利培酮和消幻湯合并使用對(duì)谷氨酸功能低下致小鼠高活動(dòng)性與偏好行為的影響

張 燕 楊春娟 劉飛虎 肖 凡 袁 方

1.西安市精神衛(wèi)生中心，陜西西安 710061；2.西安醫(yī)學(xué)院，陜西西安 710068；3.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽(yáng) 712000

研究報(bào)道谷氨酸功能障礙可能參與了精神分裂癥的發(fā)病機(jī)制，許多學(xué)者證明谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（N-me thy-l D-aspartate，NMDA）受體的拮抗劑地卓西平馬來(lái)酸（MK-801）能引起擬精神分裂癥的癥狀和認(rèn)知功能損害[1-2]。因而MK-801已成為許多研究者建立精神分裂癥動(dòng)物模型的工具藥[3-4]。精神分裂癥是臨床最常見(jiàn)的社會(huì)危害性大，治愈率低的精神疾病[5]。雖然非典型抗精神病藥如利培酮可以明顯改變精神分裂癥精神癥狀，但其不良反應(yīng)較多較常見(jiàn)，使患者服藥的依從性下降，故降低了療效[6]。隨著研究的深入，中西藥物合并使用治療精神分裂癥已顯示出明顯的優(yōu)勢(shì)及前景[7]。西安市精神衛(wèi)生中心將消幻湯（又名：清幻靈）主要用于肝膽濕熱引起的幻聽(tīng)，情緒不穩(wěn)，脈玄舌尖紅，苔薄黃的患者，臨床應(yīng)用已四十余年。而且經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)查閱和前期研究表明，消幻湯中主要組成成分的龍膽草、磁石、酸棗仁、柴胡等對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)均有明顯的調(diào)節(jié)作用[8-10]。所以本實(shí)驗(yàn)研究利培酮和消幻湯合并使用對(duì)于MK-801誘導(dǎo)谷氨酸低下精神分裂癥小鼠模型的作用，為中西藥物合并使用治療精神分裂癥提供更多基礎(chǔ)研究資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

70只健康昆明種小鼠雌雄各半，體質(zhì)量為（20±2）g，清潔級(jí)，購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類飼料飼養(yǎng)且自由飲食，維持室溫（22±1）℃。適應(yīng)3 d后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥物與試劑

MK-801（購(gòu)自美國(guó)Sigma公司）溶于生理鹽水。利培酮（購(gòu)自西安市楊森制藥有限公司，批號(hào)：H2001 0309）研成粉末以蒸餾水溶解。消幻湯方劑藥材（購(gòu)自陜西省老百姓大藥房），將磁石加入水中煮沸10 min，后加其余藥物煮沸40 min，過(guò)濾取汁，二煎30 min，兩次濾液合并濃縮成每毫升含生藥0.799 g的藥液。

1.3 主要儀器

BA-200避暗儀、DT-200跳臺(tái)儀、ZZ-6自主活動(dòng)儀均購(gòu)自成都泰盟科技有限公司。

1.4 分組與造模

昆明種小鼠70只隨機(jī)分為五組，每組14只，適應(yīng)3 d，其中一組作為空白組腹腔注射給予生理鹽水，其余四組連續(xù)腹腔注射 MK-801[（0.072 mg/mL，5 mL/（kg·d）]2 周。

1.5 給藥情況

造模后給藥，隨機(jī)編為模型組、利培酮組、消幻湯組、利培酮和消幻湯合并使用組（簡(jiǎn)稱合并組）。其中空白組、模型組灌胃給予蒸餾水，利培酮組、消幻湯組、合并組，分別給與利培酮[0.121 mg/mL，10 mL/（kg·d）]、消幻湯[（0.799 g/mL，10 mL/（kg·d）]、利培酮[（0.242 mg/kg，5 mL/（kg·d）]和消幻湯[（1.598 g/mL，5 mL/（kg·d）]。

1.6 方法

1.6.1 自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn) 自主活動(dòng)儀由可分離反應(yīng)箱和微電腦控制器組成，同時(shí)對(duì)6只小鼠進(jìn)行自主測(cè)試實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前，各組小鼠均為健康活潑的小鼠，輕捉拿小鼠，放入活動(dòng)箱內(nèi)先適應(yīng)3 min后開(kāi)始測(cè)定5 min小鼠站立和活動(dòng)次數(shù)。 每次實(shí)驗(yàn)均在 8∶00～10∶00 和 16∶00～18∶00進(jìn)行測(cè)驗(yàn)，記錄每組小鼠站立和活動(dòng)次數(shù)。

