乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中多藥耐藥基因的表達(dá)及意義

王 妍 李德昌 鄭吉春 任 力 (欒城縣醫(yī)院，河北 石家莊 05430)

化療是乳腺癌綜合治療最主要手段之一，術(shù)前新輔助化療可以有效降低乳腺癌的腫瘤大小、分級(jí)及預(yù)后，術(shù)后化療可以預(yù)防乳腺癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)?；熀腿橄侔┑陌l(fā)展有密切關(guān)系，但是目前化療不能取得治愈性療效，導(dǎo)致化療失敗的原因主要是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。影響乳腺癌預(yù)后的指標(biāo)主要包括乳腺癌腫瘤大小，組織學(xué)類型及雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、C-erBb-2的表達(dá)。本文通過(guò)免疫組化法研究未行化療的乳腺癌組織中胎盤型谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶π(GST-π)、P-糖蛋白(P-gp)、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ(Topo-Ⅱ)及多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)的表達(dá)特點(diǎn)，綜合分析其與臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集我科2003年1月至2011年5月經(jīng)病理證實(shí)為浸潤(rùn)性乳腺癌的標(biāo)本83例(按2003年WHO乳腺腫瘤組織學(xué)分類)。所有病例均為女性，年齡29～82歲，平均54歲，所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放化療。另選擇同期手術(shù)治療乳腺纖維腺瘤20例及癌旁正常乳腺組織15例作為對(duì)照。

1.2 方法 采用免疫組化染色SP法，即用型GST-π、P-GP、Topo-Ⅱ、MRP鼠抗人單克隆抗體，通用型 SP檢測(cè)試劑盒(SP-9000)、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性結(jié)腸癌組織作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 GST-π定位于細(xì)胞質(zhì);P-gp、MRP定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì);Topo-Ⅱ和ER、PR定位于細(xì)胞核。部位中出現(xiàn)粗細(xì)一致的棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色。在陽(yáng)性顆粒密集部位隨機(jī)選取10個(gè)200倍視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中細(xì)胞的染色情況，取平均值。以其中陽(yáng)性細(xì)胞占全部細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)對(duì)其表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行分級(jí):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性，10% ～26%陽(yáng)性定為弱陽(yáng)性(+)，25% ～75%明顯陽(yáng)性定為中度陽(yáng)性()，＞75%為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用兩個(gè)(或多個(gè))樣本率比較的χ2檢驗(yàn)，正態(tài)分布的計(jì)量資料采用隨機(jī)設(shè)計(jì)的兩總體均數(shù)的t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

乳腺癌組織與癌旁正常組織的MRP表達(dá)明顯高于乳腺纖維腺瘤，而且與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移與否、組織學(xué)分級(jí)及年齡均無(wú)明顯相關(guān)性，Topo-Ⅱ的表達(dá)與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移與否、組織學(xué)分級(jí)及年齡均無(wú)明顯相關(guān)性。癌旁正常組織與乳腺纖維腺瘤組織中P-gp、Topo-Ⅱ、GST-π未見明顯差異。GST-π和P-gp的表達(dá)呈正相關(guān)，GST-π和Topo-Ⅱ的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)，P-gp和Topo-Ⅱ的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)，見表1。

表1 P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ、MRP陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系〔n(%)〕

3 討論

MDR是指腫瘤細(xì)胞被一種藥物誘發(fā)耐藥后，同時(shí)對(duì)其他多種結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制完全不同的藥物產(chǎn)生交叉耐藥的一種現(xiàn)象〔1〕。它是化療后的獲得性耐藥，目前乳腺癌化療不能取得治愈性療效，導(dǎo)致化療失敗的原因主要是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。MDR產(chǎn)生的機(jī)制很多，目前的研究主要與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、耐藥基因產(chǎn)物和腫瘤細(xì)胞的凋亡基因有關(guān)，其中耐藥基因擴(kuò)增，NDA拓?fù)洚悩?gòu)酶表達(dá)，P-gp的過(guò)表達(dá)，GST-π的細(xì)胞毒系統(tǒng)作用的增強(qiáng)隨著新輔助化療的開展成為近年研究熱點(diǎn)。

