頂空氣相色譜法測(cè)定布洛芬緩釋膠囊中乙醇?xì)埩袅?/h1>
2013-08-21 07:44:04王洪江王萌萌孫洪剛王超眾
中國醫(yī)藥科學(xué) 2013年15期
王洪江 王萌萌 王 穎 康 慧 孫洪剛 劉 磊 王超眾
1.黑龍江省綏化市第一醫(yī)院，黑龍江綏化 152000；2.黑龍江省齊齊哈爾市第一醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161005；3.黑龍江省齊齊哈爾市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江齊齊哈爾 161006
布洛芬緩釋膠囊由于其緩釋機(jī)制使其具有良好的解熱、鎮(zhèn)痛及抗炎作用[1]。近年來隨著臨床的廣泛應(yīng)用， 其不良反應(yīng)時(shí)有報(bào)道，如胃腸道反應(yīng)、語言障礙、眩暈、皮疹、過敏性休克、哮喘嚴(yán)重發(fā)作等[2-4]。由于在布洛芬緩釋微丸的制備工藝中，緩釋粘合劑配制中用到95%乙醇[5]，而中華人民共和國藥典二部中規(guī)定乙醇屬于第三類溶劑[6]，因此有必要對(duì)其進(jìn)行控制。本研究采用頂空氣相色譜法，以丙酮為內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)法對(duì)布洛芬緩釋膠囊中乙醇?xì)埩袅窟M(jìn)行測(cè)定，為制劑的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
Agilent 7890A GC System氣相色譜儀，Agilent 7694E Headspace Sampler頂空自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent GC ChemStation工作站，Sartorius BP221S型電子分析天平。
1.2 試藥
布洛芬緩釋膠囊（市售品，批號(hào)20110106，20111021，20111022，規(guī)格：0.3 g），布洛芬對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，100179-200303，規(guī)格：100 mg），無水乙醇（色譜純，Merck公司），丙酮（色譜純，Merck公司），水為超純水。
2 方法與結(jié)果
2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備
精密稱取丙酮0.2 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液5 mL，置1000 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得內(nèi)標(biāo)溶液。
2.2 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取無水乙醇1 g，置100 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液5 mL，置100 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液5 mL，置頂空瓶中，密封，即得對(duì)照品溶液。
2.3 供試品溶液的制備
取布洛芬緩釋膠囊20粒，取內(nèi)容物置乳缽中，研細(xì)。精密稱取上述細(xì)粉5 g，置100 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液70 mL，振搖10 min使乙醇溶解，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取上述溶液5 mL，置頂空瓶中，密封，即得供試品溶液。
2.4 陰性對(duì)照溶液的制備
精密稱取布洛芬對(duì)照品0.3 g，置10 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取上述溶液5 mL，置頂空瓶中，密封，即得陰性對(duì)照溶液。
2.5 色譜條件
色譜柱：Agilent HP-FFAP（30 m×0.320 m，0.25μm）毛細(xì)管柱；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣口溫度為150 ℃；檢測(cè)器溫度為250 ℃；頂空瓶平衡溫度為85 ℃；平衡時(shí)間為30 min；定量環(huán)溫度為105 ℃；傳輸管溫度為120 ℃；載氣為氮?dú)猓魉?.0 mL/min；分流比20︰1；進(jìn)樣量1 mL。取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。理論塔板數(shù)按乙醇峰計(jì)，均不低于5000；丙酮峰與乙醇峰之間的分離度符合要求；陰性對(duì)照溶液對(duì)測(cè)定無干擾。
圖1 陰性對(duì)照溶液（A）、對(duì)照品溶液（B）、供試品溶液（C）色譜圖
2.6 線性關(guān)系考察
精密稱取無水乙醇1.0072 g，置100 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋成含乙醇濃度分別為 0.050 36，0.100 72，0.201 44，0.402 88，1.007 20， 2.014 40 mg/mL的溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以乙醇濃度為橫坐標(biāo)，乙醇峰面積與丙酮峰面積的比值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程：Y=30.95X+0.1294（r=0.9997，n=6）。結(jié)果表明乙醇在0.050 36～2.0144 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.7 檢出限、定量限考察
