高純度五味子總木脂素總?cè)频墓I(yè)生產(chǎn)提供數(shù)據(jù)支持。
1 儀器與試藥
W-2102 PC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司）；Waters 高效液相色譜系統(tǒng)（Waters2489 紫外檢測(cè)器，Waters2707 自動(dòng)進(jìn)樣器，Waters Empower 3 工作站）。
五味子藥材（產(chǎn)地為吉林省白山市，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所趙曉宏副研究員鑒定）；五味子醇甲（中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)：110857-201010）；齊墩果酸（中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)：110709-200505）；D-101、D-201、AB-8、ADS-7、S-8 型大孔吸附樹(shù)脂（購(gòu)自滄州寶恩吸附材料科技有限公司）；甲醇乙醇分析純（北京化工廠）；甲醇色譜純（Burdick＆Jackson公司）。
2 方法與結(jié)果
2.1 含量測(cè)定[1]
2.1.1 五味子總木脂素含量測(cè)定
精密稱取五味子醇甲0.515 mg，置于10 mL 容量瓶中，甲醇定容，搖勻即得。精密量取對(duì)照品溶液100、150、200、250、300、350 μL，分別加甲醇定容至 10 mL，在 250 nm處測(cè)定吸光度，以五味子醇甲濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為Y=115.14X+0.023 4，r=0.999 6，五味子醇甲在 0.021～0.072 mg 有良好的線性關(guān)系。
2.1.2 五味子總?cè)坪繙y(cè)定
精密稱取齊墩果酸4.760 mg，置于25 mL 容量瓶中，甲醇定容，搖勻即得。精密量取對(duì)照品溶液100、200、300、400、500、600 μL 揮干溶劑，加 0.2 mL 5%香草醛冰醋酸溶液，0.8 mL 高氯酸，搖勻后60℃水浴15 min，冷卻至室溫，加入5 mL 冰醋酸搖勻，于546 nm 處測(cè)定吸光度，以齊墩果酸質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為Y=7.972 7X-0.030 5，r=0.999 2，齊墩果酸在19.040～114.240 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.1.3 五味子醇甲含量測(cè)定
2.1.3.1 色譜條件 色譜柱為Cyncromis C18 柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇∶水=65∶35，檢測(cè)波長(zhǎng)為 250 nm，流速為1 mL/min，柱溫為室溫。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。
2.1.3.2 含量測(cè)定 精密稱取五味子醇甲對(duì)照品4.39 mg 置于25 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜，搖勻即得。分別精密吸取對(duì)照品溶液4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL，注入高效液相色譜儀，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到線性回歸方程Y=5×106X-155678，r=0.999 5，五味子醇甲在 0.702～2.118 μg 線性關(guān)系良好。
2.2 五味子上樣液的制備
五味子藥材粉碎，加入10倍量的95%乙醇，加熱回流3次，每次2 h，將醇提液冷卻后過(guò)濾，回收乙醇，濃縮得到五味子乙醇提取浸膏，加適量的水稀釋即得五味子上樣液（五味子乙醇提取浸膏中總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為5.80%、3.76%、0.75%）。
2.3 大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)篩選
2.3.1 靜態(tài)吸附性能考察
分別精密稱取不同類型已預(yù)處理的樹(shù)脂各2 g，置于250 mL 具塞錐形瓶中，加入40 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為 1.0 mg/mL），25℃恒溫條件下振蕩 24 h（100 r/min），充分吸附后，過(guò)濾，將濾液（吸附液）蒸干，測(cè)定其總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲含量，?jì)算比吸附量，結(jié)果見(jiàn)表1。
