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    醋酸桿菌發(fā)酵細(xì)菌纖維素及其改性研究

    2013-09-04 10:22:42趙秋紅李彥軍
    食品工業(yè)科技 2013年17期
    關(guān)鍵詞:水率羧甲基水性

    張 雯,趙秋紅,李彥軍

    (陜西科技大學(xué),陜西西安710021)

    細(xì)菌纖維素(Bacterial cellulose,簡(jiǎn)稱BC)是葡萄糖以β-1,4-糖苷鍵聚合成的高分子化合物,與自然界廣泛存在的植物纖維素相比,在純度、持水性、透氣性、物理和機(jī)械性能、生物相容性及生物可降解性等方面均具有獨(dú)特的優(yōu)良性能。在食品、醫(yī)藥、輕工等行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值[1-4]。然而,BC 干燥后即成堅(jiān)硬致密的半透明干膜,不易被液體滲透,吸水量相對(duì)較少,難以恢復(fù)到最初的溶脹狀態(tài),使其優(yōu)良特性被破壞,從而限制了其應(yīng)用[5]。為改善BC的再溶脹能力,提高其材料性能,本研究通過(guò)兩種途徑對(duì)BC進(jìn)行了改性:一是在發(fā)酵培養(yǎng)基中分別添加水溶性多糖—羧甲基纖維素、羧甲基淀粉鈉、海藻酸鈉發(fā)酵生產(chǎn)BC;二是將普通培養(yǎng)基中發(fā)酵生產(chǎn)的BC凝膠膜或干膜分別浸漬于多羥基化合物-1,3-丁二醇、N,N-二甲基甲酰胺、甘油中進(jìn)行改性。從而改善了BC材料性能,促進(jìn)了其開發(fā)應(yīng)用。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    醋酸桿菌(Acetobacter xylinum)本實(shí)驗(yàn)室提供;固體培養(yǎng)基[6]蔗糖 5%,牛肉膏 1.5%,Na2HPO40.44%,檸檬酸0.08%,乙醇1.0%,pH5.0;種子培養(yǎng)基 蔗糖5%,牛肉膏1.5%,Na2HPO40.44%,檸檬酸0.08%,乙醇1.0%,pH 5.0;基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基 蔗糖5%,牛肉膏1.5%,Na2HPO40.44%,檸檬酸0.08%,瓊脂1.8%,乙醇1.0%,pH 5.0;改性培養(yǎng)基1 基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基添加羧甲基纖維素鈉(CMCNa);改性培養(yǎng)基2 基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基添加羧甲基淀粉鈉(CMSCNa);改性培養(yǎng)基3 基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基添加海藻酸鈉(AS)。

    電熱恒溫培養(yǎng)箱(MG250B)、恒溫振蕩器(HYG-1A)上海新瑞儀器有限公司;光學(xué)顯微鏡(XPS-8CA)上海光學(xué)儀器有限公司;精密電子天平(BS110S)北京賽多利斯天平有限公司;全自動(dòng)X-射線衍射儀 日本Rigalcu;傅立葉變換紅外光譜儀 德國(guó)Brucher公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 BC的發(fā)酵改性 分別配制基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基及改性培養(yǎng)基1、改性培養(yǎng)基2、改性培養(yǎng)基3,接種醋酸桿菌(接種量10%,發(fā)酵液裝量200mL/500mL燒杯),30℃靜態(tài)培養(yǎng)4d進(jìn)行BC的發(fā)酵生產(chǎn),發(fā)酵結(jié)束后測(cè)定產(chǎn)物持水率、孔隙率、透濕性及IR、XRD檢測(cè)。改性培養(yǎng)基中多糖添加量均為6個(gè)梯度:0、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%,每個(gè)樣品平行3份。所得改性后樣品記為樣品1#~樣品15#,對(duì)照組記為樣品0#。

    1.2.2 BC的浸漬改性 配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)BC,發(fā)酵結(jié)束后將BC凝膠膜按1.2.3所述方法進(jìn)行處理,分別浸漬在蒸餾水及多羥基化合物-丁二醇、二甲基甲酰胺、甘油中24h進(jìn)行改性。浸漬結(jié)束后取出BC膜用蒸餾水充分水洗,所得改性后樣品記為樣品16#~樣品18#。測(cè)定改性后的BC持水率、孔隙率、透濕性及IR、XRD檢測(cè)。