1.6.2 避暗法實(shí)驗(yàn)[11]被動(dòng)回避條件反射箱大小為36 cm×12 cm×12 cm。分明暗兩間，明間頂蓋上方置有小臺(tái)燈，暗間底部安銅柵，通以33 V、50 Hz伏電流，明暗兩室之間有一直徑為3 cm的洞口，反射連接一記時(shí)器，記錄動(dòng)物從明間通過(guò)洞口進(jìn)入暗間的潛伏期。實(shí)驗(yàn)前將避暗潛伏期大于180 s的小鼠棄去不用。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小白鼠頭部背著洞口放入明間，小鼠一進(jìn)入暗間立即受到電擊，而記時(shí)器則同時(shí)停止記時(shí)，取出小鼠，記錄每組小鼠進(jìn)入暗間的平均潛伏期。

1.6.3 跳臺(tái)法實(shí)驗(yàn)[11]實(shí)驗(yàn)裝置為（10 cm×10 cm×60 cm）被動(dòng)回避條件反射箱，用不透明黑色塑料板分隔成6間，箱底有銅柵，通以32 V電流，每間置一橡皮墊（高和直徑均為4.5 cm）作為動(dòng)物回避電擊，動(dòng)物的正常反應(yīng)是跳回橡皮墊上，為此訓(xùn)練10 min并紀(jì)錄2 min的潛伏時(shí)間。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用軟件SPSS 10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩獨(dú)立樣本的計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)；多組間的比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 預(yù)篩及造模結(jié)果

通過(guò)避暗法訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)之后，空白組、模型組、利培酮組、消幻湯組和合并組篩選后只數(shù)分別為10、11、10、10、11只。造模結(jié)束后，以上各組的平均體重分別為 24.54、24.10、24.01、24.27、24.42 g， 組間小鼠只數(shù)和體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

由表1可知，在造模結(jié)束時(shí)，模型組動(dòng)物活動(dòng)次數(shù)明顯增加，第2、6周模型組的小鼠站立次數(shù)約比空白組多10次。而在隨后的4周安慰劑干預(yù)下，模型組隨著時(shí)間推移，高活動(dòng)性有所下降，但平均活動(dòng)次數(shù)仍比空白組多5次。造模2周末，模型組避藥潛伏時(shí)間較空白組延長(zhǎng)約30 s，但模型組的跳臺(tái)潛伏期卻縮短了3 s。

表1 空白組與模型組測(cè)試項(xiàng)目結(jié)果（±s）

表1 空白組與模型組測(cè)試項(xiàng)目結(jié)果（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05

第2周末第6周末空白組模型組空白組模型組10 11 10 11 48.8±11.9 54.3±14.0 46.5±11.3 56.3±7.6 11.3±14.5 36.8±16.2*11.6±11.3 17.4±7.6 230.0±34.8 260.2±6.9 241.2±7.8 255.9±23.5 98.5±34.3 95.5±45.6 117.0±9.4 104.3±28.5測(cè)試時(shí)間 組別 只數(shù) 站立次數(shù)（次）活動(dòng)次數(shù)（次）避暗潛伏期（s）跳臺(tái)潛伏期（s）

2.2 利培酮和消幻湯合并使用對(duì)自主探究活動(dòng)的影響

給藥后，利培酮組、利培酮及消幻湯合并使用組站立次數(shù)分別為38.5、36.6次，均低于模型組約20次。給藥后，利培酮組、合并組活動(dòng)次數(shù)分別為9.0、8.6次，均低于模型組約9次。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 利培酮和消幻湯合并使用對(duì)小鼠偏好行為的影響

用避暗儀測(cè)小鼠嗜黑暗偏好行為的變化，給藥4周后，模型組潛伏期縮短4.4 s，利培酮組、消幻湯組、合并組分別延長(zhǎng)13.9、15.0、34.1 s；與模型組比較，合并組潛伏期延長(zhǎng)35.5 s（P＜ 0.05），見(jiàn)表3。

表2 小鼠自主探究活動(dòng)的結(jié)果（次，±s）

表2 小鼠自主探究活動(dòng)的結(jié)果（次，±s）

模型組利培酮組消幻湯組合并組11 10 10 11 56.3±7.6 38.5±26.4 53.4±6.7 36.6±23.9 17.4±7.6 9.0±26.4 15.3±3.1 8.6±23.9組別 只數(shù) 站立次數(shù) 活動(dòng)次數(shù)

表3 小鼠嗜黑暗偏好行為的觀察結(jié)果（s，±s）

表3 小鼠嗜黑暗偏好行為的觀察結(jié)果（s，±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05

