豬瘟免疫失敗原因分析

王 彬，萬(wàn) 莉，張 琦，馬 磊，顏其貴,2*!

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物生物技術(shù)中心，四川 雅安 625014；2.動(dòng)物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，四川 雅安 625014)

豬瘟具有高度接觸傳染性，流行廣泛，發(fā)病率、死亡率高，危害極大[l-2]。由于豬瘟造成的損失嚴(yán)重，促使很多國(guó)家制定和執(zhí)行豬瘟的防治和根除計(jì)劃，并在歐美許多國(guó)家取得成功。目前仍有很多國(guó)家和地區(qū)有豬瘟流行，近年來(lái)在一些宣布消滅豬瘟的國(guó)家也相繼復(fù)發(fā)，我國(guó)一些地區(qū)的豬瘟發(fā)病率也呈上升的趨勢(shì)。

目前，除典型的病例外，豬瘟流行和發(fā)病特點(diǎn)已發(fā)生了很大變化，這種變化是世界性的。我國(guó)豬瘟的流行形式也發(fā)生了很大變化，如：流行形式轉(zhuǎn)變?yōu)榈貐^(qū)性散發(fā)流行，疫點(diǎn)顯著減少；病程由急性變?yōu)槁赃^(guò)程；臨床癥狀由典型變?yōu)榉堑湫偷臏睾托拓i瘟，癥狀顯著減輕，發(fā)病率不高，病勢(shì)較緩和，死亡率降低，仔豬死亡率較高，成年豬較輕或可耐過(guò)，病理變化也不典型[3-4]。由于病原毒力降低，出現(xiàn)持續(xù)感染(亞臨床隱性感染)、胎盤垂直感染(仔豬先天性感染)、妊娠母豬帶毒感染(母豬繁殖障礙)及新生仔豬的免疫耐受等[5-6]。這些帶毒豬的存在，成為豬瘟發(fā)生的重要原因，尤其是亞臨床感染的豬，常規(guī)方法很難確診,從而給豬瘟防治工作帶來(lái)新的困難。此外多種因素引起的免疫失敗也是威脅養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展主要因素。現(xiàn)將目前導(dǎo)致豬瘟免疫失敗的原因歸納如下。

1 機(jī)體因素

1.1 母源抗體的干擾

母源抗體具有雙重性，對(duì)初生仔豬有保護(hù)作用，但也會(huì)影響仔豬的免疫效果。因此在仔豬免疫時(shí)，能否起良好的免疫效果與母源抗體滴度有關(guān)。當(dāng)母源抗體滴度高時(shí)，實(shí)施免疫接種，疫苗病毒會(huì)被母源抗體中和而不起保護(hù)作用。因此，在免疫接種前要考慮母源抗體的滴度，同時(shí)還要注意母源抗體的整齊度。具體做法是免疫接種前測(cè)母源抗體滴度，調(diào)整母源抗體的整齊度保證空懷母豬豬瘟的抗體水平不低于1:64，分娩母豬豬瘟的抗體水平不低于1:32。對(duì)反復(fù)接種后抗體水平仍然很低的母豬以及帶毒母豬應(yīng)及時(shí)淘汰。

有資料報(bào)道，母豬在妊娠30 d前、10～ 50 d、20～ 97 d排 毒、30～100 d接種疫苗后均可引起胎盤感染，即引起母豬繁殖障礙。胎盤感染后沒(méi)有死亡的仔豬往往成為亞臨床感染者，可能長(zhǎng)期帶毒、排毒。也有資料顯示，母豬帶毒則對(duì)豬瘟疫苗的免疫應(yīng)答差，并能垂直傳播給下一代，從而引起溫和型豬瘟的發(fā)生。

