環(huán)氧化酶2抑制劑聯(lián)合化療藥對人肺癌裸鼠移植瘤生長和淋巴轉(zhuǎn)移的影響

王 娜 (邢臺市人民醫(yī)院急診科，河北 邢臺 054000)

研究表明環(huán)氧化酶-2(COX-2)，血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)，血管內(nèi)皮生長因子受體-3(VEGFR-3)，生存素(surviving)及 β-連環(huán)素(β-catenin)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關，故目前許多實驗室通過對上述指標的監(jiān)測來判定抗腫瘤藥物的效果及腫瘤的發(fā)展情況〔1〕。動物實驗表明COX-2抑制劑能夠抑制腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移，并增強化療藥物的效果〔2〕。本次觀察COX-2抑制劑聯(lián)合化療藥對人肺癌裸鼠移植瘤的生長和淋巴轉(zhuǎn)移的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 選取30只BALB/c雄性裸小鼠，體重20～25 g，均購自天津天垚生物科技有限公司，均在無特定病原體的IVC環(huán)境中飼養(yǎng)，所用飼料及飲用水均無菌。

1.2 方法 將人肺癌A549細胞置于DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含小牛血清、青霉素及鏈霉素，培養(yǎng)基放置于溫度恒定為37℃，CO2濃度為5%的溫箱內(nèi)。待70% ～80%細胞貼壁生長并融合時，使用胰蛋白酶進行消化傳代。挑取處于對數(shù)生長期的細胞再次進行消化與洗滌，使用不含牛血清的培養(yǎng)基對其進行稀釋，并將細胞密度調(diào)整至1×107/ml。將完成培養(yǎng)的細胞制成細胞懸液，使用注射器裝載2 ml上述細胞懸液注射至裸鼠右側(cè)腋部皮下。待所有小鼠的移植瘤的平均直徑生長至約4 mm后，將30只小鼠按隨機數(shù)字表法隨機分成實驗組與對照組，兩組均為15只。實驗組腹腔注射奧沙利鉑甘露醇注射液，每次 10 ml/kg，同時采用尼美舒利灌胃給藥，劑量20 mg·kg－1·d－1。對照組僅接受腹腔注射奧沙利鉑甘露醇注射液，劑量與實驗組相同。每6 d測量1次小鼠移植瘤的體積，用游標卡尺量出腫瘤的長徑(a)、短徑(b)，用公式V=ab2/2計算體積，并繪制移植瘤的生長曲線。30 d后，將所有小鼠處死，切除移植瘤，分別使用免疫組化法與實時定量PCR法測定裸鼠移植瘤組織中 COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，Survivin及 βcatenin蛋白的積分吸光度值與mRNA的表達水平。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析，數(shù)據(jù)資料以±s表示，組間比較使用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 兩組腫瘤生長情況對比 用藥30 d后，實驗組移植瘤體積為(562.84±197.43)mm3，對照組為(812.35±105.74)mm3，兩組移植瘤體積的差異比較有統(tǒng)計學意義(t=4.315，P＜0.05)。見圖1。

2.2 兩組移植瘤中 COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，Survivin及β-catenin蛋白積分吸光度值及mRNA表達水平比較 見表1，表2。實驗組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及βcatenin蛋白的積分吸光度值及mRNA表達水平均高于對照組(P ＜0.05)。

表1 實驗組與對照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin蛋白的積分吸光度值比較(±s，n=15)

表1 實驗組與對照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin蛋白的積分吸光度值比較(±s，n=15)

-catenin實驗組 8 412±1 496 8 403±1 445 8 415±1 813 5 513±1 488 8 32組別 COX-2 VEGF-C VEGFR-3 survivin β 8±1 734對照組 16 205±2 195 15 392±2 189 14 397±2 317 9 825±1 791 10 227±2 031 t值 11.362 10.320 7.870 7.172 2.754 P值0.000 0.000 0.000 0.000 0.010

表2 實驗組與對照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin mRNA表達水平對比(±s，n=15)

表2 實驗組與對照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin mRNA表達水平對比(±s，n=15)

