新型豬瘟疫苗研究進展

王春花，孫元，仇華吉

中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所 獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150001

豬瘟 (Classical swine fever，CSF) 是由豬瘟病毒 (Classical swine fever virus，CSFV) 引起豬的一種高度接觸性、致死性的傳染病，臨床上以發(fā)病急、高熱稽留、全身泛發(fā)性點狀出血和脾梗死為主要特征，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。世界動物衛(wèi)生組織 (OIE) 將其列入 OIE疫病名錄 (OIE-listed diseases)，為須申報的(Notifiable) 動物傳染病，我國也將其列為一類動物傳染病。

豬瘟病毒為黃病毒科瘟病毒屬成員，病毒粒子呈球形，核衣殼為二十面體對稱，是有囊膜的單股正鏈RNA病毒。基因組全長12.3 kb，含有一個大的開放閱讀框 (Open reading frame，ORF)，該閱讀框編碼一個含3 898個氨基酸的多聚蛋白，此多聚蛋白在宿主細胞和病毒自身蛋白酶作用下，加工形成4個結(jié)構(gòu)蛋白 (C、Erns、E1和 E2) 和 8個非結(jié)構(gòu)蛋白 (Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和 NS5B)。其中囊膜糖蛋白 E2是主要保護性抗原蛋白，可以誘導抗豬瘟的保護性免疫。

近年來，豬瘟在亞洲、歐洲、南美洲等地區(qū)呈現(xiàn)復發(fā)的趨勢，一些宣布已消滅豬瘟的國家(如法國、荷蘭、德國、比利時等) 又見豬瘟復發(fā)的報道[1]。并且，豬瘟的流行趨勢發(fā)生了很大變化，呈現(xiàn)典型豬瘟和非典型豬瘟共存，隱性感染和持續(xù)感染并現(xiàn)，且免疫失敗的現(xiàn)象時有發(fā)生。這種新的流行形式給全世界養(yǎng)豬業(yè)提出了新的挑戰(zhàn)。目前，疫苗接種仍然是防制豬瘟的重要措施，但傳統(tǒng)疫苗不能區(qū)分感染和免疫動物(Differentiating Infected from Vaccinated Animals，DIVA)，不能滿足防制豬瘟的需求。因此，研制安全、高效且具有DIVA特性的新型豬瘟疫苗對于預防和控制該病具有重要意義?，F(xiàn)將近年來研制的豬瘟新型疫苗綜述如下。

1 核酸疫苗

1.1 DNA疫苗

DNA疫苗是近年發(fā)展起來的一種新型疫苗，其本質(zhì)是編碼免疫原或與免疫原相關(guān)的真核表達質(zhì)粒DNA (有時也可是RNA)。此類疫苗是以裝配有原核復制組件和真核表達調(diào)控組件的質(zhì)粒為載體，將編碼免疫原的基因克隆至該質(zhì)粒中構(gòu)建而成。將構(gòu)建的質(zhì)粒 DNA接種動物后，可使外源基因在動物體內(nèi)表達，表達的抗原隨后激活動物機體的免疫系統(tǒng)，從而誘導特異性的免疫反應，并對接種動物提供免疫保護。

豬瘟 DNA疫苗免疫是指將表達豬瘟病毒主要保護性抗原 E2蛋白的重組質(zhì)粒直接免疫動物，使 E2蛋白在免疫動物體內(nèi)瞬時表達，并刺激機體產(chǎn)生免疫保護。研究顯示，用含有信號肽序列及全長 CSFVE2基因的真核表達質(zhì)粒pcDSW 接種小鼠后，可誘導小鼠產(chǎn)生抗 CSFV的特異性免疫反應，該質(zhì)粒在豬體上亦可誘導保護性免疫反應[2]。用表達CSFV E2蛋白的重組質(zhì)粒pcDNA3.1/E2免疫豬只，在未檢測到中和抗體的情況下，該質(zhì)粒能夠誘導產(chǎn)生 MHCⅡ類限制性 T細胞免疫應答。并且在攻毒后，可刺激機體快速產(chǎn)生與免疫保護相關(guān)的高水平的中和抗體[3]。在隨后的研究中也有同樣發(fā)現(xiàn)，Tarradas等用DNA-E2疫苗免疫豬，在沒有檢測到中和抗體的情況下，也誘導了特異性的輔助T淋巴細胞免疫應答。并且在CSFV攻毒初期及攻毒7 d后，豬體內(nèi)檢測到了恒定水平的特異性IFN-γ和堅強的細胞免疫應答，對 CSFV的攻擊提供了免疫保護，并于中和抗體產(chǎn)生之前控制了CSFV的復制[4]。此類研究表明，也可以通過誘導 Th應答的策略來設(shè)計新型的標記疫苗。