2.3.2 靜態(tài)解析性能考察
取過(guò)濾后的樹(shù)脂，加蒸餾水100 mL，25℃恒溫振蕩2 h（100 r/min），過(guò)濾后的樹(shù)脂中加入100 mL 體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，25℃恒溫振蕩 24 h（100 r/min），過(guò)濾，將水洗濾液和醇洗濾液合并蒸干，測(cè)定濾液（解析液）中總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲含量，?jì)算解析率，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 5種類型大孔樹(shù)脂的吸附和解吸性能
由表1 結(jié)果可知，與其他類型的樹(shù)脂相比，AB-8型樹(shù)脂對(duì)總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲的吸附解析性能最好，故選擇AB-8大孔樹(shù)脂進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。
2.4 AB-8型大孔樹(shù)脂吸附解析工藝條件優(yōu)化
2.4.1 上樣液濃度的影響
稱取10 g AB-8型大孔樹(shù)脂濕法裝入色譜柱（樹(shù)脂柱床體積約 10 mL），分別制備濃度為 0.5、1.0、1.5、2.0 mg/mL（以總木脂素的含量計(jì)，均為175.00 mg）的五味子上樣液，以1BV/h的流速通過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附，收集流出液，水浴蒸干后測(cè)定總木脂素、總?cè)频暮?，?jì)算比吸附量，結(jié)果見(jiàn)圖1。
圖1 上樣液濃度對(duì)總木脂素總?cè)票任搅康挠绊?/p>
由圖1 結(jié)果可知當(dāng)上樣液濃度為1.5 mg/mL時(shí)，AB-8大孔吸附樹(shù)脂對(duì)總木脂素的比吸附量最大，為11.79 mg/g；當(dāng)上樣液濃度分別為0.5、1.5 mg/mL時(shí)，對(duì)總?cè)票任搅孔畲螅謩e為7.97、7.44 mg/g。以樹(shù)脂對(duì)總木脂素的吸附解析性能為主要考察指標(biāo)，兼顧總?cè)频奈浇馕雎?，最終確定1.5 mg/mL 為最佳上樣液濃度。
2.4.2 最大上樣量的考察
將110 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為1.5 mg/mL），以1BV/h的流速通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱（10.0 g）進(jìn)行吸附，分段收集流出液，每10 毫升一份，共接取11份，水浴蒸干測(cè)定其有效物質(zhì)的含量。以流出液體積為橫坐標(biāo)，流出液中有效物質(zhì)濃度為縱坐標(biāo)，繪制泄露曲線見(jiàn)圖2。
圖2 泄漏曲線
由圖2 泄漏曲線可知，上柱流出液達(dá)到7BV時(shí)，流出液中總木脂素濃度約為上樣液濃度（1.5 mg/mL）的10%，說(shuō)明總木脂素開(kāi)始泄漏，上柱液為4BV時(shí)，總?cè)崎_(kāi)始泄漏；以總木脂素為主要考察指標(biāo)，最終確定最大上樣量為70 mL。
2.4.3 水洗量的考察[10]
由于蒸餾水對(duì)木脂素和三萜的洗脫能力很弱，用蒸餾水洗滌可除去糖類等水溶性雜質(zhì)。配制70 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為1.5 mg/mL），以1BV/h的流速通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱（10.0 g），然后用蒸餾水以1BV/h的流速進(jìn)行洗脫，分段收集過(guò)柱流出液，每10 毫升收集1份共15份。用Molish 反應(yīng)檢測(cè)糖的反應(yīng)是否為陰性，9BV時(shí)Molish 反應(yīng)為陰性，故確定蒸餾水的體積為9BV。
2.4.4 洗脫溶劑體積分?jǐn)?shù)的考察[11]
