新生兒缺氧缺血性腦病血清細(xì)胞因子變化及臨床意義

王團(tuán)美，劉曉亮

（長沙市中心醫(yī)院，湖南 長沙 410000）

新生兒缺氧缺血性腦?。℉ypoxic Ischemic Encephalopathy HIE）是指新生兒圍產(chǎn)期窒息引起的部分或完全缺氧、腦血流量減少或暫停而導(dǎo)致的腦部損傷[1]，是導(dǎo)致新生兒死亡和致殘的重要因素[2]。HIE的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，近年來，免疫系統(tǒng)在HIE 發(fā)病中的作用日益受到重視[3]。國內(nèi)外研究表明[4-5]，腦缺血再灌注后，腦組織局部過度炎癥反應(yīng)是造成腦再灌注損傷的重要原因，而細(xì)胞因子在這個(gè)病理過程中起著非常重要的作用，因此，本文對白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素8(IL-8)、白細(xì)胞介素10(IL-10)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)這5 種致炎性細(xì)胞因子在HIE 患兒和正常兒童血清中含量的變化及其臨床意義進(jìn)行了研究，對加強(qiáng)HIE 病程監(jiān)測，改善HIE的預(yù)后具有指導(dǎo)意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

HIE組：2007年1月～2011年12月我院新生兒病房收治的HIE 患兒112例，均符合新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。其中，放棄治療5例，轉(zhuǎn)院治療9例，共調(diào)查患兒98例。

正常對照組：隨機(jī)抽取同期正常分娩的新生兒100例，無宮內(nèi)發(fā)育遲緩，宮內(nèi)及生后無窒息，并排除宮內(nèi)感染，生后7d 內(nèi)無合并癥，母親孕期體健，分娩前無明顯感染史，無血制品及免疫抑制或增強(qiáng)劑使用史。2組新生兒在性別、胎齡、出生體質(zhì)量方面均無顯著性差異。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

HIE組和正常對照組新生兒均于出生后24h內(nèi)（急性期）和出生后第7天（恢復(fù)期）以無菌操作采集外周靜脈血2mL，用低溫離心機(jī)（4 ℃、3000r/min）離心10min，收集上層血清，并置于－40℃冰箱內(nèi)保存待檢。

1.2.2 檢測方法

用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 雙抗體夾心法檢測2組新生兒出生后24h 內(nèi)和出生后第7天的血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α 水平，酶標(biāo)檢測試劑盒由Rapul Bio Lab Calabasas,California,USA 公司提供，ELISA 檢測分析儀為華東電子管廠產(chǎn)品。

1.2.3 HIE 臨床分度

根據(jù)第7 版兒科學(xué)標(biāo)準(zhǔn)[1]，將HIE 分為輕度、中度和重度三種，輕度患兒興奮、抑制交替，肌張力正常或稍高，擁抱反射活躍，吸吮反射正常，瞳孔正?；驍U(kuò)大，EKG 正常，可有肌陣攣，無中樞性呼吸衰竭；中度患兒嗜睡，肌張力減低，擁抱反射減弱，吸吮反射減弱，瞳孔?？s小，EKG 呈低電壓，常伴有驚厥或中樞性呼吸衰竭；重度患兒出現(xiàn)昏迷，肌松軟，擁抱反射消失，吸吮反射消失，瞳孔不對稱或擴(kuò)大，EKG表現(xiàn)為爆發(fā)抑制和等電線，驚厥可呈持續(xù)狀態(tài)，中樞性呼吸衰竭明顯。

1.2.4 資料處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以mean±SD表示，所有數(shù)據(jù)均采用Epidata 雙核雙錄法，并導(dǎo)入SPSS17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)方法包括：統(tǒng)計(jì)描述、t 檢驗(yàn)和方差分析。如無特殊說明，顯著性水準(zhǔn)=0.05，所有的P值均表示雙側(cè)概率。

2 結(jié)果

2.1 急性期HIE和對照組血清細(xì)胞因子水平比較

將HIE 分為輕、中和重三度，其中，HIE 輕度患兒42例，中度患兒31例，重度患兒25例，比較急性期不同臨床分度的HIE 患兒和正常新生兒血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水 平的 差異，具體見表1 所示。經(jīng)方差分析，不同臨床分度的HIE 患兒和正常新生兒血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水平不完全相同（P＜0.05）。

對不同臨床分度的HIE 患兒和正常新生兒5種血清細(xì)胞因子水平進(jìn)行LSD 兩兩比較，可知，輕、中、重三度HIE 患兒和正常新生兒血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水平兩兩之間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），HIE組患兒血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α 水平均高于正常新生兒，且隨著HIE 病情的加重，IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α5 種細(xì)胞因子水平均有顯著性上升 (P＜0.05)。

表1 HIE和對照組急性期血清細(xì)胞因子水平比較

2.2 恢復(fù)期HIE和對照組血清細(xì)胞因子水平比較

比較恢復(fù)期HIE組和正常新生兒血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α 水平，具體見2 所示，經(jīng)方差分析，在恢復(fù)期，HIE組患兒血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水平與正常新生兒也不完全相同（P＜0.05）。經(jīng)LSD 兩兩比較法可知，恢復(fù)期，HIE 輕度患兒和正常新生兒的IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 水平無顯著性差異，HIE中度患兒和正常新生兒的IL-8、IL-10 無顯著性差異（P＞0.05），HIE 輕度患兒和中度患兒IL-1β、IL-8、IL-10 無顯著性差異，HIE中度患兒和重度患兒TNF-α 無顯著性差異。