DNA疫苗具有許多優(yōu)點，如能高效誘導特異性體液免疫與細胞免疫應答[5]；其制備不需要特定的病原微生物，重組質(zhì)粒可通過發(fā)酵培養(yǎng)方式大量制備，且穩(wěn)定性較好；將多種質(zhì)粒 DNA簡單混合，就可將生化特性類似的抗原 (如來源于相同病原菌的不同菌株) 或一種病原體的多種不同抗原結(jié)合在一起，構(gòu)成多價疫苗，從而使一種DNA疫苗能夠誘導產(chǎn)生針對多個抗原表位的免疫保護作用[6]。若同時將編碼細胞因子的基因克隆到質(zhì)粒上，不但可以增強免疫應答，而且可以調(diào)整應答從Th1型向Th2型過渡。這樣不但可以產(chǎn)生終身免疫，還可以調(diào)控免疫反應的類型，大大增加了DNA疫苗生產(chǎn)的靈活性。但DNA疫苗也有不足之處，如外源基因的表達水平低；誘導產(chǎn)生抗體的速率慢；接種劑量大；有整合和轉(zhuǎn)化染色體的潛在危險等[7]。因此，將其用于開發(fā)CSFV標記疫苗，還需做進一步的改進與深入的研究。

1.2 甲病毒復制子載體DNA疫苗

甲病毒復制子載體 DNA疫苗是一種基于RNA復制子的新型疫苗。近年來，甲病毒(Alphaviruses) 尤其是塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus，SFV) 和辛德比斯病毒(Sindbis virus，SINV) 衍生的DNA/RNA載體被廣泛用于外源基因的表達。在此類載體中，甲病毒 RNA首先翻譯產(chǎn)生病毒復制酶復合物，由其催化從RNA到RNA的復制。這種復制過程是在宿主細胞的細胞漿中進行的，效率極高，所以由其介導的重組 RNA就可在細胞漿內(nèi)得到大量復制，從而使外源基因獲得高效表達。這種載體在研制新型復制型 DNA疫苗上取得了很大的成功。本研究小組利用 SFV復制子載體構(gòu)建了表達CSFV E2蛋白的DNA疫苗 (pSFV1CS-E2)，將pSFV1CS-E2以每頭豬600 μg的劑量肌肉注射途徑免疫3次 (每次間隔3周)，結(jié)果顯示，盡管在攻毒前疫苗誘導的抗體水平較低，但免疫豬可以抵抗豬瘟強毒的攻擊。隨后又對該疫苗的免疫效果作了進一步的評價，以100 μg的劑量免疫兩次 (間隔3周)，雖然檢測的抗體水平很低，但免疫豬仍然能夠抵抗豬瘟強毒的致死性攻擊[8-9]。后來，本研究小組利用基于CFSE染色來評價淋巴細胞增殖的方法，在小鼠模型上證實該甲病毒復制子載體豬瘟疫苗pSFV1CS-E2能夠誘導高水平的細胞免疫應答，而且豬偽狂犬病病毒 (PRV)UL49基因編碼的 VP22轉(zhuǎn)導蛋白可以顯著增強其免疫應答[10]。

