隔山消化學(xué)成分的研究

陳 艷，徐必學(xué)，曹佩雪，賀祝英，梁光義*

1貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點實驗室，貴陽550007;2貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴陽550002

隔山消為蘿藦科牛皮消屬植物耳葉牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的干燥塊根。產(chǎn)于湖南、南京、江蘇、浙江、江西、貴州、四川、云南等地。味甘，具有補肝腎，強筋骨，益精血，烏須發(fā)，消積止痛等功效。貴州的民間用來治療肚脹，消化不良等癥。對其生物活性多有報道，對其化合物研究多是對其甾體類化合物的研究，但對其它成分的研究報道較少［1］。本論文對隔山消化學(xué)成分進行了分離研究，從石油醚部分離得到7個化合物，分別為:胡蘿卜苷(daucosterol)，β-香樹脂醇乙酸酯(βamyrin acetate)，β-谷甾醇(β-sitosterol)。白首烏二苯酮(baishouwubenzophenone)，甘油-1-棕櫚酸酯(glycerol 1-monopalmitate)，東莨菪內(nèi)酯(scopoletin)，齊墩果酸(oleanolic acid)。

1 儀器和材料

核磁共振數(shù)據(jù)用INOVA-400 MHz型超導(dǎo)核磁共振儀測定，TMS作內(nèi)標(biāo);質(zhì)譜數(shù)據(jù)用HP-5973型質(zhì)譜儀測定;柱色譜用硅膠(200～300目)、硅膠H和薄層色譜用硅膠GF254均為青島海洋化工產(chǎn)品;Sephadex LH-20為Sigma產(chǎn)品。植物樣品采自貴州貴陽，經(jīng)貴州省、貴陽中醫(yī)學(xué)院陳德媛教授鑒定為蘿藦科牛皮消屬植物耳葉牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的干燥塊根。

2 提取與分離

隔山消干燥塊根50 kg，粉碎后依次用體積分數(shù)為95%、75%乙醇滲漉，合并濾液，濃縮得浸膏。浸膏加適量的水分散，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取并濃縮。得石油醚部分(161 g)，經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚-乙酸乙酯(10∶1 ～1∶1)，氯仿-甲醇(20∶1～1∶1)兩個系統(tǒng)梯度洗脫，收集得到15份。其中第1份(2 g)經(jīng)硅膠柱層析，石油醚洗脫，得化合物1(30 mg);第6份(約8 g)經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(30∶1～10∶1)梯度洗脫，得化合物2(400mg)。第8份(約8 g)經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(20∶1～10∶1)梯度洗脫，再經(jīng)凝膠柱色譜得化合物3(20 mg)，第9份約2 g，反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析，凝膠柱層析得化合物4(30 mg)。第10份約10g，反復(fù)經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿-甲醇(20∶1 ～5∶1)梯度洗脫得化合物5(30 mg)。第12份約10 g經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇(10∶1～5∶2)梯度洗脫得化合物6(1 g)。氯仿部分經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇(20∶1-10∶1)梯度洗脫，每500 mL收集一瓶，其中第111～112瓶中分離得到化合物7(10 mg)

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色的針晶(Petrol/EtOAc)，mp.291～293℃，易溶于石油醚、氯仿;碘蒸氣反應(yīng)陽性，10%的硫酸乙醇液顯紫紅色。ESI-MSm/z:468(M+)，453，239，218(100)，203，189，175，161，135，119，85，71，57，43;1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):0.80(3H，s，H-28)，0.87(12H，s，H-23，24，29，30)，0.97(3H，s，H-25)，1.00(3H，s，H-26)，1.06(3H，s，H-27)，2.05(3H，s，COCH3)，4.51(1H，m，H-3)，5.12(1H，m，H-12)。根據(jù)以上理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)，對照文獻［1］，鑒定化合物為 β-香樹脂醇乙酸酯(β-amyrin acetate)。