配制70 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為1.5 mg/mL），以1BV/h的流速通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱（10.0 g），吸附完全后，用90 mL 蒸餾水以1BV/h的流速進(jìn)行洗脫，然后分別用10BV的體積分?jǐn)?shù)分別為10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95%的乙醇連續(xù)洗脫，洗脫流速為1BV/h，測(cè)定各個(gè)梯度洗脫液有效物質(zhì)的含量，結(jié)果見(jiàn)圖3、4。
圖3 洗脫溶劑體積分?jǐn)?shù)對(duì)有效物質(zhì)含量的影響
圖4 洗脫溶劑體積分?jǐn)?shù)對(duì)有效物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響
由圖3、4 結(jié)果可知用10%、20%、30%等低濃度乙醇洗脫所得組份中總木脂素和總?cè)频馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)較低，由90%，95%等高濃度乙醇洗脫所得組份中總木脂素和總?cè)频馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)也較低。綜合考慮終產(chǎn)品中總木脂素和總?cè)频暮亢唾|(zhì)量分?jǐn)?shù)，首先采用30%乙醇洗脫除去雜質(zhì)含量高組份，然后用80%乙醇洗脫得到有效物質(zhì)含量高的組分。
2.4.5 洗脫溶劑用量的確定
將70 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為1.5 mg/mL），以1BV/h的流速進(jìn)行上柱，通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱（10.0 g），90 mL 蒸餾水以1BV/h的流速洗脫樹(shù)脂柱，30%乙醇洗脫樹(shù)脂柱，流速為1BV/h，分段收集洗脫液，每10 毫升收集1份，共10份；然后用80%乙醇洗脫樹(shù)脂柱，流速為1BV/h，分段收集洗脫液，每10 毫升收集1份，共12份，水浴蒸干流出液，測(cè)定其總木脂素和總?cè)频暮浚Y(jié)果見(jiàn)圖5、6。
由圖5 結(jié)果表明當(dāng)30%乙醇洗脫用量為9BV時(shí)，累積固形物的質(zhì)量已達(dá)到總流出液固形物質(zhì)量的99%；圖6 結(jié)果表明當(dāng)80%乙醇洗脫用量為10BV時(shí)，可將98%以上的有效物質(zhì)含量高的組分洗脫下來(lái)，綜合考慮有效物質(zhì)的洗脫率、洗脫溶劑用量、洗脫時(shí)間等因素，最終選擇30%乙醇洗脫用量為9BV，80%乙醇洗脫用量為100 mL。
2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)
圖5 低濃度乙醇洗脫曲線
圖6 高濃度乙醇洗脫曲線
按照上述確定的純化五味子總木脂素總?cè)频墓に囍苽? 批樣品，測(cè)定其中總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲的含量? 批樣品中總木脂素含量分別為39.67%、39.59%、39.36%，平均值為39.55%；總?cè)频暮糠謩e為14.09%、13.84%、13.94%，平均值為13.96%；五味子醇甲含量分別為9.05%、8.89%、8.92%，平均值為8.95%；三者含量均顯著提高，分別提高了6.8、3.7、11.9倍。經(jīng)過(guò)一系列考察可知應(yīng)用大孔樹(shù)脂純化五味子總木脂總?cè)频墓に嚭侠怼⒖尚?，重現(xiàn)性較好。
3 討論
應(yīng)用大孔樹(shù)脂同時(shí)純化五味子總木脂素和總?cè)频难芯课匆?jiàn)報(bào)道。本文通過(guò)對(duì)5 種不同類型的大孔樹(shù)脂吸附解析性能考察，發(fā)現(xiàn)AB-8型大孔樹(shù)脂最適合五味子總木脂素總?cè)频木萍兓?。通過(guò)動(dòng)態(tài)吸附解析實(shí)驗(yàn)對(duì)各個(gè)工藝參數(shù)進(jìn)行考察，最終確定AB-8型樹(shù)脂最佳工藝條件。
本文首次采用梯度洗脫法同時(shí)純化五味子總木脂素總?cè)?，首先用低濃度乙醇洗脫?shù)脂柱以除去雜質(zhì)含量高的組分，然后用高濃度乙醇洗脫樹(shù)脂柱以獲得有效物質(zhì)含量高的組分。經(jīng)過(guò)純化后終產(chǎn)品中有效物質(zhì)的含量顯著提高，總木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)由5.80%提高到39.55%，總?cè)频馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)由3.76%提高到13.96%，五味子醇甲質(zhì)量分?jǐn)?shù)由0.75%提高到8.95%，分別提高了6.8、3.7、11.9倍。