甲病毒復制子載體是衍生于 RNA病毒基因組并能自主復制的 RNA分子，具有安全、操作方便、表達外源基因效率高、應用范圍廣等優(yōu)點，廣泛應用于基因免疫和基因治療當中[7,11]。這種基于復制子的DNA疫苗在免疫效力上要明顯優(yōu)于常規(guī)DNA疫苗。鄧瑤等將等量的SFV載體和常規(guī)DNA載體同等效率轉(zhuǎn)染細胞后，復制型載體表達水平比非復制型載體高約3倍；以不同劑量的SFV載體和常規(guī)DNA載體分別轉(zhuǎn)染BHK21細胞，復制型載體所有劑量組載體的表達量均高于非復制型載體[12]。復制子載體疫苗免疫效果佳的原因，一方面是表達外源抗原的量增多；另一方面是此類疫苗轉(zhuǎn)染細胞后，其 RNA復制酶合成大量雙鏈 RNA復制中間體，激活 RNaseL和RNA依賴的蛋白激酶 (PKR)，導致被轉(zhuǎn)染細胞的凋亡，從而進一步提高疫苗的免疫效果。因此，復制子載體疫苗也被稱為“自殺性”DNA疫苗[13]。然而，復制子載體疫苗的免疫劑量可以影響細胞凋亡的程度，高劑量免疫能夠影響抗原的表達和處理，進而影響疫苗免疫效果。本研究小組就證實了這種情況，我們在較低的免疫劑量和較少的免疫次數(shù)情況下，仍可使免疫豬只獲得完全的臨床保護[11]。因此這種復制子載體疫苗有望開發(fā)為防制豬瘟的新型候選疫苗。但該復制型DNA載體轉(zhuǎn)染細胞發(fā)生的凋亡 (盡管只是局部和瞬時的) 可能會帶來另外的安全問題，需要進一步進行安全評估。

2 病毒活載體疫苗

2.1 重組載體疫苗

重組載體疫苗是利用基因工程的方法將病毒復制非必需區(qū)克隆出來，經(jīng)體外改造后將異源性病毒的保護性抗原基因及啟動子調(diào)控序列等插入其中，通過體外同源重組技術(shù)獲得的一種疫苗。所謂病毒的復制非必需區(qū)是指當病毒基因組的某一核苷酸序列被敲除、突變或在該區(qū)域內(nèi)插入外源基因片段后，不影響病毒復制的區(qū)域[14]。在病毒復制非必需區(qū)插入外源基因構(gòu)建成的重組載體疫苗既可誘導機體產(chǎn)生針對異源性病毒的特異性免疫反應，又能使宿主獲得抵抗載體病毒相應毒株攻擊的免疫力。如果在載體病毒復制非必需區(qū)中同時插入多個異源性病毒的保護性抗原基因，還可以達到一針防多病的目的。豬瘟病毒重組載體疫苗是指將豬瘟病毒的免疫原性基因克隆到活病毒載體中而制備的一種疫苗。目前，常利用痘病毒、豬偽狂犬病病毒、腺病毒、桿狀病毒等作為載體表達豬瘟病毒 E2或/和 Erns結(jié)構(gòu)蛋白來構(gòu)建重組載體疫苗[15]。

痘病毒、豬偽狂犬病病毒等復制型病毒載體具有穩(wěn)定表達外源基因、外源基因表達水平高等優(yōu)點。已有研究表明，將 CSFVE2基因插入豬痘病毒的TK基因中，成功獲得了能表達 E2蛋白的重組豬痘病毒 (rSPV/CSFV-E2)[16]。將rSPV/CSFV-E2免疫豬只，可獲得免疫保護[17]。也有利用副痘病毒屬的口瘡病毒構(gòu)建豬瘟疫苗(ORFV VrV-E2) 的報道，將此重組體免疫動物，在致死性豬瘟病毒攻擊的早期，免疫動物機體產(chǎn)生了豬瘟特異性IFN-γ和高水平的中和抗體[18]。另外，將CSFV的E2基因插入豬偽狂犬病病毒的gD基因位點，可使偽狂犬病病毒喪失感染性，使病毒不會從免疫動物傳播到其他動物，安全性大大提高并且可對豬偽狂犬病和豬瘟提供雙重保護[19]。