    1.2.3 測(cè)定分析方法

    1.2.3.1 BC膜處理 將BC膜浸泡于0.1mol/L NaOH溶液中,80℃浸泡30min,繼續(xù)加熱煮沸約2h,再用蒸餾水反復(fù)沖洗,直到pH為7.2[6]。

    1.2.3.2 BC膜持水率、復(fù)水率及產(chǎn)量測(cè)定 稱重法[7-8]。

    1.2.3.3 BC膜孔隙率 用介質(zhì)飽和法測(cè)定[7-8]。

    1.2.3.4 BC膜透濕性 用水蒸汽透過(guò)率評(píng)價(jià)[7-8]。

    1.2.3.5 BC鑒定及基團(tuán)分析 紅外光譜(樣品處理:將BC膜烘干后研成粉末,與溴化鉀以1∶100比例混合充分研細(xì),然后用壓片機(jī)壓片,再放入紅外光譜儀中進(jìn)行測(cè)定)[9]。

    1.2.3.6 BC膜結(jié)晶度 X-射線衍射光譜(樣品處理:將BC膜烘干后研成粉末,平鋪在涂有凡士林的玻璃平板上,然后將樣品放入X-衍射儀中,設(shè)定參數(shù)角為 20~40°)[9]。

    1.3 數(shù)據(jù)處理方法

    所有數(shù)據(jù)均用三次平行實(shí)驗(yàn)的平均值表示,用SPSS(PASW Statistics18)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,方差分析及多重比較中p<0.05為顯著差異,記為*。

    2 結(jié)果與分析

    通過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加CMCNa、CMSCNa、AS制備了 CMCNa-BC、CMSCNa-BC、AS-BC 3 種改性 BC膜,同時(shí)利用多羥基化合物—丁二醇、甘油和二甲基甲酰胺浸漬BC得到了三種浸漬改性膜,改性前后BC膜的持水性、復(fù)水性、孔隙率、水蒸氣透過(guò)率及IR、XRD檢測(cè)結(jié)果如圖1~圖9所示。

    2.1 改性對(duì)BC膜持水性及復(fù)水性的影響

    由數(shù)據(jù)分析及圖1、圖2可知,通過(guò)向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加水溶性多糖對(duì)BC進(jìn)行改性后,BC的復(fù)水率顯著提高,其中培養(yǎng)基中加入0.5%AS的改性BC膜(樣品11#)復(fù)水率可達(dá)96.58%,比改性前提高了30.3%;N,N-二甲基甲酰胺浸漬改性后BC膜(樣品18#)改性產(chǎn)物再次溶脹后的復(fù)水率可達(dá)97.40%,比未改性BC膜增加31.4%。同時(shí),改性后的BC膜持水率也有所上升,其中培養(yǎng)基中加入1.5%AS(樣品13#)生產(chǎn)的BC膜持水率最高達(dá)98.53%,比改性前提高了2%。其原因主要在于,BC可以與水溶性多糖以糖苷鍵的形式結(jié)合從而改變其特殊網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),改性BC膜通過(guò)干燥后的硬度會(huì)有所降低,因此可提高干膜再溶脹后的復(fù)水性。而多羥基化合物作為一種“膨脹劑”,可部分取代凝膠膜中持有的水分,這些“膨脹劑”在BC膜干燥時(shí)不會(huì)隨水分蒸發(fā)出去,阻止了除去水分對(duì)膜微結(jié)構(gòu)的破壞,使之形成一種柔韌的膜,從而使BC干膜復(fù)水時(shí)在較短時(shí)間內(nèi)可以恢復(fù)到原來(lái)的狀態(tài)。而其中甘油浸漬后BC膜的持水率及復(fù)水率均明顯降低主要是因?yàn)槎嗔u基化合物可以部分或全部地取代凝膠膜中持有的水分,這些“膨脹劑”在BC膜干燥時(shí)不會(huì)隨水分蒸發(fā)出去。同時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,培養(yǎng)基中添加2.5%AS對(duì)BC膜合成有抑制作用,不能產(chǎn)生BC,其原因可能是因?yàn)榘l(fā)酵培養(yǎng)基中AS濃度過(guò)高,滲透壓過(guò)大,影響了細(xì)胞代謝生產(chǎn)BC。

    圖1 發(fā)酵改性前后細(xì)菌纖維素的持水率Fig.1 Water holdup rate of bacterial cellulose before and after being modified

    圖2 發(fā)酵改性前后細(xì)菌纖維素的復(fù)水率Fig.2 Rehydration rate of bacterial cellulose before and after being modified

    2.2 改性對(duì)BC膜孔隙率及透濕性的影響

    由數(shù)據(jù)分析及圖3、圖4可知,培養(yǎng)基中加入1.5%CMCNa發(fā)酵改性的BC膜孔隙率為0.9177%,比未改性的BC膜孔隙率增加了5倍。同時(shí),發(fā)酵改性后BC膜的水蒸氣透過(guò)率均得到了不同程度的提高,培養(yǎng)基中加入1.0%CMSCNa發(fā)酵改性后BC膜水蒸氣透過(guò)率可達(dá)8967.2g/m2×d,比未改性的BC膜水蒸氣透過(guò)率增加了1倍。

