瞿國英(上海市濰坊社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心,上海 200122)
類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者外周血中存在的抗環(huán)瓜氨酸多肽(CCP)抗體已列入2009年美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)提出的RA分類標(biāo)準(zhǔn)和評分系統(tǒng)中[1-2]??笴CP抗體檢測方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、化學(xué)發(fā)光法(CIA)和膠體金免疫層析法(GICA)等。其中GICA檢測方法簡單、快速,可滿足抗CCP抗體即時檢驗(yàn)的需求[3]。但GICA檢測通常采用原倍血清標(biāo)本,檢測結(jié)果受實(shí)驗(yàn)條件和標(biāo)本處理的影響較大[4]。本文探討了不同采血管和標(biāo)本放置時間對血清抗CCP抗體GICA檢測結(jié)果的影響。
1.1 一般資料 本衛(wèi)生服務(wù)中心門診患者及體檢者178例,女95例、男83例,年齡18~76歲,平均43歲。
1.2 試劑 普通真空采血管和含促凝分離膠采血管(江蘇康健);抗CCP抗體GICA及ELISA檢測試劑盒(上??菩拢?。
1.3 方法 于肘正中靜脈采血12mL,分別注入3支普通真空采血管和2支含促凝分離膠采血管各3mL,普通真空采血管標(biāo)本室溫靜置2、4h后以全血標(biāo)本或以3 000r/min離心5 min后血清標(biāo)本,采用GICA法進(jìn)行抗CCP抗體檢測。同時以普通真空采血管3 000r/min離心5min血清標(biāo)本進(jìn)行ELISA檢測。所有檢測步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書要求操作。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析;計數(shù)資料以百分率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn);顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05,P<0.05為比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.1 標(biāo)本靜置時間對檢測結(jié)果的影響 普通采血管標(biāo)本靜置2h后,全血GICA檢測抗CCP抗體陽性率為14.0%(25/178),25例GICA檢測陽性標(biāo)本,ELISA檢出陽性19例、陰性6例,153例GICA檢測陰性標(biāo)本ELISA檢測均為陰性,2種方法檢測結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。25例GICA檢測陽性全血標(biāo)本經(jīng)離心后的血清標(biāo)本GICA檢出陰性2例;靜置4h后,全血標(biāo)本檢出陰性陽性5例,陽性率為11.2%(20/178例),與靜置2h全血標(biāo)本檢測結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。靜置4h后,全血、血清標(biāo)本檢測陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。
2.2 不同采血管對檢測結(jié)果的影響 分離膠采血管標(biāo)本靜置2h后,全血標(biāo)本及血清標(biāo)本血清標(biāo)本GICA檢測陽性率均為11.2%(20/178),與相同靜置時間、相同類型標(biāo)本檢測結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。靜置4h后普通采血管與分離膠采血管全血與血清標(biāo)本檢測結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。靜置2h后普通采血管血清標(biāo)本ELISA檢測陽性率為10.7%(19/178),與GICA法檢測結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。
表1 不同靜置時間及處理方式標(biāo)本抗CCP抗體檢測陽性率[%(n)]
GICA檢測具有操作簡單、耗時短、特異、靈敏、無需輔助試劑和儀器、結(jié)果可長期保存等特點(diǎn),是目前較為常用的免疫學(xué)檢測技術(shù)之一,特別適用于社區(qū)醫(yī)院、野外作業(yè),尤其適用于急診檢驗(yàn)和人群普查。
影響GICA檢測結(jié)果因素較多,試劑因素包括膠體金顆粒大小、膠體金標(biāo)記抗體量、包被抗原濃度和硝酸纖維素膜的質(zhì)量等,實(shí)驗(yàn)操作因素包括反應(yīng)溫度、判讀時間和加樣量等,除此之外,標(biāo)本預(yù)處理對于檢測結(jié)果的影響也較大[5]。本研究顯示,靜脈血標(biāo)本采集后靜置2h內(nèi)檢測,易出現(xiàn)假陽性結(jié)果,其原因可能在于血液凝固不完全,存在大量纖維蛋白原,影響層析速度和均一性,抗原抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合而導(dǎo)致假陽性結(jié)果;在此時進(jìn)行高速離心,并不能改善結(jié)果。延長標(biāo)本靜置時間或使用含促凝分離膠采血管,可有效降低假陽性比例。本研究結(jié)果顯示,GICA和ELISA檢測結(jié)果符合率達(dá)99.4%。
抗CCP抗體GICA檢測試劑盒以其快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn),已成為RA早期診斷的有力工具,并廣泛應(yīng)用于基層醫(yī)療單位[6]。在使用過程中,應(yīng)規(guī)范標(biāo)本預(yù)處理、實(shí)驗(yàn)操作和試劑儲存,避免因操作不當(dāng)引起的實(shí)驗(yàn)誤差。
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[6]張清,劉彧,徐滬濟(jì).類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體的快速篩查[D].北京:全國第八屆中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕病學(xué)術(shù)會議,2010.