-catenin實驗組 0.842±0.121 0.603±0.019 0.658±0.049 0.325±組別 COX-2 VEGF-C VEGFR-3 survivin β 0.075 0.394±0.029對照組 1.368±0.197 1.256±0.175 1.371±0.068 0.647±0.061 0.442±0.028 t值 8.812 14.363 32.947 12.900 4.612 P值0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

圖1 實驗組與對照組移植瘤的生長曲線

3 討論

流行病學調(diào)查的結(jié)果顯示全球每年的新發(fā)肺癌病例約為100萬例，其中我國每年的新發(fā)病例約為21萬例，且每年死于肺癌的國人約為60萬〔3～6〕。由于中晚期肺癌常發(fā)生轉(zhuǎn)移，故局部治療的效果不明顯，而化療或靶向治療等全身性的藥物治療在中晚期肺癌的治療中占據(jù)了絕對的位置。

肺癌最常見的轉(zhuǎn)移途徑是淋巴轉(zhuǎn)移，研究表明COX-2具有促進腫瘤細胞及內(nèi)部血管的生成與增殖、加快腫瘤轉(zhuǎn)移與侵潤的作用，并能夠?qū)⑶爸掳┪镔|(zhì)轉(zhuǎn)化為致癌物質(zhì)以此促進腫瘤的進一步惡化。大量研究表明長時間使用非甾體類抗炎藥能夠降低惡性腫瘤的發(fā)病危險，并能夠抑制腫瘤細胞的生長〔7〕。目前針對抑制COX-2的分子靶向治療在臨床逐漸被普及，尼美舒利作為一種選擇性較高的COX-2抑制劑被用于惡性腫瘤的預防與治療。相比于傳統(tǒng)的非甾體類抗炎藥，尼美舒利不會抑制胃腸道黏膜前列腺素的合成，故患者的胃腸道副反應較少。奧沙利鉑是帶三代鉑類抗腫瘤藥，其毒性較卡鉑及順鉑大大降低，對部分耐受鉑類藥物的腫瘤也有較好的作用。本研究結(jié)果與文獻報道的結(jié)果相同〔8〕，提示COX-2抑制劑與化療藥物聯(lián)合使用在抑制腫瘤細胞的生長中有協(xié)同作用。

VEGF-C與其受體VEGFR-3結(jié)合之后能夠?qū)C體內(nèi)成熟淋巴管的生成進行調(diào)節(jié)，并介導腫瘤細胞的淋巴道轉(zhuǎn)移。研究表明COX-2能夠催化前列腺素E2與其受體結(jié)合并激活，繼而促進人表皮生長因子受體磷酸化，最后增強VEGF-C基因的表達與轉(zhuǎn)錄，造成腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移〔9〕。survivin是目前為止發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子，能夠通過與caspase結(jié)合而使其活性受到抑制，起到抑制細胞凋亡的作用。survivin在正常組織中幾乎不表達，主要分布在惡性腫瘤組織中。研究表明COX-2的高表達使得survivin的泛素化得到抑制，并加強了survivin的穩(wěn)定性，而當COX-2的活性受到抑制時，survivin的表達也隨之發(fā)生下降。但當survivin受到RNA的干擾封閉后，COX-2的表達并不發(fā)生改變，故有學者推斷COX-2位于survivin的上游，并能夠調(diào)控survivin的表達〔10〕。β-catenin是一種在機體生長發(fā)育過程中具有指導作用的細胞骨架成分，但在腫瘤細胞中，其能夠通過對下游靶基因c-myc與cyclinD1的調(diào)節(jié)來促進腫瘤細胞的浸潤與轉(zhuǎn)移。Noda等發(fā)現(xiàn)E-cadherin與β-catenin關系密切，而COX-2抑制劑可以對E-cadherin進行上調(diào)來抑制β-catenin，進而抑制腫瘤細胞的生長與轉(zhuǎn)移〔11，12〕。綜上所述，COX-2抑制劑聯(lián)合化療藥具有協(xié)同抗腫瘤的作用，并抑制了腫瘤細胞的生長與淋巴轉(zhuǎn)移，值得推廣。

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