取“2.6項(xiàng)下”濃度為0.050 36 mg/mL的溶液繼續(xù)稀釋，按上述色譜條件測(cè)定，得乙醇的檢出限濃度為0.3μg/mL（S/N=3），定量限濃度為 1μg/mL（S/N=10）。
2.8 精密度試驗(yàn)
取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。計(jì)算乙醇峰面積與丙酮峰面積的比值，RSD=0.67%（n=6），結(jié)果表明該方法精密度良好。
2.9 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批號(hào)的樣品6份（批號(hào)20110106），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算乙醇?xì)埩袅?。結(jié)果6份供試品乙醇?xì)埩袅浚琑SD=1.21%（n=6）。
2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8，24 h 進(jìn)樣，記錄色譜圖。內(nèi)標(biāo)法計(jì)算乙醇?xì)埩袅浚琑SD=0.35%，表明在24 h內(nèi)溶液穩(wěn)定。
2.11 加樣回收試驗(yàn)
精密稱取9份已知含量的樣品（批號(hào)：20110106）細(xì)粉各5 g，置100 mL量瓶中，分別精密加入“2.6”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液 1.2，1.5，1.8 mL，加內(nèi)標(biāo)溶液 70 mL，振搖 10 min 使乙醇溶解，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過。分別精密量取上述溶液5 mL，置頂空瓶中，密封，分別制得低、中、高濃度的供試品溶液。進(jìn)樣，記錄色譜圖。計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。平均加樣回收率為100.9%，RSD=0.24%。
表1 乙醇?xì)埩袅考訕踊厥赵囼?yàn)結(jié)果
2.12 乙醇?xì)埩袅繙y(cè)定 取布洛芬緩釋膠囊樣品3批（批號(hào)20110106，20111021，20111022），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算乙醇?xì)埩袅俊＝Y(jié)果3批樣品中乙醇?xì)埩袅糠謩e為0.31%，0.27%，0.28%。
3 討論
國家食品藥品監(jiān)督管理總局審核、通過了，該制劑21個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)；也就是說，國內(nèi)有20余家，生產(chǎn)企業(yè)可以生產(chǎn)布洛芬緩釋膠囊；其中包括中美史克制藥公司、珠海聯(lián)邦制藥等國內(nèi)外生產(chǎn)規(guī)模較大的龍頭制藥企業(yè)，也包括一些只有幾個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)小的制藥企業(yè)；生產(chǎn)技術(shù)水平參差不齊；所以急待需要一個(gè)行之有效的檢查方法考查該制劑在生產(chǎn)過程中，工藝所帶來的乙醇?xì)埩袅?，從而提高該類制劑的安全性、有效性?/p>
乙醇作為一種有效的溶劑、洗滌劑、萃取劑、粘合劑以及合成原料等，在制藥工業(yè)中有著非常廣泛的用途。2010年版中華人民共和國藥典二部將乙醇規(guī)定為第三類溶劑，藥品GMP或其他質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求限制使用，因此本文建立一個(gè)通用的乙醇?xì)埩魴z測(cè)的方法。有文獻(xiàn)報(bào)道用直接進(jìn)樣氣相色譜法檢測(cè)藥品中乙醇?xì)埩舻姆椒╗7-8]，該方法的缺點(diǎn)是藥品制劑中的輔料同乙醇一起進(jìn)入儀器分析，輔料峰容易對(duì)乙醇峰造成干擾，氣相色譜儀及色譜柱也會(huì)受到損害；本文建立的方法可以分離、分析；徹底消除了輔料對(duì)乙醇峰及內(nèi)標(biāo)物峰的干擾，專屬性更強(qiáng)、結(jié)果更加準(zhǔn)確。
[1]王小亮，賈建忠，楊欣，等.近紅外透射光譜法快速測(cè)定布洛芬緩釋膠囊釋放度 [J].藥物分析雜志，2012，32（10）：1898-1902.
[2]唐武.布洛芬緩釋膠囊的不良反應(yīng)[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2001，20（3）：201.
[3]丁國華 .布洛芬緩釋膠囊的不良反應(yīng) [J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，1999，18（5）：375-376.
[4]杜佳新，顧玉紅.21例布洛芬緩釋膠囊致不良反應(yīng)文獻(xiàn)分析[J].中國藥房，2007，18（20）：1580-1582.
[5]盧丹，尤孝慶，許美蓉.布洛芬緩釋膠囊的制備[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1998，29（10）：452-453.
[6]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：中國醫(yī)藥出版社，2010：附錄61-65.
[7]張名楠，梁振益.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定阿奇霉素原料藥中乙醇?xì)埩袅?[J]. 商丘師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，22（5）：128-130.