1.2 母豬持續(xù)感染和仔豬胎盤感染

母豬持續(xù)感染和仔豬胎盤感染是目前引起免疫失敗的重要原因。導(dǎo)致豬瘟在豬場(chǎng)形成惡性循環(huán)。即豬瘟亞臨床感染—胎盤感染—母豬繁殖障礙—仔豬帶毒—后備母豬—亞臨床感染，如此惡性循環(huán)。使得帶毒豬在臨床中有3%～33%的帶毒率。

母豬持續(xù)感染是對(duì)同窩豬和環(huán)境的最大污染。持續(xù)感染母豬不停地向外排出病毒。有試驗(yàn)報(bào)道人工復(fù)制的豬瘟病毒持續(xù)感染的帶毒母豬動(dòng)物模型，可帶毒750 d，這種豬甚至可以終生帶毒、排毒，為豬瘟病毒的主要儲(chǔ)存宿主，血液中的含毒量可達(dá)105～106PFU/mL。再與帶毒公豬或健康公豬自然交配或人工授精懷孕產(chǎn)仔，可產(chǎn)下帶毒的木乃伊胎和死胎，用豬瘟熒光抗體檢查“胎豬”均為陽(yáng)性。

胎盤感染后，引起母豬繁殖障礙，出現(xiàn)弱胎、死胎、甚至木乃伊胎。從死亡仔豬體內(nèi)可分離到豬瘟病毒。經(jīng)胎盤感染不死的仔豬往往成為持續(xù)感染者，可長(zhǎng)期帶毒、排毒，其本身并不表現(xiàn)臨床癥狀。除了對(duì)豬場(chǎng)造成惡性循環(huán)外，這種經(jīng)胎盤感染的仔豬出生后，吸吮初乳，數(shù)日內(nèi)病毒血癥可一次性降低。但病毒存在于全身上皮組織、淋巴樣組織和網(wǎng)狀內(nèi)皮組織。這種感染豬不能建立中和性抗體應(yīng)答，形成免疫耐受，以至于對(duì)疫苗免疫后不能產(chǎn)生免疫應(yīng)答。這些豬的存在，使得豬場(chǎng)隨時(shí)面臨豬瘟的威脅。

1.3 免疫抑制性疾病造成的免疫失敗

近年來(lái)，豬瘟疫苗抑制性疾病呈上升趨勢(shì)。一方面使豬瘟呈現(xiàn)非典型性感染和發(fā)病，豬瘟典型癥狀消失給診斷帶來(lái)極大的困難；另一方面，豬瘟病毒的毒力增強(qiáng)，雖然經(jīng)過(guò)免疫接種，仍常造成免疫失??；同時(shí)多種病原混合感染和復(fù)合癥使疾病更為復(fù)雜，特別是一些條件性、環(huán)境性病原微生物所致的疾病如豬繁殖和呼吸綜合征、圓環(huán)病毒感染、支原體肺炎等都破壞豬的免疫器官，造成不同程度的免疫抑制，除了容易導(dǎo)致細(xì)菌性疾病混合感染或繼發(fā)感染外，更為嚴(yán)重的是導(dǎo)致相關(guān)疫苗免疫失敗。

1.4 濫用免疫抑制性藥物

一些藥物如氟苯尼考、卡那霉素、磺胺唑類、皮質(zhì)激素等，對(duì)B淋巴細(xì)胞的繁殖有一定抑制作用，能明顯影響細(xì)菌性和病毒性疫苗的免疫效果。尤其在免疫前后不規(guī)范的使用這些藥物，可導(dǎo)致機(jī)體白細(xì)胞減少，從而影響免疫應(yīng)答。另外，霉變飼料含有各種霉菌毒素，可引起肝細(xì)胞的變性和壞死，淋巴結(jié)出血、水腫，嚴(yán)重破壞機(jī)體的免疫器官，造成機(jī)體免疫抑制。