目前應(yīng)用大孔樹(shù)脂分離純化五味子所得的終產(chǎn)品中有效物質(zhì)的含量較低，因此患者服藥量較大，并且過(guò)多的非有效成分可能會(huì)產(chǎn)生毒副作用。本文采用梯度洗脫法同時(shí)純化五味子總木脂素和總?cè)疲瑸楦呒兌任逦蹲佑行ЫM分的生產(chǎn)提供了理論依據(jù)，對(duì)傳統(tǒng)中藥五味子的開(kāi)發(fā)利用具有重要意義。
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精密稱取五味子醇甲0.515 mg，置于10 mL 容量瓶中，甲醇定容，搖勻即得。精密量取對(duì)照品溶液100、150、200、250、300、350 μL，分別加甲醇定容至 10 mL，在 250 nm處測(cè)定吸光度，以五味子醇甲濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為Y=115.14X+0.023 4，r=0.999 6，五味子醇甲在 0.021～0.072 mg 有良好的線性關(guān)系。
2.1.2 五味子總?cè)坪繙y(cè)定
精密稱取齊墩果酸4.760 mg，置于25 mL 容量瓶中，甲醇定容，搖勻即得。精密量取對(duì)照品溶液100、200、300、400、500、600 μL 揮干溶劑，加 0.2 mL 5%香草醛冰醋酸溶液，0.8 mL 高氯酸，搖勻后60℃水浴15 min，冷卻至室溫，加入5 mL 冰醋酸搖勻，于546 nm 處測(cè)定吸光度，以齊墩果酸質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為Y=7.972 7X-0.030 5，r=0.999 2，齊墩果酸在19.040～114.240 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.1.3 五味子醇甲含量測(cè)定
2.1.3.1 色譜條件 色譜柱為Cyncromis C18 柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇∶水=65∶35，檢測(cè)波長(zhǎng)為 250 nm，流速為1 mL/min，柱溫為室溫。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。
2.1.3.2 含量測(cè)定 精密稱取五味子醇甲對(duì)照品4.39 mg 置于25 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜，搖勻即得。分別精密吸取對(duì)照品溶液4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL，注入高效液相色譜儀，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到線性回歸方程Y=5×106X-155678，r=0.999 5，五味子醇甲在 0.702～2.118 μg 線性關(guān)系良好。
2.2 五味子上樣液的制備
五味子藥材粉碎，加入10倍量的95%乙醇，加熱回流3次，每次2 h，將醇提液冷卻后過(guò)濾，回收乙醇，濃縮得到五味子乙醇提取浸膏，加適量的水稀釋即得五味子上樣液（五味子乙醇提取浸膏中總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為5.80%、3.76%、0.75%）。
2.3 大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)篩選
2.3.1 靜態(tài)吸附性能考察
分別精密稱取不同類型已預(yù)處理的樹(shù)脂各2 g，置于250 mL 具塞錐形瓶中，加入40 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為 1.0 mg/mL），25℃恒溫條件下振蕩 24 h（100 r/min），充分吸附后，過(guò)濾，將濾液（吸附液）蒸干，測(cè)定其總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲含量，?jì)算比吸附量，結(jié)果見(jiàn)表1。
2.3.2 靜態(tài)解析性能考察