除復制型病毒載體外，腺病毒、桿狀病毒等非復制型病毒載體因具有安全、高效、轉(zhuǎn)移和表達外源基因能力強等優(yōu)點，被廣泛用于動物疫苗開發(fā)和人類基因治療。本研究小組先前利用人5型復制缺陷性腺病毒載體，構(gòu)建了多株表達豬瘟病毒E2基因的重組腺病毒，用這些重組腺病毒免疫豬只后，能夠誘導高水平的CSFV特異性中和抗體，并且對致死性豬瘟病毒的攻擊提供完全免疫保護[20-21]。桿狀病毒屬于昆蟲細胞系的病毒，對人和動植物都無害，對宿主的專一性強，展現(xiàn)了樂觀的應用前景。本研究小組利用桿狀病毒表達系統(tǒng)構(gòu)建了表達豬瘟病毒E2基因的重組BacMam病毒，研究證實該重組病毒免疫小鼠后能夠誘導有效的免疫應答[22]。

雖然重組載體疫苗具有很大的開發(fā)應用潛力，但目前由于人類至今還不完全了解病毒的自然發(fā)生及變異機制，無法確定是否會產(chǎn)生攜有外源基因的強毒突變株，也無法控制該類病毒的未來走向，對此還需要做深入細致的研究。

2.2 嵌合病毒載體疫苗

所謂嵌合病毒載體是將兩種載體以某種方式嵌合到一起，將各自的優(yōu)點集成到一起，并且具有疊加和放大效應。本研究小組利用高遞送效率的人5型復制缺陷性腺病毒載體和高表達效率的甲病毒復制子載體，構(gòu)建了表達豬瘟病毒E2基因的腺病毒/甲病毒復制子嵌合載體豬瘟疫苗(rAdV-SFV-E2)。這種疫苗既能發(fā)揮腺病毒載體的高效轉(zhuǎn)移外源基因的能力，又能發(fā)揮甲病毒復制子載體自我復制后高效表達外源基因及其誘導強大細胞免疫應答的優(yōu)勢。研究結(jié)果表明，在家兔模型上，rAdV-SFV-E2以106TCID50劑量接種1次，最早可于接種后第9天就產(chǎn)生豬瘟特異性抗體，高水平的抗體可持續(xù)180 d以上，免疫家兔能夠完全抵抗豬瘟病毒C株的攻擊；在豬體上，rAdV-SFV-E2以107TCID50劑量接種豬只兩次，免疫豬可產(chǎn)生強烈的、均衡的體液免疫和細胞免疫應答。免疫應答水平明顯高于表達豬瘟E2蛋白的重組腺病毒 (rAdV-E2) 和甲病毒復制子載體豬瘟疫苗 (pSFV1CS-E2)，并且免疫豬從臨床上和病毒學上能完全抵抗致死性豬瘟強毒的攻擊 (不表現(xiàn)臨床癥狀、病理變化和病毒血癥)[23]。進一步研究證實，該疫苗對靶動物和非靶動物安全；以 6.25×105TCID50劑量免疫兩次或以107TCID50劑量免疫1次，可完全抵抗豬瘟強毒的攻擊；能夠突破豬瘟母源抗體的干擾；與豬藍耳病活疫苗和豬偽狂犬病活疫苗同時免疫互不干擾；幾乎不誘導抗腺病毒載體抗體的產(chǎn)生，對腺病毒載體疫苗的再次免疫無抑制作用[24]；最早于免疫后3周提供完全保護，免疫保護可持續(xù)半年 (待發(fā)表)。這是首例基于單一抗原基因的豬瘟基因工程疫苗提供消除性免疫 (Sterile immunity) 的報道。這種疫苗將兩種載體的優(yōu)點集于一身，顯著提高了疫苗的免疫效力，這種策略對于其他動物疫苗的研發(fā)都有重要借鑒價值。目前，該疫苗正在進行轉(zhuǎn)基因微生物安全評價及生產(chǎn)工藝的研究。