1.5 應(yīng)激

動(dòng)物機(jī)體的免疫功能在一定程度上受到神經(jīng)、體液和內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)，在氣候驟變(過(guò)冷過(guò)熱)、濕度過(guò)大、通風(fēng)不良、噪音、環(huán)境突然改變、轉(zhuǎn)群、運(yùn)輸、斷奶、去勢(shì)、擁擠、捕捉、驚嚇、飼料突然改變等各種應(yīng)激因素的影響下，機(jī)體腎上腺皮質(zhì)激素分泌增加，而這些激素可顯著損傷T淋巴細(xì)胞，對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，并促進(jìn)IgG的分解代謝。應(yīng)激反應(yīng)敏感期豬的免疫力會(huì)有不同程度的下降，而疫苗接種作為另一種應(yīng)激會(huì)加重機(jī)體的負(fù)面反應(yīng)，進(jìn)一步增加免疫失敗的幾率。

2 疫苗因素

2.1 疫苗的質(zhì)量

1)疫苗可能受到豬瘟病毒污染。目前生產(chǎn)廠家多用細(xì)胞培養(yǎng)法制苗，如果用同源(乳豬腎)細(xì)胞來(lái)生產(chǎn)疫苗，就存在帶毒傳染豬瘟的危險(xiǎn)；用異源(牛睪丸、羊腎)細(xì)胞生產(chǎn)苗，也存在豬瘟病毒污染的危險(xiǎn)性。

2)疫苗效價(jià)達(dá)不到要求。免疫劑量與保護(hù)水平密切相關(guān)，當(dāng)劑量不足時(shí)，攻毒后不能阻止強(qiáng)毒在體內(nèi)復(fù)制和帶毒。由于監(jiān)管不嚴(yán)，有的廠家只重視經(jīng)濟(jì)效益，忽略了質(zhì)量，疫苗制造工藝流程控制不嚴(yán)，導(dǎo)致疫苗效價(jià)和抗原效價(jià)降低或失效。

2.2 運(yùn)輸和保存

絕大多數(shù)疫苗必須于低溫下保存和運(yùn)輸，并嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

豬瘟凍干疫苗要求低溫保存，而且在不同溫度條件下保存的期限有所不同。按生物制品規(guī)程規(guī)定。本疫苗應(yīng)于-l5 ℃冷凍條件下保存。有效期為1.5年；0～8 ℃冷暗、干燥處保存，有效期為6個(gè)月；8～25 ℃陰暗干燥處保存，有效期為10 d。

疫苗從生產(chǎn)廠家到用戶手中需要經(jīng)過(guò)許多環(huán)節(jié)和長(zhǎng)途運(yùn)輸，由于運(yùn)輸條件和保溫措施的制約，有時(shí)疫苗到場(chǎng)的時(shí)已近于失效或低效苗。當(dāng)然豬瘟淋脾毒耐熱保護(hù)劑疫苗可以解決這個(gè)問(wèn)題。

2.3 疫苗稀釋

稀釋疫苗的有效期：豬瘟疫苗稀釋后降解速度加快，有效時(shí)間縮短，用0.9%無(wú)菌生理鹽水稀釋后，在氣溫15 ℃以下6 h用完，15～27 ℃應(yīng)在3 h用完。如不能在冰箱或冰瓶?jī)?nèi)保存 8 h內(nèi)效價(jià)會(huì)損失90%。

疫苗稀釋液失效：豬瘟疫苗稀釋液的pH值應(yīng)控制在6.8～7.4之間。實(shí)際操作時(shí)，由于對(duì)稀釋液pH值的測(cè)試不嚴(yán)格，使用過(guò)酸或過(guò)堿的稀釋液稀釋疫苗，造成病毒蛋白質(zhì)變性而失去免疫性。

2.4 “聯(lián)苗”免疫效果不確實(shí)

目前我國(guó)部分生物制品廠生產(chǎn)的“豬瘟-丹毒二聯(lián)苗”、“豬瘟-丹毒-肺疫三聯(lián)苗”，由于丹毒菌苗中含有吐溫-80成分，它干擾豬瘟疫苗的免疫，致使豬瘟的免疫效果不確實(shí)。據(jù)調(diào)查，部分場(chǎng)在注射“聯(lián)苗”后，豬瘟的發(fā)病率明顯偏高。