[8]佟玲，張蕾，李莉，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯乙醇?xì)埩鬧J].天津藥學(xué)，2008，20（4）：23-25.
王洪江 王萌萌 王 穎 康 慧 孫洪剛 劉 磊 王超眾
1.黑龍江省綏化市第一醫(yī)院，黑龍江綏化 152000；2.黑龍江省齊齊哈爾市第一醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161005；3.黑龍江省齊齊哈爾市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江齊齊哈爾 161006
布洛芬緩釋膠囊由于其緩釋機(jī)制使其具有良好的解熱、鎮(zhèn)痛及抗炎作用[1]。近年來隨著臨床的廣泛應(yīng)用， 其不良反應(yīng)時(shí)有報(bào)道，如胃腸道反應(yīng)、語言障礙、眩暈、皮疹、過敏性休克、哮喘嚴(yán)重發(fā)作等[2-4]。由于在布洛芬緩釋微丸的制備工藝中，緩釋粘合劑配制中用到95%乙醇[5]，而中華人民共和國藥典二部中規(guī)定乙醇屬于第三類溶劑[6]，因此有必要對(duì)其進(jìn)行控制。本研究采用頂空氣相色譜法，以丙酮為內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)法對(duì)布洛芬緩釋膠囊中乙醇?xì)埩袅窟M(jìn)行測(cè)定，為制劑的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
Agilent 7890A GC System氣相色譜儀，Agilent 7694E Headspace Sampler頂空自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent GC ChemStation工作站，Sartorius BP221S型電子分析天平。
1.2 試藥
布洛芬緩釋膠囊（市售品，批號(hào)20110106，20111021，20111022，規(guī)格：0.3 g），布洛芬對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，100179-200303，規(guī)格：100 mg），無水乙醇（色譜純，Merck公司），丙酮（色譜純，Merck公司），水為超純水。
2 方法與結(jié)果
2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備
精密稱取丙酮0.2 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液5 mL，置1000 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得內(nèi)標(biāo)溶液。
2.2 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取無水乙醇1 g，置100 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液5 mL，置100 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液5 mL，置頂空瓶中，密封，即得對(duì)照品溶液。
2.3 供試品溶液的制備
取布洛芬緩釋膠囊20粒，取內(nèi)容物置乳缽中，研細(xì)。精密稱取上述細(xì)粉5 g，置100 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液70 mL，振搖10 min使乙醇溶解，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取上述溶液5 mL，置頂空瓶中，密封，即得供試品溶液。
2.4 陰性對(duì)照溶液的制備
精密稱取布洛芬對(duì)照品0.3 g，置10 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取上述溶液5 mL，置頂空瓶中，密封，即得陰性對(duì)照溶液。
2.5 色譜條件
色譜柱：Agilent HP-FFAP（30 m×0.320 m，0.25μm）毛細(xì)管柱；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣口溫度為150 ℃；檢測(cè)器溫度為250 ℃；頂空瓶平衡溫度為85 ℃；平衡時(shí)間為30 min；定量環(huán)溫度為105 ℃；傳輸管溫度為120 ℃；載氣為氮?dú)猓魉?.0 mL/min；分流比20︰1；進(jìn)樣量1 mL。取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。理論塔板數(shù)按乙醇峰計(jì)，均不低于5000；丙酮峰與乙醇峰之間的分離度符合要求；陰性對(duì)照溶液對(duì)測(cè)定無干擾。
圖1 陰性對(duì)照溶液（A）、對(duì)照品溶液（B）、供試品溶液（C）色譜圖
2.6 線性關(guān)系考察
精密稱取無水乙醇1.0072 g，置100 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋成含乙醇濃度分別為 0.050 36，0.100 72，0.201 44，0.402 88，1.007 20， 2.014 40 mg/mL的溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以乙醇濃度為橫坐標(biāo)，乙醇峰面積與丙酮峰面積的比值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程：Y=30.95X+0.1294（r=0.9997，n=6）。結(jié)果表明乙醇在0.050 36～2.0144 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.7 檢出限、定量限考察
