支氣管鏡刷檢標(biāo)本液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在肺癌診斷中的應(yīng)用

余碧蕓 吳宏成 沈世茉 浙江省寧波市李惠利醫(yī)院 寧波 315000

潘 登 浙江省寧波市臨床病理診斷中心

Surepath液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)（LCT）是第三代細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)，與傳統(tǒng)直接涂片檢查比較，診斷陽(yáng)性率明顯提高，目前已廣泛應(yīng)用于宮頸癌的診斷，但在支氣管鏡刷檢細(xì)胞學(xué)檢查方面的應(yīng)用仍然不多。我院近期將Surepath液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)應(yīng)用于支氣管鏡刷檢細(xì)胞學(xué)，并與傳統(tǒng)直接涂片方法比較，以探討其對(duì)肺癌的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月—2012年3月在我院門診及住院進(jìn)行支氣管鏡檢查，對(duì)刷檢標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行Surepath液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)和普通常規(guī)涂片的患者529例，男372例，女157例，年齡18～85歲，平均年齡50歲。其中肺癌患者159例，均經(jīng)組織病理確診，包括支氣管鏡活檢確診98例，經(jīng)皮肺活檢確診16例，手術(shù)病理確診45例。非肺癌患者370例，其中肺炎158例，肺結(jié)核42例，支氣管擴(kuò)張50例，間質(zhì)性肺疾病28例，慢性阻塞性肺疾病20例，結(jié)核性胸膜炎10例，支氣管結(jié)核8例，肺膿腫8例，肺不張5例，塵肺5例，支氣管異物4例，支氣管肺良性腫瘤3例（肺錯(cuò)構(gòu)瘤2例，右側(cè)主支氣管平滑肌瘤1例），復(fù)發(fā)性多軟骨炎1例，其他包括痰血或慢性咳嗽患者胸部CT和支氣管檢查未見明顯異常者28例。

1.2 方 法 所有患者均由同一個(gè)醫(yī)師采用OLYMPUS BF260或1T260電子支氣管鏡進(jìn)行檢查，均采用南京微創(chuàng)一次性使用細(xì)胞刷進(jìn)行支氣管黏膜刷片，將毛刷先直接在玻片上涂片2張，再將毛刷頭置入有50mL CytoRich紅色固定液（BD公司）的錐形管中，震蕩5～10次，送細(xì)胞病理室處理。

1.3 LCT檢測(cè) 采用離心沉降技術(shù)600g的轉(zhuǎn)速離心10min，倒掉上清液并震蕩，如果看不到或只看到小的細(xì)胞塊，加入10mL緩沖液震蕩后全部轉(zhuǎn)移到12mL離心管內(nèi)，如果看到較大或很大的細(xì)胞塊，將部分標(biāo)本轉(zhuǎn)移到12mL離心管內(nèi)，并加入10mL水，放入離心機(jī)，600g的轉(zhuǎn)速離心5min，倒掉上清液并振蕩。將離心管放入PrepStainTM全自動(dòng)液基細(xì)胞制片機(jī)（BD公司）中自動(dòng)制片、染色（HE染色法）。所有涂片均由同一個(gè)病理醫(yī)師最后審核。

1.4 觀察指標(biāo) 比較兩組患者的病理切片質(zhì)量，統(tǒng)計(jì)比較兩種方法的診斷陽(yáng)性率，并比較LCT分類診斷和病理組織學(xué)診斷的符合率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，配對(duì)計(jì)數(shù)資料比較采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LCT和直接涂片法的檢測(cè)結(jié)果與評(píng)價(jià) LCT涂片均勻薄層，細(xì)胞結(jié)構(gòu)及背景清晰，污染少，染色質(zhì)量高，核質(zhì)分明，便于觀察；細(xì)胞團(tuán)保留其自然形態(tài)，三維結(jié)構(gòu)可見，便于推斷其組織類型。傳統(tǒng)涂片厚薄不均且腫瘤細(xì)胞往往存在于黏液、較厚的炎性細(xì)胞等污穢背景中，或細(xì)胞由于受外力擠壓變形，或由于固定不當(dāng)造成細(xì)胞退變，影響染色造成難以觀察和判定。

把鏡檢發(fā)現(xiàn)可疑癌細(xì)胞和癌細(xì)胞均列為陽(yáng)性。LCT和直接涂片法的檢測(cè)結(jié)果見表1～2。LCT診斷肺癌的敏感度為43.4%，特異度為99.7%。直接涂片法診斷肺癌的敏感度為18.3%，特異度為99.7%。LCT和直接涂片法肺癌診斷陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=32.1，P＜0.01），LCT的敏感度高于直接涂片法，特異度與直接涂片法無(wú)差異（P＞0.05），見表1～2。

2.2 LCT細(xì)胞學(xué)分類診斷的準(zhǔn)確性 159例患者中同時(shí)有LCT分類診斷和病理組織學(xué)診斷結(jié)果69例，其中LCT分類診斷與病理組織學(xué)診斷相符者53例，總符合率76.8%，見表3。