2.5 疫苗間的干擾

如果同時(shí)使用2種或2種以上具有干擾作用的疫苗，接種疫苗的間隔時(shí)間不當(dāng)，影響抗體的產(chǎn)生。

3 免疫程序不合理

免疫程序存在缺陷是造成免疫失敗的主要原因。合理的免疫程序是指選擇最佳的疫苗，最佳的免疫劑量，最佳的免疫途徑，最佳的免疫次數(shù)和最佳的免疫間隔時(shí)間。制定合理的免疫程序的關(guān)鍵是排除母源抗體的干擾，確定合理的首免日期。做好母源抗體水平監(jiān)測(cè)，隨時(shí)調(diào)整仔豬首免日期。目前，我國(guó)大多數(shù)養(yǎng)豬場(chǎng)戶一般采用種豬集中統(tǒng)一免疫、斷奶時(shí)母豬與其仔豬同時(shí)免疫和超前免疫3種免疫程序。

第1種，種公豬、種母豬一年2次集中統(tǒng)一免疫，每頭種(公、母)豬每次接種4～6頭份豬瘟疫苗；仔豬2l～25日齡左右進(jìn)行首次免疫，每頭仔豬接種2～3頭份；50～60日齡左右加強(qiáng)免疫，每頭豬接種3～4頭份。

第2種，即“斷奶時(shí)母豬與其仔豬同時(shí)免疫”的方法有一定的理論根據(jù)，在生產(chǎn)上也起到很大的積極作用。但由于目前我國(guó)許多規(guī)模豬場(chǎng)都采取了早期斷奶技術(shù)，仔豬的斷奶時(shí)間在21～28日齡。雖然多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，適當(dāng)提高免疫劑量有利于提高抗體水平，同時(shí)加大劑量亦可中和一定的母源抗體[7]。采用這種免疫程序時(shí)，應(yīng)先測(cè)定仔豬母源抗體效價(jià)，再確定免疫的時(shí)間和劑量[8]。

第3種，即“超前免疫”的方法在理論上也是可行的[3]。因?yàn)樨i的多數(shù)母源抗體不能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，初生仔豬體內(nèi)母源抗體極少，不足以干擾弱毒疫苗與免疫細(xì)胞的接觸。但是初生仔豬的免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，免疫應(yīng)答的能力不強(qiáng)，也存在免疫效果不佳的問(wèn)題。

4 免疫操作技術(shù)的問(wèn)題

4.1 器械消毒不嚴(yán)

由于缺乏消毒觀念，預(yù)防注射時(shí)，不按要求消毒器械。遇潛伏感染豬瘟病毒的豬只，在注射時(shí)，若不能做到一豬一針，那么，針頭和注射器將會(huì)帶毒，而且還會(huì)造成整瓶稀釋后的疫苗污染或機(jī)械帶毒接種。使防疫注射變成了帶毒感染傳播的直接途徑。致使免疫接種后引發(fā)豬瘟流行。

4.2 消毒藥品使用不當(dāng)

預(yù)防注射時(shí)，防疫人員往往只用碘酊作局部消毒，而不用酒精脫碘或應(yīng)用過(guò)多的5%碘酊消毒，碘酊未干就急于注射疫苗。使碘酊與疫苗接觸，造成疫苗失效或效價(jià)降低，失去免疫效力。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，當(dāng)?shù)怍鷿舛葹?%～6% 時(shí)，對(duì)豬瘟疫苗效價(jià)有明顯影響。

4.3 注射針頭選擇不當(dāng)

獸醫(yī)在防疫注射時(shí)為了注射方便，常常選用短而粗的針頭進(jìn)行防疫注射，針孔大而淺，疫苗注射到皮下脂肪層，影響機(jī)體對(duì)疫苗的吸收速度，同時(shí)容易造成疫苗從針孔中向外流失，減少了有效免疫劑量。