取“2.6項(xiàng)下”濃度為0.050 36 mg/mL的溶液繼續(xù)稀釋，按上述色譜條件測(cè)定，得乙醇的檢出限濃度為0.3μg/mL（S/N=3），定量限濃度為 1μg/mL（S/N=10）。
2.8 精密度試驗(yàn)
取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。計(jì)算乙醇峰面積與丙酮峰面積的比值，RSD=0.67%（n=6），結(jié)果表明該方法精密度良好。
2.9 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批號(hào)的樣品6份（批號(hào)20110106），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算乙醇?xì)埩袅?。結(jié)果6份供試品乙醇?xì)埩袅浚琑SD=1.21%（n=6）。
2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8，24 h 進(jìn)樣，記錄色譜圖。內(nèi)標(biāo)法計(jì)算乙醇?xì)埩袅浚琑SD=0.35%，表明在24 h內(nèi)溶液穩(wěn)定。
2.11 加樣回收試驗(yàn)
精密稱取9份已知含量的樣品（批號(hào)：20110106）細(xì)粉各5 g，置100 mL量瓶中，分別精密加入“2.6”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液 1.2，1.5，1.8 mL，加內(nèi)標(biāo)溶液 70 mL，振搖 10 min 使乙醇溶解，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過。分別精密量取上述溶液5 mL，置頂空瓶中，密封，分別制得低、中、高濃度的供試品溶液。進(jìn)樣，記錄色譜圖。計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。平均加樣回收率為100.9%，RSD=0.24%。
表1 乙醇?xì)埩袅考訕踊厥赵囼?yàn)結(jié)果
2.12 乙醇?xì)埩袅繙y(cè)定 取布洛芬緩釋膠囊樣品3批（批號(hào)20110106，20111021，20111022），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算乙醇?xì)埩袅俊＝Y(jié)果3批樣品中乙醇?xì)埩袅糠謩e為0.31%，0.27%，0.28%。
3 討論
國家食品藥品監(jiān)督管理總局審核、通過了，該制劑21個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)；也就是說，國內(nèi)有20余家，生產(chǎn)企業(yè)可以生產(chǎn)布洛芬緩釋膠囊；其中包括中美史克制藥公司、珠海聯(lián)邦制藥等國內(nèi)外生產(chǎn)規(guī)模較大的龍頭制藥企業(yè)，也包括一些只有幾個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)小的制藥企業(yè)；生產(chǎn)技術(shù)水平參差不齊；所以急待需要一個(gè)行之有效的檢查方法考查該制劑在生產(chǎn)過程中，工藝所帶來的乙醇?xì)埩袅?，從而提高該類制劑的安全性、有效性?/p>
乙醇作為一種有效的溶劑、洗滌劑、萃取劑、粘合劑以及合成原料等，在制藥工業(yè)中有著非常廣泛的用途。2010年版中華人民共和國藥典二部將乙醇規(guī)定為第三類溶劑，藥品GMP或其他質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求限制使用，因此本文建立一個(gè)通用的乙醇?xì)埩魴z測(cè)的方法。有文獻(xiàn)報(bào)道用直接進(jìn)樣氣相色譜法檢測(cè)藥品中乙醇?xì)埩舻姆椒╗7-8]，該方法的缺點(diǎn)是藥品制劑中的輔料同乙醇一起進(jìn)入儀器分析，輔料峰容易對(duì)乙醇峰造成干擾，氣相色譜儀及色譜柱也會(huì)受到損害；本文建立的方法可以分離、分析；徹底消除了輔料對(duì)乙醇峰及內(nèi)標(biāo)物峰的干擾，專屬性更強(qiáng)、結(jié)果更加準(zhǔn)確。
[1]王小亮，賈建忠，楊欣，等.近紅外透射光譜法快速測(cè)定布洛芬緩釋膠囊釋放度 [J].藥物分析雜志，2012，32（10）：1898-1902.
[2]唐武.布洛芬緩釋膠囊的不良反應(yīng)[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2001，20（3）：201.
[3]丁國華 .布洛芬緩釋膠囊的不良反應(yīng) [J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，1999，18（5）：375-376.
[4]杜佳新，顧玉紅.21例布洛芬緩釋膠囊致不良反應(yīng)文獻(xiàn)分析[J].中國藥房，2007，18（20）：1580-1582.
[5]盧丹，尤孝慶，許美蓉.布洛芬緩釋膠囊的制備[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1998，29（10）：452-453.
[6]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：中國醫(yī)藥出版社，2010：附錄61-65.
[7]張名楠，梁振益.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定阿奇霉素原料藥中乙醇?xì)埩袅?[J]. 商丘師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，22（5）：128-130.
[8]佟玲，張蕾，李莉，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯乙醇?xì)埩鬧J].天津藥學(xué)，2008，20（4）：23-25.