3 討論

液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)于1996年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于改進(jìn)傳統(tǒng)的手工巴氏涂片，目前應(yīng)用于臨床的有兩種：膜式液基薄層細(xì)胞技術(shù)（Thih－prep Cytolosy Test，TCT）和離心沉淀式液基薄層細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)（AutoCyte Prep），后者在2001年更名為Surepath，即LCT，目前已經(jīng)逐步進(jìn)入中國(guó)。LCT的突出優(yōu)點(diǎn)是標(biāo)本利用率高，符合不丟棄任何所取材料的原則[1]。且LCT制片與CS相比還具有以下優(yōu)點(diǎn)：①固定及時(shí)，對(duì)刷檢所獲得的標(biāo)本能及時(shí)注入液基保存液中保存?zhèn)溆?，?xì)胞不易變形。②能最大限度地收集到癌細(xì)胞成分。③能有效地過(guò)濾清除標(biāo)本中的紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞及黏液等各種污穢物，涂片背景較清晰。④涂片范圍小，細(xì)胞分布均勻，鏡檢省時(shí)、省力、快捷。⑤LCT可以重復(fù)制片，為后續(xù)特染、免疫酶標(biāo)、細(xì)胞塊技術(shù)、基因檢測(cè)的應(yīng)用提供了可能。⑥LCT具有自動(dòng)涂片、染色，減少了人工操作和接觸標(biāo)本的機(jī)會(huì)，避免了感染機(jī)會(huì)，提高了診斷細(xì)胞病理學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化。

表1 兩組LCT和直接涂片法檢測(cè)結(jié)果 例

表2 159例肺癌標(biāo)本LCT和直接涂片法檢測(cè)結(jié)果比較 例

LCT診斷 組織病理學(xué)診斷腺癌 鱗癌 小細(xì)胞癌 非小細(xì)胞癌腺癌鱗癌小細(xì)胞癌非小細(xì)胞癌類型不明確14 0 0 2 3 1 28 0 5 0 0 0 1 1 0 0 1 4 0 0 0

支氣管鏡檢查是目前診斷肺癌的常規(guī)檢查方法，刷檢聯(lián)合組織活檢是重要手段。傳統(tǒng)支氣管黏膜細(xì)胞學(xué)檢查是在支氣管鏡檢查過(guò)程中，用支氣管毛刷直接在普通玻片上涂片，診斷率較低。LCT對(duì)肺癌有更高的診斷率，國(guó)內(nèi)也有少量文獻(xiàn)報(bào)道[2－4]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)與組織病理學(xué)對(duì)照，普通涂片法檢出敏感度為18.3%，而LCT檢出敏感度為43.4%，較普通涂片法提高了25.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而且，LCT分類診斷和病理組織學(xué)診斷的符合率也達(dá)76.8%，和池瓊[3]、儲(chǔ)兵等[4]報(bào)道一致。Fan等[5]發(fā)現(xiàn)LCT分類診斷和病理組織學(xué)診斷的符合率高，而且在小細(xì)胞肺癌中更為突出，本組病例中LCT對(duì)小細(xì)胞肺癌的診斷率和敏感率最高，其次是鱗癌。本組2例支氣管鏡下未見明顯異常但是行刷檢明確肺腺癌的患者，經(jīng)外科手術(shù)組織病理檢查也明確為肺腺癌。普通支氣管鏡檢查對(duì)亞段以下病灶無(wú)法直視，而且部分肺癌侵犯支氣管黏膜病變輕微，此時(shí)，根據(jù)影像學(xué)在相應(yīng)支氣管黏膜部位刷檢可以提高陽(yáng)性率。本組2例支氣管鏡下管腔狹窄的患者行電子支氣管鏡活檢病理不能明確，但是刷檢液基細(xì)胞學(xué)提示小細(xì)胞癌，最后手術(shù)組織病理也證實(shí)為小細(xì)胞癌?？紤]支氣管鏡活檢標(biāo)本作組織病理學(xué)切片時(shí)，因組織取材過(guò)小或擠壓嚴(yán)重未能明確診斷，而LCT診斷能補(bǔ)充確診。本研究中發(fā)現(xiàn)支氣管結(jié)核患者的LCT診斷率為100%，為支氣管結(jié)核與支氣管肺癌的鑒別診斷提供了有力的依據(jù)。有2例LCT檢查陰性，而直接涂片為陽(yáng)性，考慮由于本研究采用的對(duì)照研究，經(jīng)常規(guī)涂片后再行LCT檢查，可能因細(xì)胞量不足而影響檢出率，如果將刷檢標(biāo)本直接送LCT，或能得到更高的肺癌檢出率和組織類型的敏感性。

［1］Michael CW，Hunter B.Interpretation of FNA processed by the Thinprep technique Cytologic artifacts and diagnostic pitfalls［J］.Diagn Cytopathol，2000，23：6213．

［2］陳世梁.膜式超薄液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)在肺癌診斷中的應(yīng)用［J］.實(shí)用癌癥雜志，2007，22（2）：196.

［3］池瓊，鄭紀(jì)陽(yáng)，戴新建，等.膜式超薄液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)在肺癌診斷中的應(yīng)用［J］.中華腫瘤雜志，2010，32（3）：221.

［4］儲(chǔ)兵，陳應(yīng)智，王光輝，等.纖維支氣管鏡刷片薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查在肺癌中的應(yīng)用［J］.醫(yī)藥論壇雜志，2008，29（13）：53

［5］Yi－Bo Fan，Qing－Shan Wang，Lin Ye，et al.Clinical appli?cation of the SurePath liquid－based Pap test in cytological screening of bronchial brushing for the diagnosis of lung can?cer［J］.Cytotechnology，2010，62（1）:53.