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    低酶學水平的慢性HBV感染者肝組織學改變與CD28表達的相關(guān)性研究

    2013-09-03 02:27:02李佩波鄧存良
    海南醫(yī)學 2013年11期
    關(guān)鍵詞:組織學感染者活動度

    劉 冰,李佩波,鄧存良

    (1.川北醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院(四川綿陽四0四醫(yī)院)感染科,四川 綿陽 621000;2.瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院感染科,四川 瀘州 646000)

    乙型病毒性肝炎簡稱“乙肝”,是由乙型肝炎病毒(HBV)感染人體后導致以肝臟損害為主的傳染性疾病。慢性HBV感染者一般分為HBV攜帶者、慢性乙肝輕、中、重度和重型肝炎及肝炎肝硬化。我國現(xiàn)約有9 300萬慢性HBV感染者[1-2],該病嚴重威脅我國人民的身體健康。其發(fā)病機制十分復雜,國內(nèi)外研究較多,但目前仍不十分清楚。本研究針對血清酶學(ALT)低水平(≤3 ulm)的HBV感染者肝組織學進行研究,檢測其肝組織病理改變情況以及肝組織中CD28的表達情況,了解CD28的表達與肝組織的炎癥活動及肝纖維化進程之間的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 病例來源 四川綿陽四0四醫(yī)院感染科2007-2010年收治的慢性HBV感染患者共71例,男性60例,女性11例,年齡15~64歲,平均(35±17.4)歲。所有患者診斷符合2000年《病毒性肝炎防治方案》[3]的診斷標準。71例患者外周血中HBV-DNA定量≥103copies/ml,肝功酶學指標(ALT≤120 U/L);均未接受抗病毒治療,且排除合并其他嗜肝病毒感染及其他肝臟疾病。

    1.2 分組情況 以肝功酶學指標(ALT)為標準分為三組,ALT≤40 U/L組(Ⅰ組);40 U/L<ALT≤80 U/L組(Ⅱ組);80 U/L<ALT≤120 U/L組(Ⅲ組)。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 血清學指標的檢測 采用化學發(fā)光法檢測乙肝病毒標記物(HBVM)(上海新波有限公司),酶動力學法檢測肝功酶學(上海德賽有限公司),終點發(fā)檢測膽紅素和蛋白(上海德賽有限公司),PCR熒光定量(瑞士羅氏公司)檢測HBV DNA定量(深圳凱杰有限公司)。

    1.3.2 肝組織病理檢測 在B超引導下行肝穿采集活體肝組織標本,要求每條肝組織標本長度在1.5 cm以上。采用HE染色檢測肝組織的炎癥活動度和纖維化程度。免疫組化染色,SP法檢測肝組織中CD28的表達。

    1.4 結(jié)果判定 由兩名經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)生看片。炎癥活動度分級用G0~G4表示;纖維化分期用S0~S4表示。免疫組化結(jié)果為肝細胞胞漿被染成棕黃色或棕褐色為陽性細胞,在高倍鏡下(400×)每張切片選取5個不連續(xù)視野采集圖片,使用Image-Pro Plus 6.0彩色圖像分析系統(tǒng)對圖片中陽性反應部位進行處理分析。采用積分光密度(IOD)值表示CD28的表達強度。

    1.5 統(tǒng)計學方法 實驗結(jié)果經(jīng)SPSS13.0錄入采用單因素方差分析,檢驗水準α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 患者血清學指標結(jié)果 71例患者乙肝病毒標記物均為陽性,HBV-DNA定量>103copies/ml。ALT≤40 U/L者17例(23.94%);40 U/L<ALT≤80 U/L者31例(43.66%);80 U/L <ALT≤120 U/L者 23例(32.39%)。

    2.2 肝組織病理學檢查結(jié)果 71例患者中,肝組織學完全正常(G0S0)者3例(4.23%),肝組織學存在不同程度損害者68例(95.77%),其中早期肝硬化3例(4.23%),見表1。

    表1 71例肝組織病理學檢查結(jié)果

    2.3 CD28表達情況 CD28在所有患者的肝組織中均有表達,胞漿染色呈棕黃色或者棕褐色細胞為陽性細胞,主要集中在炎性壞死區(qū)和纖維化周圍,見圖1~圖2。在不同炎癥活動度和纖維化程度的肝組織中所測得陽性細胞的積分光密度(IOD)值不同,見表2、表3??偟内厔菔?,IOD值與肝組織炎癥活動度和纖維化程度平行。

    圖1 CD28在正常肝組織中的表達(SP,×400)

    圖2 CD28在G2S2肝組織中的表達(SP,×400)

    表2 CD28在G0~G3肝組織中表達比較(±s)

    表2 CD28在G0~G3肝組織中表達比較(±s)

    注:總 F=14.77;G0/G1:F1=3.12、P>0.05;G0/G2:F2=4.17、P2<0.05;G0/G3:F3=4.49、P3<0.05;G1/G2:F4=3.03、P4>0.05;G1/G3:F5=4.10、P5<0.05;G2/G3:F6=4.08、P6<0.05。