表2 HIE和對照組恢復(fù)期血清細(xì)胞因子水平比較

2.3 急性期和恢復(fù)期HIE 患兒的血清細(xì)胞因子水平比較

采用配對t 檢驗(yàn)的方法，比較急性期和恢復(fù)期HIE 患兒的血清細(xì)胞因子水平，具體見表3 所示，可知，急性期IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α5種血清細(xì)胞因子水平都顯著高于恢復(fù)期（P＜0.05）。

表3 急性期與恢復(fù)期HIE 血清細(xì)胞因子水平比較

3 討論

腦缺血再灌注后，腦組織局部過度炎性反應(yīng)是導(dǎo)致新生兒HIE 腦損傷的主要機(jī)制之一[7～8]。IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α 是炎性反應(yīng)中較為主要的細(xì)胞因子，臨床研究發(fā)現(xiàn)[9～17]，這幾種細(xì)胞因子相互作用，在新生兒腦缺血-再灌注損傷過程中具有重要的意義。

本研究顯示，急性期HIE組患兒血清IL-1β水平高于正常新生兒，且隨著HIE 病情的加重，IL-1β 水平有顯著性上升，與王建、Aly 等[9～10]報(bào)道一致，經(jīng)治療后，恢復(fù)期HIE 患兒IL-1β 水平顯著降低，中度患兒IL-1β 水平和輕度患兒已無顯著性差異，IL-1β 水平的降低，在新生兒HIE 恢復(fù)過程中發(fā)揮了重要的作用；急性期HIE組患兒血清IL-6水平高于正常新生兒，且隨著HIE 病情的加重，IL-6 水平有顯著性上升，恢復(fù)期HIE 患兒IL-6 水平顯著降低，輕度患兒IL-6 水平已達(dá)到正常新生兒水平，與劉文東、Hasan T 等[11～12]報(bào)道一致；急性期HIE組患兒血清IL-8 水平高于正常新生兒，且隨著HIE 病情的加重，IL-8 水平有顯著性上升，與Berger RP、賈菲菲等[13～14]研究結(jié)果一致，經(jīng)治療后，恢復(fù)期HIE 患兒IL-8 水平顯著降低，HIE 輕度患兒和中度患兒IL-8 已達(dá)正常新生兒水平，因此，IL-8的動(dòng)態(tài)變化可作為HIE 治療效果的監(jiān)測及預(yù)后的評估；本研究顯示，急性期HIE組患兒血清IL-10 水平高于正常新生兒，且隨著HIE 病情的加重，IL-10 水平有顯著性上升，恢復(fù)期HIE 患兒IL-10 水平顯著降低，HIE 輕度患兒和中度患兒IL-10已達(dá)正常新生兒水平；急性期HIE組患兒血清TNF-α 水平高于正常新生兒，且隨著HIE 病情的加重，TNF-α 水平有顯著性上升，恢復(fù)期，TNF-α水平顯著下降，HIE 輕度患兒TNF-α 已達(dá)正常新生兒水平，HIE中度患兒和重度患兒TNF-α 無顯著性差異，隨著腦缺血缺氧損傷的逐漸好轉(zhuǎn)，血清TNF-α 也逐漸恢復(fù)正常。

本研究說明，血清細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 均參與了新生兒HIE 腦損傷的過程，隨著HIE 病情的加重，細(xì)胞因子水平顯著上升，在HIE 腦損傷好轉(zhuǎn)時(shí)，細(xì)胞因子水平逐漸下降。其中，IL-1β 可誘導(dǎo)多種損傷性細(xì)胞因子的合成，促進(jìn)過度炎性反應(yīng)，并促進(jìn)自由基的釋放及增強(qiáng)興奮性氨基酸的毒性作用，加重腦缺血-再灌注損傷的發(fā)生[16]；IL-6 可抑制TNF-α和IL-1β的合成，對抗興奮性氨基酸的神經(jīng)毒性，促進(jìn)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素的釋放以及抑制免疫反應(yīng)，對中樞神經(jīng)細(xì)胞起到保護(hù)作用；IL-8 具有強(qiáng)烈的趨化作用，通過吸引中性粒細(xì)胞至病變部位促進(jìn)血管內(nèi)血栓的形成，增強(qiáng)IL-1β、TNF-α的神經(jīng)毒性作用，從而介導(dǎo)腦缺血-再灌注損傷的發(fā)生；IL-10 可抑制主要炎性因子TNF-α、IL-1β的產(chǎn)生，發(fā)揮廣泛的抗炎作用，使機(jī)體內(nèi)源性抗炎機(jī)制加強(qiáng)，有利于炎癥的消除，對腦缺血-再灌注損傷具有保護(hù)作用[15]；TNFα 在新生兒HIE中具有雙重作用[16～17]，首先它可通過抗氧化途徑抵抗氧自由基的損傷，刺激星形細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)合成神經(jīng)生長因子，從而促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的修復(fù)，其次，它還可以損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，開放和破壞血腦屏障，促進(jìn)和誘發(fā)IL-1β、IL-8 等細(xì)胞因子的合成和釋放，促進(jìn)過度炎性反應(yīng)，誘導(dǎo)腦細(xì)胞調(diào)亡，加重腦缺血-再灌注損傷。

綜上所述，IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α五種血清細(xì)胞因子在新生兒HIE 腦損傷中發(fā)揮了重要的作用，其動(dòng)態(tài)變化可作為HIE 病程監(jiān)測的重要指標(biāo)，加強(qiáng)對血清細(xì)胞因子的監(jiān)測對減少腦缺血-再灌注損傷、改善HIE的預(yù)后具有重要的意義。

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