MRP是ABC(ATP binding cassette)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員，定位于染色體16p13.1。目前MRP產(chǎn)生耐藥的作用機(jī)制主要為減少還原型谷胱甘肽的協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，谷胱甘肽與藥物結(jié)合其產(chǎn)物通過(guò)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)化療藥物濃度從而達(dá)到耐藥目的〔2〕。許多研究表明在乳腺癌組織中MRP的表達(dá)與多藥耐藥基因MDR1的表達(dá)存在明顯相關(guān)性，本次研究也證實(shí)MRP呈表達(dá)水平。P-GP和MRP同屬ABC跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員，定位于染色體7q21.1，在ATP的參與下可與多種藥物結(jié)合并以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)方式將結(jié)合產(chǎn)物泵出細(xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度〔3〕。GST-π是GST家族中一組具有解毒功能的同工酶，將谷胱甘肽與化療藥物相結(jié)合，降低藥物的細(xì)胞毒性，減弱腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。它與谷胱甘肽的氧化還原狀態(tài)相關(guān)，受MRP耐藥機(jī)制的調(diào)節(jié)。

Topo-Ⅱ參與真核細(xì)胞DNA的轉(zhuǎn)錄、翻譯、復(fù)制及染色體分離功能，是調(diào)節(jié)核酸空間結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化、控制核酸生理功能的關(guān)鍵酶。在腫瘤細(xì)胞的凋亡機(jī)制中起主要作用〔4〕。Topo-Ⅱ活性降低或含量減少影響其介導(dǎo)的MDR機(jī)制，降低細(xì)胞的抗癌活性。

本文提示這三者之間可能存在著相互調(diào)節(jié)機(jī)制。MRP與P-GP耐藥譜雖然相似，但MRP對(duì)疏水性抗癌藥物耐藥，P-GP對(duì)親脂性抗癌藥物耐藥。GST-π陽(yáng)性者對(duì)烷化劑、鉑類、蒽環(huán)類等化合物產(chǎn)生耐藥〔5〕。Topo-Ⅱ的靶點(diǎn)藥物為喜樹堿、蒽環(huán)類及鬼臼毒素類等藥物〔6〕。最近有研究表明，MRP的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)藥物的重新分布，從而產(chǎn)生新的耐藥性〔7，8〕。乳腺癌腫瘤術(shù)后同時(shí)檢測(cè) GST-π、P-GP、Topo-Ⅱ的表達(dá)可以對(duì)化療方案的制訂提出參考方案，有效提高化療效果。本文提示MRP的表達(dá)不受疾病發(fā)展的影響，可能作為一種隱性特征存在于癌癥患者的體質(zhì)中;Topo-Ⅱ與腫瘤的增殖情況有關(guān)，對(duì)乳腺癌的預(yù)后有意義。最近有研究表明，MRP的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)藥物的重新分布，從而產(chǎn)生新的耐藥性〔9〕。

1 魏學(xué)明，顧國(guó)利.胃癌組織中多藥耐藥基因的表達(dá)特點(diǎn)及其對(duì)化療的指導(dǎo)意義〔J〕.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2009;18(11):980-92.

2 Dean M.ABC transporters，drug resistance，and cancer stem cells〔J〕.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2009;14(1):329.

3 Robillard KR，Hoque MT，Bendayan R.Expression of ATP-binding cassette membrane transporters in rodent and human sertoli cells:relevance to the permeability of antiretroviral therapy at the blood-testis barrier〔J〕.J Pharmacol Exp Ther，2012:340(1):96-108.

4 Cardoso F，Durbecq V，Larsimort D，et al.Correlation between complete response to anthracycline-based chemotherapy and topoisomerase-Ⅱalpha gene amplification and pretein overexpression in locally advanced/metasatic breast cancer〔J〕.Int J Oncol，2004;24(1):201-9.

5 王姝姝.乳腺癌新輔助化療基因組標(biāo)志物的建立:EORTC 10994/B IG 002 01臨床試驗(yàn)的亞組研究〔J〕.中華乳腺病雜志:電子版，2008;2(3):369-74.

6 Brase JC，Schmidt M，F(xiàn)ischbach T，et al.ERBB and TOP-A in breast cancer:a comprehensive analysis of gene amplification，RNA levels，and protein expression and their influence on prognosis and prediction〔J〕.Clin Cancer Res，2010;16(8):2391-401.

7 劉新蘭，王 程，陳 萍.乳腺癌組織中多藥耐藥相關(guān)基因產(chǎn)物表達(dá)的研究〔J〕.寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008;30(4):4182-200.

8 譚 敏，賓曉農(nóng)，何清蓮，等.乳腺癌組織中相關(guān)耐藥基因表達(dá)的研究〔J〕.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2005;22(3):200-2.

9 Suiowiak P，Materna V，Matkow SR，et al.Relationship between the expression of cyclooxygenase and MDR1/pglycoprotein in invasive breast cancers and their prognostic significance〔J〕.Breast Cancer Res，2005;7(8):862-71.