臨沂地區(qū)雞大腸桿菌病流行病學(xué)調(diào)查及血清型分析

劉明然 （山東省臨沂市畜牧局動物衛(wèi)生監(jiān)督所 276004）

隨著近年來養(yǎng)雞業(yè)在臨沂地區(qū)的迅速發(fā)展，雞大腸桿菌病對養(yǎng)雞業(yè)的危害日益嚴重，而大腸桿菌病在臨沂地區(qū)養(yǎng)雞業(yè)中的發(fā)生流行情況還較模糊，致病菌株的血清型還不清楚，還沒有形成系統(tǒng)科學(xué)的防治體系，因而，開展本項研究是十分必要的。本文就臨沂地區(qū)雞大腸桿菌病綜合防治進行了研究，探明了其發(fā)病原因、發(fā)病規(guī)律、血清型分布，為臨沂地區(qū)雞大腸桿菌病的防治提供了依據(jù)。

雞大腸桿菌病是指雞群中由大腸桿菌（Escherichia Coli，E.coli）所引起的局部或全身性感染的一種傳染性疾病。雞大腸肝菌病最初由Ligniers于1894年首先發(fā)現(xiàn)，先后在美國、荷蘭、法國及其它畜牧業(yè)發(fā)達的國家陸續(xù)發(fā)生，使畜禽養(yǎng)殖業(yè)蒙受巨大損失。隨著我國養(yǎng)雞業(yè)的持續(xù)發(fā)展，特別是集約化程度的加深和雞群新品種的增多，雞大腸桿菌病的流行日趨嚴重，由于區(qū)域性差異較大、防治措施和技術(shù)力量相對薄弱，造成我國雞大腸桿菌病比國外更為復(fù)雜[1]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 流行病學(xué)調(diào)查材料 （1）解剖器械：解剖死雞用器械等，由臨沂市疫病預(yù)防控制中心提供。（2）疫病調(diào)查雞場：根據(jù)2009、2010、2011三年臨沂市雞出欄較多、彼此距離較大且與外省市接壤的7個縣區(qū)。臨沭縣、沂南縣、平邑縣、沂水縣、蒼山縣、費縣、郯城縣的10個規(guī)?；u場和20余個較大養(yǎng)雞戶。

1.1.2 藥敏試驗材料 （1）病料采集： 2012年1～7月，取臨沂市7縣區(qū)10個雞場及養(yǎng)雞戶因大腸桿菌自然發(fā)病的瀕死雞、病死雞(主要為育成雞，死亡時間不超過4h)，選擇具有典型臨床癥狀，剖檢具有心包炎、肝周炎、腹膜炎、氣囊炎以及卵巢、輸卵管炎等典型病變的作為分離病料，隨機編號為：LS1-10(臨沭)、PY11-20(平邑)、YS21-30(沂水)、CS31-40(蒼山)、FX41-50(費縣)，TC51-60(郯城)共60份病料。（2）儀器和設(shè)備：生化培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、顯微鏡、超凈工作臺、冰箱、常用玻璃器材等，由臨沂市檢測中心提供。（3）培養(yǎng)基和標準血清：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂、SS瓊脂培養(yǎng)基、等培養(yǎng)基，葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖等細菌微量生化反應(yīng)管，均購自上海市醫(yī)學(xué)化驗所試劑廠及杭州天和微生物試劑有限公司。藥敏質(zhì)控菌株ATCC25922、大腸桿菌標準抗O血清，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

表1 臨沂地區(qū)近3年雞飼養(yǎng)量統(tǒng)計 (只)

表2 近3年臨沂地區(qū)雞大腸桿菌病發(fā)生情況統(tǒng)計

1.2 方法

1.2.1 流行病學(xué)調(diào)查方法 （1）調(diào)查方法與對象：采用常規(guī)的流行病學(xué)調(diào)查方法，對臨沂市雞大腸桿菌病的發(fā)生流行現(xiàn)狀等內(nèi)容進行調(diào)查。（2）診斷和剖檢方法：采用常規(guī)診斷和剖檢方法，對臨沂市雞群的發(fā)病原因、雞大腸桿菌病的典型臨床癥狀及病理變化進行調(diào)查、檢測。

