VEGF-C，VEGF-D和VEGFR-3在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

徐 陽(yáng) (天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院肛腸外科，天津 300000)

結(jié)直腸癌 (CRC)是危害人類生命常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，2008年美國(guó)全球癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告其致死率為5.07%〔1〕。且發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)〔2〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)的高表達(dá)與人體中多種腫瘤的發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，在CRC中的過(guò)表達(dá)可能預(yù)后不良。然而也有研究認(rèn)為VEGF在預(yù)測(cè)CRC方面并無(wú)多大的價(jià)值〔3，4〕。本研究通過(guò)分析 VEGF-C，VEGF-D和及其受體 (VEGFR)-3在CRC患者中的表達(dá)，探討其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1.2.2 結(jié)果判定 免疫反應(yīng)程度評(píng)分:0分為陰性;1分為免疫細(xì)胞＜5%;2分為5% ～50%;3分為＞50%。染色程度評(píng)分:0分為陰性;1分為染色弱;2分為染色中等;3分為染色強(qiáng)。最終結(jié)果根據(jù)上述兩項(xiàng)進(jìn)行評(píng)定，統(tǒng)計(jì)分析時(shí)將中等和強(qiáng)免疫反應(yīng)記為陽(yáng)性〔6〕。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件行χ2檢驗(yàn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2008年1月至2012年6月外科手術(shù)切除CRC標(biāo)本134例，其中男68例，女66例，平均年齡(67.24±13.58)歲。手術(shù)前記錄患者的年齡、性別、臨床癥狀、病史、腫瘤位置、組織學(xué)分級(jí)。腫瘤位置按照結(jié)腸和直腸記錄、分類。根據(jù)國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)〔5〕進(jìn)行分期:Ⅰ期19例，Ⅱ期48例，Ⅲ期39例，Ⅳ期28例。病理類型:管狀腺癌84例、黏液腺癌30例，未分化20例。另取腫瘤周?chē)Ｉ掀ぜ?xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。所有樣本均用4%甲醛固定，石蠟包埋后存檔。試劑:VEGF-C(ab135506)、VEGF-D(ab155288)和VEGFR-3(ab27278)抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)法 樣本經(jīng)過(guò)脫蠟和再水合。3 μm切片置于0.01 mol/L的檸檬酸緩存液 (pH 6.0)，98℃加熱20 min修復(fù)抗原表位。0.3%雙氧水溶液消除內(nèi)源性過(guò)氧化酶活性。一抗4℃孵育過(guò)夜，二抗37℃孵育0.5 h。二氧基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木精復(fù)染。陰性對(duì)照不孵育一抗，其余同上。脫水，中性樹(shù)脂封片，顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在CRC中的表達(dá) 與正常上皮細(xì)胞相比，腫瘤組織VEGF-C出現(xiàn)過(guò)表達(dá) (P＜0.05)。而VEGF-D和 VEGFR-3均未出現(xiàn)過(guò)表達(dá)。見(jiàn)表1。并且，VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在CRC中的表達(dá)具有相關(guān)性(χ2=109.419、134.552，P ＜0.05)。

表1 腫瘤組織與正常上皮組織VEGF-C、D、VEGPR-3陽(yáng)性率比較〔n(%)，n=134〕

2.2 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3表達(dá)與臨床資料的相關(guān)性 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在不同性別、年齡、息肉史及腫瘤史中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)。VEGF-C和VEGF-D在不同組織學(xué)類型的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05);VEGFR-3在是否有肝轉(zhuǎn)移CRC患者中有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的樣本中表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)，而與腫瘤大小、Duke分期、TNM分期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3表達(dá)與臨床資料的相關(guān)性

3 討論

通常情況下VEGF家族在動(dòng)物和人體的多種組織中表達(dá)較少，然而在血管再生比較活躍的組織如胚胎和胎盤(pán)和一些疾病如長(zhǎng)期炎癥紊亂、糖尿病以及局部缺血性心臟病均發(fā)現(xiàn)VEGF的高表達(dá)。VEGF及其受體在轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌和腫瘤相關(guān)的內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)水平也較高。因此，VEGF在CRC的形成過(guò)程中被認(rèn)為是一個(gè)重要的因子〔5，6〕。研究證實(shí)VEGF-C與腫瘤的發(fā)展和預(yù)后不良有關(guān)〔7〕，VEGF發(fā)揮作用不僅和其在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)有關(guān)，而且和內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF家族表達(dá)有關(guān)。VEGF家族包括 VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D 和 VEGFE以及受體 VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。CRC與 VEGF家族關(guān)系的研究主要集中于VEGF-A。然而，新發(fā)現(xiàn)的VEGF-C和VEGF-D可能在血管再生和淋巴生成中發(fā)揮著重要的作用。

本研究結(jié)果和上述的研究結(jié)果一致，即VEGF-C通過(guò)激活絡(luò)氨酸激酶受體VEGFR-3來(lái)誘導(dǎo)淋巴管生成。這種受體存在于胚胎血管內(nèi)皮細(xì)胞，在成長(zhǎng)過(guò)程中逐漸減少，從而在血管網(wǎng)絡(luò)形成后限制。最近研究提示VEGFR-3與它的配體VEGF-C和VEGF-D可能通過(guò)刺激腫瘤組織中淋巴管的生成，從而誘導(dǎo)產(chǎn)生新的淋巴毛細(xì)管，增加了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性〔8〕。血管再生在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中起著重要的作用，包括在現(xiàn)有內(nèi)皮脈管系統(tǒng)上生成新的血管。腫瘤血管再生對(duì)于腫瘤的快速發(fā)展、強(qiáng)化轉(zhuǎn)移的途徑非常重要?？偟膩?lái)說(shuō)，其通過(guò)提供氧分、營(yíng)養(yǎng)和釋放生長(zhǎng)因子來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。

本實(shí)驗(yàn)在所有腫瘤細(xì)胞均檢測(cè)到了血管再生的標(biāo)志，說(shuō)明血管再生在腫瘤的發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要的作用。同時(shí)，淋巴管的生成也可能在CRC的形成中發(fā)揮著重要的作用。因此，VEGF-C，VEGF-D和VEGFR-3蛋白表達(dá)對(duì)CRC的治療和診斷具有重要價(jià)值，并與CRC的形成、侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。

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