3 基于蛋白/肽的疫苗

近年來，基于蛋白/肽的疫苗主要有亞單位疫苗和合成肽疫苗。亞單位疫苗僅含有病毒的一種或幾種保護性抗原，不含有病毒粒子的其他遺傳信息，因而具有安全性好、穩(wěn)定性強和無需滅活的優(yōu)點。現(xiàn)今，最有效的CSF亞單位疫苗是基于CSFV主要保護性抗原 E2糖蛋白而研制的，且其中免疫原性最強的一個為表達缺少跨膜區(qū)的重組E2糖蛋白。Hulst等利用E2基因與桿狀病毒重組后導入昆蟲細胞中進行表達，獲得了一系列的重組 E2糖蛋白。其試驗結(jié)果顯示，用20～100 μg表達的 E2糖蛋白免疫豬，可抵抗100 LD50的致死性豬瘟強毒的攻擊，并且其誘導產(chǎn)生的中和抗體水平遠高于弱毒疫苗免疫產(chǎn)生的水平[25]。de Smit等研究表明，豬瘟E2亞單位疫苗一次免疫就能夠使免疫豬抵抗豬瘟強毒攻擊，獲得長達 13個月持續(xù)性的免疫保護[26]。已有實驗證實，經(jīng)酵母系統(tǒng)表達的豬瘟病毒 E2亞單位疫苗能對哨兵豬提供完全免疫保護并能阻止豬瘟病毒的水平傳播[27]。然而也有報道，雖然豬瘟 E2亞單位疫苗對豬有良好的保護作用，且能通過檢測抗Erns蛋白的抗體將疫苗免疫豬與自然感染豬區(qū)分開來，但是該疫苗不能有效地防止豬瘟病毒的水平傳播和垂直傳播[28-30]，而且亞單位疫苗的免疫原性通常較低，需要與佐劑合用，或偶聯(lián)到適當?shù)妮d體上應用。這種疫苗阻止病毒水平傳播的差異可能與疫苗質(zhì)量、免疫程序、攻毒用毒株、攻毒的途徑等方面的不同有關(guān)。

肽疫苗包括抗原表位疫苗和樹狀肽疫苗，是指利用重組DNA技術(shù)根據(jù)豬瘟病毒基因組的核苷酸序列，推導出豬瘟病毒蛋白質(zhì)的氨基酸序列，然后利用人工合成方法制備相應的寡肽，再與佐劑偶聯(lián)制成的疫苗[31]。豬瘟病毒主要的免疫原E2糖蛋白具有A、B、C三個抗原區(qū)，其中A抗原區(qū)高度保守。經(jīng)對抗原表位疫苗的研究發(fā)現(xiàn)，僅含有E2蛋白A抗原區(qū)的突變體就能對致死性豬瘟病毒的攻擊提供完全保護[32]。覆蓋 A抗原區(qū)的 6個重疊肽 (A1～A6) 疫苗中，A2和A6多肽疫苗包含了E2蛋白的主要線性中和抗原表位，能誘導免疫豬產(chǎn)生堅強的免疫力。對 E2糖蛋白的B、C抗原區(qū)研究發(fā)現(xiàn)，覆蓋B/C抗原區(qū)的5個重疊肽 (BC1-BC5) 疫苗可以誘導肽特異性中和抗體。其中BC1多肽疫苗包含了E2蛋白的主要線性中和抗原表位，能誘導最強的免疫保護活性，其次為BC4多肽疫苗，含有E2蛋白的次要線性中和抗原表位。豬瘟樹狀肽疫苗是通過賴氨酸樹將源于豬瘟病毒E2糖蛋白的B細胞表位的 4個拷貝與源于豬瘟病毒 NS3蛋白的 T細胞表位連接起來構(gòu)建的肽疫苗。Tarradas等利用這種方法構(gòu)建了3種樹狀肽豬瘟疫苗，免疫攻毒試驗結(jié)果顯示，樹狀肽疫苗能使免疫動物獲得部分保護[33]。因此，基于蛋白/肽的疫苗也是一種很有發(fā)展?jié)摿Φ男滦蜆擞涁i瘟疫苗。