取過(guò)濾后的樹(shù)脂，加蒸餾水100 mL，25℃恒溫振蕩2 h（100 r/min），過(guò)濾后的樹(shù)脂中加入100 mL 體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，25℃恒溫振蕩 24 h（100 r/min），過(guò)濾，將水洗濾液和醇洗濾液合并蒸干，測(cè)定濾液（解析液）中總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲含量，?jì)算解析率，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 5種類型大孔樹(shù)脂的吸附和解吸性能
由表1 結(jié)果可知，與其他類型的樹(shù)脂相比，AB-8型樹(shù)脂對(duì)總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲的吸附解析性能最好，故選擇AB-8大孔樹(shù)脂進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。
2.4 AB-8型大孔樹(shù)脂吸附解析工藝條件優(yōu)化
2.4.1 上樣液濃度的影響
稱取10 g AB-8型大孔樹(shù)脂濕法裝入色譜柱（樹(shù)脂柱床體積約 10 mL），分別制備濃度為 0.5、1.0、1.5、2.0 mg/mL（以總木脂素的含量計(jì)，均為175.00 mg）的五味子上樣液，以1BV/h的流速通過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附，收集流出液，水浴蒸干后測(cè)定總木脂素、總?cè)频暮?，?jì)算比吸附量，結(jié)果見(jiàn)圖1。
圖1 上樣液濃度對(duì)總木脂素總?cè)票任搅康挠绊?/p>
由圖1 結(jié)果可知當(dāng)上樣液濃度為1.5 mg/mL時(shí)，AB-8大孔吸附樹(shù)脂對(duì)總木脂素的比吸附量最大，為11.79 mg/g；當(dāng)上樣液濃度分別為0.5、1.5 mg/mL時(shí)，對(duì)總?cè)票任搅孔畲螅謩e為7.97、7.44 mg/g。以樹(shù)脂對(duì)總木脂素的吸附解析性能為主要考察指標(biāo)，兼顧總?cè)频奈浇馕雎?，最終確定1.5 mg/mL 為最佳上樣液濃度。
2.4.2 最大上樣量的考察
將110 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為1.5 mg/mL），以1BV/h的流速通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱（10.0 g）進(jìn)行吸附，分段收集流出液，每10 毫升一份，共接取11份，水浴蒸干測(cè)定其有效物質(zhì)的含量。以流出液體積為橫坐標(biāo)，流出液中有效物質(zhì)濃度為縱坐標(biāo)，繪制泄露曲線見(jiàn)圖2。
圖2 泄漏曲線
由圖2 泄漏曲線可知，上柱流出液達(dá)到7BV時(shí)，流出液中總木脂素濃度約為上樣液濃度（1.5 mg/mL）的10%，說(shuō)明總木脂素開(kāi)始泄漏，上柱液為4BV時(shí)，總?cè)崎_(kāi)始泄漏；以總木脂素為主要考察指標(biāo)，最終確定最大上樣量為70 mL。
2.4.3 水洗量的考察[10]
由于蒸餾水對(duì)木脂素和三萜的洗脫能力很弱，用蒸餾水洗滌可除去糖類等水溶性雜質(zhì)。配制70 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為1.5 mg/mL），以1BV/h的流速通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱（10.0 g），然后用蒸餾水以1BV/h的流速進(jìn)行洗脫，分段收集過(guò)柱流出液，每10 毫升收集1份共15份。用Molish 反應(yīng)檢測(cè)糖的反應(yīng)是否為陰性，9BV時(shí)Molish 反應(yīng)為陰性，故確定蒸餾水的體積為9BV。
2.4.4 洗脫溶劑體積分?jǐn)?shù)的考察[11]
配制70 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為1.5 mg/mL），以1BV/h的流速通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱（10.0 g），吸附完全后，用90 mL 蒸餾水以1BV/h的流速進(jìn)行洗脫，然后分別用10BV的體積分?jǐn)?shù)分別為10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95%的乙醇連續(xù)洗脫，洗脫流速為1BV/h，測(cè)定各個(gè)梯度洗脫液有效物質(zhì)的含量，結(jié)果見(jiàn)圖3、4。
圖3 洗脫溶劑體積分?jǐn)?shù)對(duì)有效物質(zhì)含量的影響