模型組利培酮組消幻湯組合并組11 10 10 11 260.2±6.9 257.6±24.5 254.9±40.0 259.6±25.1 255.9±23.5 271.6±4.5 270.0±23.7 293.8±6.4-4.4 13.9 15.0 34.1*組別 只數(shù) 造模潛伏期 給藥潛伏期 潛伏期延長(zhǎng)時(shí)間

用跳臺(tái)儀測(cè)小鼠嗜角落偏好行為的變化，給藥4周后，模型組、利培酮組、消幻湯組、合并組平均潛伏期分別延長(zhǎng) 8.8、16.8、18.1、20.2 s。 其中，模型組延長(zhǎng)時(shí)間要比上述3組短近10 s，見(jiàn)表4。

表4 小鼠嗜角落偏好行為的觀察結(jié)果（s，±s）

表4 小鼠嗜角落偏好行為的觀察結(jié)果（s，±s）

造模組利培酮組消幻湯組合并組11 10 10 11 95.5±45.6 96.6±33.9 98.0±40.2 96.3±36.3 104.3±28.5 113.5±19.3 114.4±14.8 118.4±7.7 8.8 16.8 18.1 20.2組別 只數(shù) 造模潛伏期 給藥潛伏期 潛伏期延長(zhǎng)時(shí)間（s）

3 討論

精神分裂癥在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中屬“癲病”和“狂病”范疇，病位在神機(jī)，與肝膽心脾有關(guān)，主要是由于氣滯、痰結(jié)、血瘀等因素導(dǎo)致臟氣不平、陰陽(yáng)失調(diào)、神機(jī)逆亂而出現(xiàn)情志失調(diào)[12-13]。根據(jù)該病特點(diǎn)，消幻湯主要針對(duì)肝膽實(shí)熱所引起的神志失常、情志失調(diào)、虛妄見(jiàn)聞等癥狀所設(shè)，通過(guò)疏肝瀉熱，清心活血，安神定志之功效，而調(diào)理氣血陰陽(yáng)，達(dá)到治療疾病的目的。由于大部分精神分裂癥患者缺乏自知力，治療初期需盡快控制癥狀以減少危險(xiǎn)情況的發(fā)生，臨床上采用中西藥結(jié)合的治療方法，可減輕治療中的不良反應(yīng)[14-16]。

本實(shí)驗(yàn)自主活動(dòng)儀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，連續(xù)腹腔注射MK-801（0.072 mg/mL）兩周造模誘導(dǎo)，空白組，模型組，合并組自主活動(dòng)明顯增加，其探究活動(dòng)較空白組相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。蘇允愛(ài)等[4]結(jié)果也表明，MK-801誘導(dǎo)谷氨酸功能低下精神分裂癥模型小鼠的自主性活動(dòng)增多。給藥后，消幻湯組探究活動(dòng)減少次數(shù)不明顯，則說(shuō)明消幻湯單獨(dú)使用對(duì)中樞沒(méi)有抑制作用，僅起到調(diào)節(jié)作用，利培酮對(duì)中樞有明顯抑制作用，而消幻湯和利培酮合并使用對(duì)小鼠中樞有一定的溫和抑制作用。李光華等[5]結(jié)果也表明消幻湯成份中的磁石對(duì)小鼠的中樞有調(diào)節(jié)作用。

避暗儀和跳臺(tái)儀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，消幻湯組避暗潛伏期和跳臺(tái)潛伏期延長(zhǎng)時(shí)間均高于利培酮組，則消幻湯的酸棗仁和柴胡等成份可能對(duì)小鼠的并對(duì)損害學(xué)習(xí)記憶有保護(hù)作用。侯建平等[6]的結(jié)果也表明，消幻湯成份酸棗仁能增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力的作用。季吉等[17]研究適當(dāng)劑量的柴胡注射液在一定時(shí)間內(nèi)具有提高小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的功效，該作用可能與伴隨的腦組織抗氧化能力提高和NO含量改變有關(guān)。合并組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力增強(qiáng)促使小鼠遠(yuǎn)離黑暗和角落的電擊傷害。

本研究提示，利培酮藥效雖強(qiáng)，但對(duì)中樞系統(tǒng)明顯抑制作用，而消幻湯藥效溫和，僅對(duì)中樞系統(tǒng)起調(diào)節(jié)作用，消幻湯對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的保護(hù)作用強(qiáng)于利培酮。利培酮和消幻湯兩種藥物合并使用療效優(yōu)于利培酮或消幻湯單獨(dú)使用療效。利培酮和消幻湯合并使用充分驗(yàn)證中西藥結(jié)合治療可以揚(yáng)各自之長(zhǎng)，避各自之短，中西藥合用的臨床療效可能優(yōu)于單純中藥或單純西藥治療，這對(duì)于應(yīng)用合適藥物治療精神分裂癥有十分重要的意義。

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