氣相色譜法測定茴香腦三硫酮中殘留溶劑

陳璐

茴香腦三硫酮又名膽維他，是一種分泌性的利膽藥，能明顯增強(qiáng)肝臟谷胱甘肽(GSH)水平，顯著增強(qiáng)谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)，谷胱甘肽還原酶(GSSG-R)和谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GSH-S-Tx)活性，降低谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)活性，從而增強(qiáng)肝細(xì)胞活力，使膽汁分泌增多。本品合成工藝中主要使用了二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇，前兩種溶劑均為第二類溶劑，乙醇為第三類溶劑［1，2］，均應(yīng)進(jìn)行限度控制。參照《中國藥典》2005年版二部附錄ⅧP殘留溶劑測定法的指導(dǎo)原則，采用氣相色譜法測定上述三種溶劑，方法簡便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

表1 合成工藝中使用的主要有機(jī)溶劑

1 儀器與試藥

Agilent 6890N氣相色譜儀及工作站。FID檢測器。二甲基甲酰胺、乙醇均為色譜純，二甲苯為分析純試劑。樣品由四川某制藥公司提供。

2 色譜條件

色譜柱:PEG-20000毛細(xì)管柱(15 m×0.53 μm×1 μm)，進(jìn)樣口溫度190℃，檢測器溫度230℃;柱程序升溫:初始溫度為 40℃，保持 min，以每分鐘15℃的速度升溫至150℃，保持3 min。進(jìn)樣口分流比5∶1，載氣為氮?dú)?，速?.0 ml/min。

分別取二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇各適量，精密稱定，用甲醇制成每1 ml中含乙醇、二甲苯和二甲基甲酰胺各200 μg的混合溶液，取1 μl照上述色譜條件試驗(yàn)，三個(gè)組分以及溶劑甲醇完全分離，出峰順序依次為:乙醇、二甲苯和二甲基甲酰胺，三個(gè)待測組分的分離度依次為36.8，7.6和22.5;乙醇和溶劑甲醇完全分離，分離度為2.7。具體色譜圖見圖1。

圖1 混合對照品溶液的GC色譜圖

3 最低檢出濃度

將二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇用甲醇逐級稀釋，按上述色譜條件測定，最低檢出濃度依次為 2.0ng、1.0ng和3.0ng。

4 線性關(guān)系

精密稱取二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇適量，用甲醇稀釋制成每1 ml中分別含異丙醇和丙酮各約1000 μg的混合對照品儲(chǔ)備溶液，再用取儲(chǔ)備溶液加水稀釋制成每1 ml中各約含 500 μg、200 μg、100 μg、10 μg、5 μg 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，依法測定。以濃度為橫坐標(biāo)(μg/ml)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，這三種溶劑在測定范圍內(nèi)濃度和峰響應(yīng)的線性關(guān)系良好。

表2 回歸方程與線性范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=5)

5 加樣回收實(shí)驗(yàn)

取已測定殘留溶劑的茴香腦三硫酮0.2 g，精密稱定，加已知濃度的混合對照品溶液4.0 ml，密塞，超聲處理1 min，濾過，取續(xù)濾液依法測定，作回收率計(jì)算。結(jié)果二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇的回收率分別為98.0%、98.3%和102.2%，回收結(jié)果良好，能滿足測定的需要。

6 精密度

取“4”項(xiàng)下濃度為100 μg/ml的對照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行檢測，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算乙醇、二甲苯、二甲基甲酰胺峰面積的RSD分別為0.56%，0.89%，1.12%。

7 樣品的測定

取樣品約0.2 g，精密稱定，加甲醇4.0 ml，密塞，超聲處理1 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液;另分別取二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇各適量，精密稱定，用甲醇制成每1 ml中含乙醇250 μg、二甲苯108 μg 和二甲基甲酰胺44 μg 的混合溶液，作為對照品溶液。照上述色譜條件試驗(yàn)，結(jié)果三批樣品中二甲基甲酰胺和乙醇均未檢出，二甲苯的殘留量低于中國藥典的限度規(guī)定，結(jié)果見表3。

表3 樣品測定結(jié)果

8 討論

8.1 由于采用了直接進(jìn)樣法，故藥品本身也可能給試驗(yàn)帶來影響，故進(jìn)樣口的溫度不宜過高，以免藥品本身破壞帶來干擾，試驗(yàn)證明，在190℃既能保證溶劑的汽化而且茴香腦三硫酮也不會(huì)被破壞對測定造成影響。

8.2 由于茴香腦三硫酮在甲醇中溶解性有限，故供試品需要濾過來分離未溶解部分，但回收試驗(yàn)證明三個(gè)待測溶劑測定結(jié)果不受影響。

［1］國家藥典委員會(huì).中國藥典(二部).北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:(附錄):54.

［2］ICH藥品注冊的國際技術(shù)要求，2007質(zhì)量部分:Q3C.