1.2.2 分離鑒定與藥敏試驗方法 （1）病原菌的分離、確定、培養(yǎng)：將無菌采取的病料于麥康凱平板上劃線接種，37℃有氧條件下培養(yǎng)24h。挑取其中單個紅色的典型菌落，接種于普通肉湯增菌，再劃線于伊紅美藍瓊脂平板上培養(yǎng)24h，如此反復(fù)純化3～4代，直到獲得純菌落為止，用石蠟?zāi)z塞密封，置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩＃?）細菌形態(tài)學(xué)觀察：無菌操作取病雞心血、肝、脾、氣囊附著物等作組織觸片，革蘭氏染色，鏡檢；細菌純培養(yǎng)物直接涂片，革蘭氏染色，鏡檢。（3）生化鑒定：將分離菌分別接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇微量糖發(fā)酵管進行生化鑒定，并作靛基質(zhì)試驗、M.R試驗、VP試驗、枸櫞酸鹽利用等試驗[2]，對其進行生化試驗鑒定[3-5]。（4）血清型鑒定：用大腸桿菌標準抗O血清，對大腸桿菌分離株在載玻片上作凝集試驗，檢測分離菌株的血清型，進行O血清型鑒定[6]。

2 結(jié)果

2.1 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

2.1.1 臨沂市養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀 臨沂市位于山東省的東南部，東部連接日照，地近黃海，西接棗莊、濟寧、泰安，北靠淄博、濰坊是山東省面積最大和人口最多的地級市，同時也是畜牧業(yè)大市和養(yǎng)雞大市，2009、2010、2011每年肉雞出欄均在一億只以上，近3年來肉雞飼養(yǎng)量見表1。

2.1.2 雞大腸桿菌病發(fā)病情況 根據(jù)臨沂市疫病預(yù)防控制中心數(shù)據(jù)顯示，近三年來臨沂地區(qū)雞大腸桿菌病的發(fā)病率為27.85%，病死率為50.12%，整個臨沂地區(qū)每年雞的飼養(yǎng)量約1.6億只，約有0.44億只雞可能發(fā)生大腸桿菌病，并且約有0.22億只雞由于本病死亡，每只雞治療藥費0.8元，全市每年單純大腸桿菌病的治療費用就是0.176億元。大腸桿菌病引起雞只死亡，加上雞苗投入、飼料消耗、生產(chǎn)性能降低等，對養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。近三年臨沂地區(qū)雞大腸桿菌病發(fā)生情況統(tǒng)計見表2。

2.1.3 主要臨床癥狀 根據(jù)調(diào)查顯示，夏季感染雞癥狀主要為腸炎癥狀突出，下痢，呈白色、黃綠色或水樣稀便，肛門周圍羽毛潮濕污穢。冬季多發(fā)生上呼吸道病變，體溫升高，厭食，嗜睡，精神沉郁，出現(xiàn)打噴嚏、張口或發(fā)生咕嚕聲。病雞多打堆且不愿走動，整群可見生長緩慢、體重減輕、雞冠發(fā)白，有的雞出現(xiàn)癱瘓和輕微的神經(jīng)癥狀，有的雞腹部膨大，觸摸有波動感。

2.1.4 典型病變 通過剖檢，病死雞在打開腹腔時可見腹水滲出，肝臟腫大，肝表面有大小不等的出血點，形成明顯的心包炎、肝包炎、氣囊炎，心包膜混濁、有纖維素性附著物。有的病死雞腺胃黏膜增厚，交界處有出血點。十二指腸充血、出血，大腸內(nèi)充滿氣體，腸壁變薄。氣管環(huán)輕微出血，氣管內(nèi)有粘液。氣囊壁增厚，有黃色滲出物。