圖4 洗脫溶劑體積分?jǐn)?shù)對(duì)有效物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響
由圖3、4 結(jié)果可知用10%、20%、30%等低濃度乙醇洗脫所得組份中總木脂素和總?cè)频馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)較低，由90%，95%等高濃度乙醇洗脫所得組份中總木脂素和總?cè)频馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)也較低。綜合考慮終產(chǎn)品中總木脂素和總?cè)频暮亢唾|(zhì)量分?jǐn)?shù)，首先采用30%乙醇洗脫除去雜質(zhì)含量高組份，然后用80%乙醇洗脫得到有效物質(zhì)含量高的組分。
2.4.5 洗脫溶劑用量的確定
將70 mL 五味子上樣液（總木脂素濃度為1.5 mg/mL），以1BV/h的流速進(jìn)行上柱，通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱（10.0 g），90 mL 蒸餾水以1BV/h的流速洗脫樹(shù)脂柱，30%乙醇洗脫樹(shù)脂柱，流速為1BV/h，分段收集洗脫液，每10 毫升收集1份，共10份；然后用80%乙醇洗脫樹(shù)脂柱，流速為1BV/h，分段收集洗脫液，每10 毫升收集1份，共12份，水浴蒸干流出液，測(cè)定其總木脂素和總?cè)频暮浚Y(jié)果見(jiàn)圖5、6。
由圖5 結(jié)果表明當(dāng)30%乙醇洗脫用量為9BV時(shí)，累積固形物的質(zhì)量已達(dá)到總流出液固形物質(zhì)量的99%；圖6 結(jié)果表明當(dāng)80%乙醇洗脫用量為10BV時(shí)，可將98%以上的有效物質(zhì)含量高的組分洗脫下來(lái)，綜合考慮有效物質(zhì)的洗脫率、洗脫溶劑用量、洗脫時(shí)間等因素，最終選擇30%乙醇洗脫用量為9BV，80%乙醇洗脫用量為100 mL。
2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)
圖5 低濃度乙醇洗脫曲線
圖6 高濃度乙醇洗脫曲線
按照上述確定的純化五味子總木脂素總?cè)频墓に囍苽? 批樣品，測(cè)定其中總木脂素、總?cè)?、五味子醇甲的含量? 批樣品中總木脂素含量分別為39.67%、39.59%、39.36%，平均值為39.55%；總?cè)频暮糠謩e為14.09%、13.84%、13.94%，平均值為13.96%；五味子醇甲含量分別為9.05%、8.89%、8.92%，平均值為8.95%；三者含量均顯著提高，分別提高了6.8、3.7、11.9倍。經(jīng)過(guò)一系列考察可知應(yīng)用大孔樹(shù)脂純化五味子總木脂總?cè)频墓に嚭侠怼⒖尚?，重現(xiàn)性較好。
3 討論
應(yīng)用大孔樹(shù)脂同時(shí)純化五味子總木脂素和總?cè)频难芯课匆?jiàn)報(bào)道。本文通過(guò)對(duì)5 種不同類型的大孔樹(shù)脂吸附解析性能考察，發(fā)現(xiàn)AB-8型大孔樹(shù)脂最適合五味子總木脂素總?cè)频木萍兓?。通過(guò)動(dòng)態(tài)吸附解析實(shí)驗(yàn)對(duì)各個(gè)工藝參數(shù)進(jìn)行考察，最終確定AB-8型樹(shù)脂最佳工藝條件。
本文首次采用梯度洗脫法同時(shí)純化五味子總木脂素總?cè)?，首先用低濃度乙醇洗脫?shù)脂柱以除去雜質(zhì)含量高的組分，然后用高濃度乙醇洗脫樹(shù)脂柱以獲得有效物質(zhì)含量高的組分。經(jīng)過(guò)純化后終產(chǎn)品中有效物質(zhì)的含量顯著提高，總木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)由5.80%提高到39.55%，總?cè)频馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)由3.76%提高到13.96%，五味子醇甲質(zhì)量分?jǐn)?shù)由0.75%提高到8.95%，分別提高了6.8、3.7、11.9倍。
目前應(yīng)用大孔樹(shù)脂分離純化五味子所得的終產(chǎn)品中有效物質(zhì)的含量較低，因此患者服藥量較大，并且過(guò)多的非有效成分可能會(huì)產(chǎn)生毒副作用。本文采用梯度洗脫法同時(shí)純化五味子總木脂素和總?cè)疲瑸楦呒兌任逦蹲佑行ЫM分的生產(chǎn)提供了理論依據(jù)，對(duì)傳統(tǒng)中藥五味子的開(kāi)發(fā)利用具有重要意義。
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