4 基于瘟病毒的疫苗

4.1 豬瘟病毒基因缺失弱毒疫苗

病毒基因缺失弱毒疫苗是利用基因工程技術(shù)，使某些與病毒復制無關(guān)的毒力基因缺失、突變，以致病毒毒力明顯減弱或喪失，但病毒的復制能力并不喪失，同時還保持著良好的免疫原性，由此獲得基因缺失弱毒疫苗株。

對于豬瘟病毒缺失弱毒疫苗，主要通過缺失CSFVErns和E2基因來研制[34]。有研究者在豬瘟病毒 C株感染性克隆 FLc2的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了CSFVErns基因全部缺失或部分缺失的突變株FLc22和FLc23。這些缺失突變株能夠在組成性表達 Erns的 SK6細胞系中復制傳代，裝配的子代病毒由于缺失了囊膜蛋白 Erns而喪失了感染性[35]，從而不會在免疫動物機體中擴散，亦不能傳播給接觸動物[36]，安全性較高。動物試驗結(jié)果顯示，接種缺失突變株Flc22和Flc23的豬均能抵抗CSFV強毒株Brescia的致死性攻擊，并且由于這種突變株的基因組編碼 E2蛋白，但不編碼缺失的Erns蛋白，故可用于鑒別疫苗免疫的豬和野毒感染的豬。后來，又有研究者按照這種方法構(gòu)建了 CSFVE2基因全部 (Flc47) 或部分(Flc4、Flc48) 缺失突變株，這些缺失病毒均可以在組成性表達 E2蛋白的細胞系中感染和復制，但同樣不產(chǎn)生具有感染性的子代病毒[37]。這表明E2蛋白的每一個抗原區(qū) (A/B/C抗原區(qū)) 對豬瘟病毒的復制都是必需的。將這些缺失突變株接種豬后，F(xiàn)lc4免疫豬能抵抗致死性豬瘟強毒的攻擊，其他兩個突變株可提供部分免疫保護。此外，這些病毒突變株還能通過血清學試驗區(qū)別于正常毒株[38]。

4.2 嵌合瘟病毒疫苗

豬瘟病毒/牛病毒性腹瀉病毒 (CSFV/BVDV) 嵌合病毒疫苗是通過反向遺傳技術(shù)，用BVDV的保護性抗原基因替換CSFV弱毒株上相應的保護性抗原基因而制備成的嵌合瘟病毒疫苗。van Gennip等在CSFV C株感染性克隆的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了3個CSFV/BVDV全長DNA拷貝，以 BVDV 5250株的E2、或Erns、或E2和Erns基因分別取代CSFV的E2、或Erns、或E2和Erns的相應序列區(qū)域，構(gòu)成重組的嵌合病毒株Flc9、Flc11和 Flc2[39]。其研究結(jié)果顯示，兩種瘟病毒抗原區(qū)的替換并沒有改變感染細胞的嗜性，并且Flc9、Flc11這兩種病毒分別誘導產(chǎn)生了抗E2和Erns的抗體，且能與野毒感染產(chǎn)生的抗體區(qū)分開來。而且這些經(jīng)改造后的嵌合病毒能對CSFV的致死性攻擊提供完全免疫保護。反之，將CSFV疫苗株的E2和Erns部分序列分別用BVDV相應區(qū)段替換后構(gòu)建兩個嵌合病毒 (FIc2、FIc3)，該嵌合病毒在免疫接種1～2周后，即可對豬產(chǎn)生較好的免疫保護作用[40]。