    圖3 發(fā)酵改性前后細(xì)菌纖維素的孔隙率Fig.3 Hole rate of bacterial cellulose before and after being modified

    圖4 發(fā)酵改性前后細(xì)菌纖維素的水蒸氣透過(guò)率Fig.4 Water vapour transmission rate of bacterial cellulose before and after being modified

    2.3 改性BC膜紅外光譜檢測(cè)

    改性前后的BC膜紅外光譜圖如圖5~圖8所示,1059cm-1左右處的吸收峰是由碳氧鍵的伸縮振動(dòng)引起的,是纖維素分子的特征峰。在3450cm-1左右處的吸收峰,反映了分子間氫鍵引起的O-H基的伸縮振動(dòng)。在1500cm-1和2000cm-1之間的吸收峰是由纖維素4’端的半縮醛基引起的。在1645cm-1左右處的吸收峰是由C-H鍵伸縮振動(dòng)引起的,強(qiáng)度與纖維素結(jié)晶度有關(guān)。而在2920cm-1左右處的吸收峰則是由CH2-CH伸縮振動(dòng)產(chǎn)生的,在這個(gè)區(qū)域的吸收峰是糖類的特征吸收峰。在約900cm-1的吸收峰是糖苷鍵的特征峰。通過(guò)紅外光譜圖的對(duì)比,改性后多糖的確存在于細(xì)菌纖維素中。3450cm-1處O-H、C-H吸收峰的明顯增強(qiáng)較好地說(shuō)明了羧甲基已經(jīng)結(jié)合到了 BC 中。1606、1414、1645cm-1處的吸收峰,分別表明了羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉和海藻酸鈉成分的存在。

    2.4 改性對(duì)BC膜結(jié)晶性的影響

    圖5 改性前細(xì)菌纖維素的紅外光譜圖Fig.5 IR of the bacterial cellulose before being modified

    圖6 N,N-二甲基甲酰胺改性后細(xì)菌纖維素的紅外光譜圖Fig.6 IR of the bacterial cellulose after being modified by N,N-dimethylformamide

    圖7 培養(yǎng)基添加0.5%AS改性細(xì)菌纖維素的紅外光譜圖Fig.7 IR of the bacterial cellulose after being modified by 0.5%AS

    圖8 培養(yǎng)基添加1.5%CMCNa改性細(xì)菌纖維素的紅外光譜圖Fig.8 IR of the bacterial cellulose after being modified by 1.5%CMCNa

    改性前后的BC膜XRD光譜圖如圖9所示,除1,3-丁二醇浸漬改性BC膜,改性前及改性后的BC膜均能夠觀察到一個(gè)主峰,其對(duì)應(yīng)的衍射角為22.27左右。在X-衍射中峰的比例反映了BC膜的結(jié)晶程度,由圖可看出,發(fā)酵改性后峰的比例不變,強(qiáng)度小的變動(dòng)伴隨有角的改變,可知發(fā)酵培養(yǎng)基中添加水溶性多糖改性BC對(duì)其纖維素結(jié)晶影響不大。而1,3-丁二醇改性后BC膜XRD圖譜峰的比例減弱至幾乎消失,顯示BC膜結(jié)晶度降低。

    圖9 改性前后細(xì)菌纖維素膜X-射線衍射光譜圖Fig.9 XRD of the bacterial cellulose before and after being modified

    3 結(jié)論

    通過(guò)培養(yǎng)基中添加水溶性多糖發(fā)酵生產(chǎn)BC及利用多羥基化合物浸漬BC能夠?qū)C進(jìn)行改性,所得改性BC膜的持水性、復(fù)水性、孔隙率和透濕性等材料學(xué)特性均比改性前優(yōu)良。培養(yǎng)基中添加1.5%AS所得改性BC膜持水率比改性前提高了2%;培養(yǎng)基中加入0.5%AS所得改性BC膜再溶脹能力比改性前提高了30.3%;N,N-二甲基甲酰胺浸漬改性所得BC膜比改性前提高了31.4%;培養(yǎng)基中加入1.5%CMCNa所得改性BC膜孔隙率比改性前提高了5倍;培養(yǎng)基中加入1.0%CMSCNa所得改性BC膜水蒸氣透過(guò)率比改性前提高了1倍;發(fā)酵改性作用對(duì)細(xì)菌纖維素的結(jié)晶度影響不大。該研究為制備高性能復(fù)合BC材料、拓寬BC的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

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