    炎癥活動度分級總P值G0G1G2G3例數(shù)3 26 28 14 IOD值8.31±0.44 10.33±1.33 13.62±1.79 19.12±1.79 P<0.05

    表3 CD28在S0~S4肝組織中表達比較(±s)

    表3 CD28在S0~S4肝組織中表達比較(±s)

    注:總 F=19.01;S0/S1:F1=3.67、P>0.05;S0/S2:F2=4.11、P2<0.05;S0/S3~4:F3=4.41、P3<0.05;S1/S2:F4=3.82、P4>0.05;S1/S3~4:F5=4.15、P5<0.05;S2/S3~4:F6=3.21、P6>0.05。

    纖維化分期總P值S0 S1 S2 P<0.05 S3~4例數(shù)9 23 29 10 IOD值6.05±0.91 8.83±1.82 13.48±1.39 17.41±2.40

    2.4 CD28在不同ALT組別肝組織中的表達差異 不同ALT組別的肝組織中CD28的表達強度不同,總的趨勢隨ALT的增高CD28的表達增強,見表4。

    表4 CD28在不同ALT的肝組織中表達(±s)

    表4 CD28在不同ALT的肝組織中表達(±s)

    注:總F=14.48;Ⅰ/Ⅱ,F(xiàn)1=3.56、P1>0.05;Ⅰ/Ⅲ,F(xiàn)2=4.13、P2<0.05;Ⅱ/Ⅲ,F(xiàn)3=4.58、P3<0.05。

    組 別 例數(shù)IOD值 總P值17 31 23Ⅰ組Ⅱ組Ⅲ組9.88±0.89 11.78±1.31 21.19±3.36 P<0.05

    3 討論

    近幾年,國內(nèi)對慢性乙型病毒性肝炎肝組織學改變及其發(fā)病機作了大量研究,但是對血清酶學低水平(ALT≤3 ULN)的慢性HBV感染者研究較少。本課題針對該類人群肝組織病理改變、肝組織中CD28的表達狀態(tài)進行了研究,探討CD28的表達與肝組織學改變以及在低酶學水平狀態(tài)下與酶學變化的關(guān)系。

    3.1 CD28與肝組織學改變的關(guān)系 CD28分子是免疫球蛋白超家族成員之一。CD8+細胞一般分為特異性殺傷T細胞(Tc)和免疫抑制性T細胞(Ts),這兩類細胞對機體的免疫起著重要的調(diào)節(jié)作用[4-5]。目前,對外周血中CD28的表達研究報道較多。但在肝組織中檢測報道不多。本研究發(fā)現(xiàn),當肝組織炎癥活動度和纖維化程度處于較低水平時,組織中的CD28表達水平也較低;當炎癥活動增強和纖維化加深后,CD28表達明顯增強。說明CD28的表達強度和肝組織病理損害程度具有同步性,這可能與人體免疫應答有關(guān)。當機體進入免疫耐受期時,CD28不表達或表達水平低,B7/CD28共刺激通路異常,T細胞活化差,抑制CD4+T細胞產(chǎn)生細胞因子,病毒不能清除,機體處于免疫耐受期;當機體處于免疫清除期時,CD28表達水平升高,Tc促進T淋巴細胞的增殖、活化[6-7]。由此證明,肝組織中CD28的表達在乙型病毒性肝炎的發(fā)病機制中起到非常重要的作用。

    3.2 CD28表達與血清酶學(ALT)的關(guān)系 本文對低酶學(ALT)水平的慢性HBV感染者肝組織病理學及CD28表達強度進行檢測,結(jié)果顯示,在不同ALT組別的肝組織中CD28的表達強度存在差異,其趨勢為隨ALT的增高CD28表達增強,說明ALT在一定程度上可以反應出肝組織炎癥活動度能力??梢姡珹LT目前仍是慢性乙肝患者肝臟病理炎癥監(jiān)測的一個重要的血清學指標[8]。

    綜上所述,CD28在病毒性肝炎的發(fā)生和進展過程中起到重要作用,但其機理還有待進一步研究。

    [1]Liang X,Bi S,Yang W,et al.Epidemiological serosurvey of hepatitis B in China-declining HBV prevalence due to hepatitis B vaccination[J].Vaccine,2009,27:6550-6557.

    [2]Lu FM,Zhuang H.Management of hepatitis B in China[J].Chin Med J(Engl),2009,122(1):3-4.

    [3]中華醫(yī)學會.病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病雜志,2000,8(6):324.

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    [6]劉 紅.慢性乙型肝炎患者CD28的表達及CTL、Ts的研究[J].國際消化病雜志,2008,28(6):507-509.

    [7]Thimme R,Wieland S,Steiger C,et a1.CD8 T cells mediate viral clearance and disease pathogenesis during acute hepatitis B virns infection[J].J Virol,2003,77:68-76.

    [8]李 靜,劉素芬,葉立紅,等.ALT小于2×ULN慢性乙型肝炎患者的肝組織病理學分析[J].臨床肝膽病雜志,2008,24(3):189-190.

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