目前，研究延續(xù)性較強且很有開發(fā)前景的一種新型豬瘟疫苗是 CP7_E2alf，該疫苗研究至今已有十余年，目前正在歐盟注冊。這種疫苗是以BVDV CP7株為骨架，將其E2基因用 CSFV Alfort株基因組的E2基因取代，該嵌合病毒能在豬源細胞上有效生長[41]。在將近 10年的時間里，用該疫苗相繼進行了家豬與野豬免疫效力試驗、不同免疫途徑試驗、不同免疫劑量試驗、對靶動物及非靶動物安全性試驗、與其他豬瘟疫苗(包括豬瘟弱毒疫苗 C株) 比較試驗、免疫持續(xù)期試驗等。研究結(jié)果證實，該疫苗一次免疫后14 d (肌肉) 和21 d (口服) 能夠?qū)ωi瘟病毒的攻擊提供完全保護[42]；一次口服免疫能對早期豬瘟病毒攻擊提供部分保護并干擾豬瘟病毒發(fā)病機理相關(guān)的細胞因子應答反應[43]；對靶動物 (家豬、野豬) 及非靶動物 (牛、羊、兔) 安全[44-45]；免疫效果與C株相當，且具有標記特征[46]；105.25TCID50免疫劑量能夠提供完全保護；該疫苗在豬體上的免疫持續(xù)期可達 6個月之久[47]。用CP7_E2alf疫苗肌肉免疫5和8周齡仔豬，并于免疫后 2周攻豬瘟強毒，結(jié)果顯示，CP7_E2alf疫苗能對帶有 C株母源抗體的仔豬提供有效的免疫保護[48]。從免疫保護和標記特性看，CP7_E2alf疫苗是較理想的候選豬瘟標記弱毒活疫苗[49]。

5 問題與展望

迄今為止，豬瘟疫苗仍然是預防、控制及凈化我國豬瘟的有效手段之一。傳統(tǒng)的豬瘟兔化弱毒疫苗已不能滿足防控和根除豬瘟的要求。因此，許多研究者開始致力于研制新型豬瘟疫苗。雖然近年來研制的新型豬瘟疫苗具有各自的優(yōu)勢，但也存在一定的缺陷 (表 1)。DNA 疫苗易于制備，具有相對較好的穩(wěn)定性，能同時誘導體液免疫與細胞免疫應答，但其誘導產(chǎn)生抗體的速度慢，接種劑量大，有整合和轉(zhuǎn)化染色體的潛在危險；病毒活載體疫苗能穩(wěn)定表達外源基因，但人類至今還不完全了解病毒的自然發(fā)生及變異機制，無法控制該類病毒的未來走向；亞單位疫苗安全，不含有感染性病毒成分，無致病性也無需滅活，但其免疫原性通常要比完整的病毒抗原差，需要多次免疫并配合佐劑才能提供有效保護；樹狀肽疫苗聯(lián)合多個抗原表位，卻僅能誘導部分免疫保護；基因缺失弱毒疫苗因其毒力基因被人為地刪除，往往不可能完全自行修復，故不會發(fā)生返祖現(xiàn)象，但弱毒疫苗的長期使用可能會改變豬瘟病毒原有的生態(tài)環(huán)境和病毒群落，使豬瘟流行毒株向遠離疫苗毒的方向演化，這將給豬瘟的控制帶來新的挑戰(zhàn)。

相比而言，腺病毒/甲病毒復制子嵌合載體豬瘟疫苗 rAdV-SFV-E2和嵌合瘟病毒 CP7_E2alf疫苗是很有希望的新型豬瘟標記疫苗，這兩種疫苗在免疫效力上與豬瘟兔化弱毒疫苗相當，且均具有 DIVA特性，而且 rAdV-SFV-E2還不受豬瘟母源抗體干擾及與其他疫苗同時免疫互不影響，且非常安全。這兩種疫苗有望進入臨床應用，不過需經(jīng)過轉(zhuǎn)基因微生物安全性評價。相信在不遠的將來，安全有效的新型豬瘟疫苗將會用于豬瘟的防控和凈化之中。

表1 不同類型豬瘟疫苗的特點比較Table 1 Comparison of different types of vaccines against CSF

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