化合物2 白色針晶(Petrol/EtOAc)，mp.291～293 ℃。ESI-MSm/z:414(M+)，396，381，329，303，273，255，231，199，185，173，159，145，133，119，107，95，81，69，55，43(100)。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):0.678～ 1.01(6 × CH3)，3.49～3.56(1H，m，H-3)，5.35(1H，d，J=4.4 Hz，H-6)。與β-谷甾醇對照品經(jīng)TLC檢測，用三種不同的展開系統(tǒng)展開，其Rf值均一致，綜合以上波普數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)為 β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物3 白色粉末(CHCl3/MeOH)。EI-MS m/z:456(M+，1)，248(100)，203(60)，189(30)，147(20)，133(50)，119，105，95，81，69;1H NMR(C5D5N)δ(ppm):0.91(3H，s，CH3)，0.97(3H，s，CH3)，1.03(3H，s，CH3)，1.05(6H，s，× 2CH3)，1.27(3H，s，CH3)，1.30(3H，s，CH3)，3.47(1H，m，H-3)，5.52(1H，s，H-12)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［2］基本一致，且與對照品進行TLC檢測，結(jié)果Rf值一致，確定其結(jié)構(gòu)為齊墩果酸。

化合物4 白色粉末(CHCl3)，EI-MSm/z:299，257，239，134，112，98，57，43(100);1H NMR(CDCl3，400 MHz):0.88(3H，t，J=6.8 Hz，CH3)，1.25(24H，brs，×12 CH2)，1.62(2H，m，H-3)，2.35(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，3.60(1H，m，H-3)，3.70(1H，m，H-3)，3.94(1H，m，H-2)，4.15(1H，dd，J=11.6，6.0 Hz，H-1)，4.20(1H，dd，J=11.6，4.8 Hz，H-1)。綜合解析波譜數(shù)據(jù)并與文獻對照［3］，確定該化合物為甘油-1-棕櫚酸酯(glycerol 1-monopalmitate)。

化合物5 淡黃色針晶(CHCl3)，mp 200～202℃。易溶于氯仿、丙酮等有機溶劑，紫外燈254 nm下有暗斑，F(xiàn)eCl3溶液顯紅棕色，碘反應(yīng)陽性。IR(KBr)cm-1:3488，3374，2925，1662，1608，1499，1455，1427，1370，1353，1311，1159，1050，893，805。ESI-MSm/z:302(M+)，284，269，266，256，245，227，171，147，137，127，137，115，105，95，77，55，43(100);1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):2.40(3H，s，10-CH3)，2.78(3H，s，9-CH3)，6.80(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，7.04(1H，d，J=8.8 Hz，H-4')，7.25(1H，d，J=9.2 Hz，H-3')，7.63(1H，d，J=8.8 Hz，H-4)。以上波譜數(shù)據(jù)與理化性質(zhì)與文獻4］基本一致，確定其結(jié)構(gòu)為白首烏二苯酮(baishouwubenzophenone)。

化合物6 白色粉末(CHCl3/MeOH)。ESI-MS m/z:414(M+-Glc)，396(100)，382，288，275，255，213，163，145，109，95，69，57，43(100);1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ(ppm):0.67 ～ 0.98(s，6 ×CH3)，3.92 ～3.97(1H，m，H-3)，4.05(1H，m，Glc-H-2)，4.30(2H，m，Glc-H-3，Glc-H-4)，4.41(1H，dd，J=12.0，5.2 Hz，Glc-H-6)，4.56(1H，dd，J=11.6，2.0 Hz，Glc-H-6)，5.05(1H，d，J=8.0 Hz，Glc-H-1)，5.34(1H，m，H-6)。與胡蘿卜苷對照品Rf值一致，以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［5］基本一致，確定其為胡蘿卜苷(daucosterol)。

化合物7 淺黃色針晶(Me2CO)，易溶于丙酮、氯仿;在365 nm下有很強的藍色熒光，碘蒸氣反應(yīng)陽性，2%的磷鉬酸乙醇液不顯色。ESI-MSm/z:192(M+，100)，177，164，149，121，107，79，69，51;1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):7.61(1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，6.92(1H，s，H-5)，6.85(1H，s，H-8)，6.27(1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，6.23(1H，s，7-OH)，3.96(3H，s，-OCH3)，13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ(ppm):161.5(C-2)，107.4(C-3)，143.4(C-4)，113.3(C-5)，144.0(C-6)，150.2(C-7)，103.1(C-8)，149.7(C-9)，111.5(C-10)，56.4(-OCH3)。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻［6］一致，確定其結(jié)構(gòu)為東莨菪內(nèi)酯(scopoletin)。

4 討論

本文主要對該植物進行了化學(xué)成分的研究，這是首次對貴州產(chǎn)的隔山消進行化學(xué)成分的研究。本研究為制定該植物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)打下一定基礎(chǔ)。

致謝:核磁和質(zhì)譜數(shù)據(jù)分別由貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點實驗室張建新副研究員和王道平老師測定。

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