2.2 分離鑒定與血清型鑒定

2.2.1 大腸桿菌的分離 本試驗從臨沂市六個縣區(qū)的育成雞的60份病料中，分離出大腸桿菌51株，分離率為85%，命名為LS1-8、PY9-17、YS18-26、CS27-35、FX36-43，TC44-51共51份病料。

2.2.2 病菌形態(tài)及純化培養(yǎng)特性 取上述細菌涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見革蘭氏陰性，呈短直桿狀，長約2～3μm的短桿菌，無芽孢。分離菌株在麥康凱瓊脂上生長出磚紅色的圓形菌落，邊緣整齊，表面光滑濕潤，菌落直徑1.5～2mm。

2.2.3 生化特性 分離到的51株大腸桿菌生化試驗結(jié)果符合大腸埃希氏菌的特征：能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、果糖、甘露醇、阿拉伯糖，產(chǎn)生氣泡，MR實驗結(jié)果呈紅色為陽性；V-P實驗無紅色為陰性；枸椽酸鹽實驗結(jié)果不變色為陰性。結(jié)果見表3。

表3 大腸桿菌的生化試驗結(jié)果

2.2.4 血清型鑒定 經(jīng)血清型鑒定，51株致病性大腸桿菌可以定型45株，未定型的有4株(未出現(xiàn)凝集反應(yīng))，自凝的有2株，定型株占分離株的88.24%。定型的45株致病性大腸桿菌命名為LS1-7、PY8-15、YS16-23、CS24-32、FX33-39，TC40-45。血清型鑒定結(jié)果見表4。

表4 45株大腸桿菌血清型鑒定結(jié)果

從表中可以看出，O78、O1、O18和O11為臨沂地區(qū)的主要血清型，4種血清型占定型菌株的76%，其中O78和O1占比達到56%，為優(yōu)勢血清型，另外還分離出其余7種血清型，共計11種，各縣區(qū)的詳細血清型見表5。

表5 臨沂各縣區(qū)大腸桿菌O血清型的分布

3 討論

3.1 大腸桿菌病流行情況

調(diào)查顯示，最近三年來，臨沂地區(qū)病的平均發(fā)病率為28%，病死率超過為50%，并且有逐年上升的趨勢，大腸桿菌病在養(yǎng)雞業(yè)中造成的損失十分嚴重，雞大腸桿菌病已經(jīng)成為影響臨沂地區(qū)養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展的重要因素，要引起高度重視，必須采取積極的防制措施。

3.2 分離鑒定與血清學(xué)鑒定

（1）本次試驗從臨沂地區(qū)6縣區(qū)采集病料60份，通過分離培養(yǎng)及純化，分離出51株大腸桿菌，分離率為85%，其中臨沭、費縣、郯城分離率為80%，平邑、沂水、蒼山分離率為90%。分離菌株經(jīng)過分離革蘭氏染色鏡檢、菌落特征辨別、生化試驗鑒定，符合大腸桿菌的特征。（2）經(jīng)血清型鑒定，51株致病性大腸桿菌定型45株，檢出11種血清型，O78、O1、O18和O11為臨沂地區(qū)的主要血清型，四種血清型占定型菌株的76%，其中O78和O1占比達到56%，為優(yōu)勢血清型；大部分報道中O78為主要血清型，其它血清型地區(qū)差異較大[9]，說明了大腸桿菌的血清型眾多、地區(qū)間差異很大，血清型鑒定應(yīng)該是一項長期的經(jīng)常性工作，在發(fā)病時通過血清型鑒定可以為實際防治提供科學(xué)依據(jù)。

4 結(jié)論

（1）流行病學(xué)調(diào)查研究顯示，近三年來臨沂地區(qū)雞大腸桿菌病的平均發(fā)病率為27.85%，病死率為50.12%，且有逐年上升的趨勢。飼養(yǎng)環(huán)境和衛(wèi)生條件差是造成此病流行的重要原因。（2）此次試驗的51株致病性大腸桿菌定型45株，檢出11種血清型，O78、O1、O18和O11為臨沂地區(qū)的主要血清型，四種血清型占定型菌株的76%，其中O78和O1占比達到56%，為優(yōu)勢血清型。

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