4.4 疫苗的用量

我國(guó)目前核定的豬瘟免疫量為每頭份150個(gè)兔體反應(yīng)單位，而國(guó)外的核定標(biāo)準(zhǔn)為每頭份400個(gè)兔體反應(yīng)單位。因此，在我國(guó)每頭豬接種1頭份的豬瘟免疫量顯然是不夠的。

疫苗的用量過(guò)多或不足。在一定的安全范圍內(nèi)，抗體產(chǎn)生的多少隨抗原的增加而增加，但抗原超過(guò)一定的安全范圍時(shí)就會(huì)導(dǎo)致“免疫麻痹”；相反疫苗使用劑量過(guò)少，也不能刺激機(jī)體產(chǎn)生較高的抗體水平。

5 霉菌毒素的影響

幾乎所有的霉菌毒素都對(duì)免疫系統(tǒng)有破壞作用，使豬的免疫系統(tǒng)不足以抑制病原體的侵害，為疾病的發(fā)生創(chuàng)造了有利條件；霉菌毒素能導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制，引起豬群免疫失敗[9]，使豬只注射疫苗后抗體水平仍然很低，誘發(fā)多種疾病的發(fā)生，導(dǎo)致疫病傳播。例如黃曲霉素1(AFB1)和新月霉菌產(chǎn)生的T-2毒素會(huì)抑制蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞增殖，霉菌毒素在生物體外對(duì)淋巴細(xì)胞具有細(xì)胞毒殺性，可能因霉菌毒素對(duì)細(xì)胞膜作用(包括淋巴細(xì)胞受體改變)或干擾巨分子合成及其功能。

6 飼養(yǎng)管理和飼料質(zhì)量的影響

飼養(yǎng)密度過(guò)大，通風(fēng)不良，空氣中有害氣體濃度過(guò)高，使豬群長(zhǎng)期處于應(yīng)激狀態(tài)下，免疫應(yīng)答能力下降，造成免疫失敗。飼料中維生素E、維生素A和鋅、鐵、硒等微量元素營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏或不足均會(huì)影響抗體的生成速度或生成數(shù)量而導(dǎo)致免疫滯后。霉變飼料對(duì)機(jī)體的影響更大，由于其含有各種霉菌毒素，可嚴(yán)重破壞機(jī)體的免疫器官，造成機(jī)體的免疫抑制。

根據(jù)對(duì)豬瘟免疫失敗的原因分析，切實(shí)做好豬瘟的綜合防治工作是減少免疫失敗發(fā)生豬瘟的關(guān)鍵。可以采取針對(duì)性的措施如：優(yōu)化飼養(yǎng)條件，提高豬群的免疫應(yīng)答率，定期監(jiān)測(cè)血清、淘汰帶毒種豬和及時(shí)補(bǔ)注豬瘟疫苗，規(guī)范免疫環(huán)節(jié)，重視疫苗管理工作，規(guī)范臨床用藥，制定合理的免疫程序，杜絕使用霉變飼料，控制免疫抑制性疾病，加強(qiáng)管理，建立和完善可備查的防疫檔案及生豬出生檔案，強(qiáng)化對(duì)防疫注射工作的監(jiān)督管理。

豬瘟免疫失敗不僅對(duì)生豬生產(chǎn)造成不同程度的損失，而且對(duì)防疫隊(duì)伍的服務(wù)質(zhì)量、行業(yè)威望和行業(yè)形象造成極為不利的影響。因此，探索免疫失敗的原因是獸醫(yī)防疫工作者應(yīng)研究的課題，是有效預(yù)防和控制畜禽疫病發(fā)生、傳播、流行的一項(xiàng)重要工作，是促進(jìn)畜牧業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展的關(guān)鍵。

徹底解決豬瘟免疫失敗將對(duì)我國(guó)豬瘟的防治和凈化具有重要的意義。

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