一起食源性疾病暴發(fā)的病原學(xué)研究

陳 瓊，李 晶，唐雨德，魏德江，周東明，梁洪軍，孫軍紅

(本文編輯:張仲書; 英文編輯:王建東)

沙門菌(Salmonella)是腸桿菌科的一種重要的革蘭氏陰性桿菌，能引起人的胃腸炎、傷寒、敗血癥等癥狀，是引起食物中毒的主要病原菌之一。據(jù)統(tǒng)計顯示，近十年來，在我國由沙門菌引起的食物中毒和食源性疾病為17.9%，位于細(xì)菌性食物中毒首位，WHO把沙門菌列入中等或嚴(yán)重危害的食物污染性病原菌［1-2］。2011年9月，南京某院校集體食堂發(fā)生了一起由沙門菌引起的突發(fā)公共衛(wèi)生事件，現(xiàn)將病原學(xué)檢測報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 以無菌方式采集7份可疑食品和2例發(fā)病且未用抗生素患者排泄物各1份。編號如下：①麻辣黃瓜拌豬心，②蠔油瓜條，③糖醋帶魚，④紅燒老鵝，⑤大煮干絲，⑥西芹雞柳，⑦白菜蛋湯，⑧、⑨為2例患者的排泄物。

1.1.2 試劑和儀器 2%堿性蛋白胨水、亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液、SS瓊脂、亞硫酸鉍(BS)瓊脂、硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖(TCBS)瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、三糖鐵(TSI)瓊脂、腸道微量生化管、食品大腸菌群檢測紙片、藥敏紙片和沙門菌分型診斷血清等均購自杭州天河微生物試劑公司?？片敿紊抽T菌顯色培養(yǎng)基(CAS)和副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基由法國科瑪嘉公司提供。全自動微生物分析儀(VITEK-2 compact)為法國梅里埃公司產(chǎn)品。

1.2 方法 按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗》(GB/T4789-2010)［3］進(jìn)行菌落總數(shù)、大腸菌群、沙門菌、志賀菌、副溶血性弧菌、霍亂弧菌、變形桿菌和蠟樣芽孢桿菌檢驗。選擇性對所采集的樣品進(jìn)行直接培養(yǎng)和增菌后培養(yǎng)接種，兩種方式同時進(jìn)行，對可疑菌落進(jìn)行染色鏡檢、生化試驗和血清學(xué)鑒定，并挑取純培養(yǎng)的可疑菌落用全自動微生物分析儀鑒定復(fù)核，對鑒定病原菌進(jìn)行藥敏試驗［4-7］。

1.2.1 分離培養(yǎng)和染色鏡檢 將2份患者的排泄物分別直接接種SS、EMB、TCBS、CAS和副溶血性弧菌顯色平板，置37℃培養(yǎng)18～24 h；同時再接種于EC肉湯、GN增菌液、3.5%NaCl結(jié)晶紫增菌液、MM增菌液、2%堿性蛋白胨水，按各自要求培養(yǎng)。7份食品留樣標(biāo)本，每份稱取25 g(ml)+225 ml無菌生理鹽水稀釋液或各自增菌液在均質(zhì)器內(nèi)以半徑8 cm、8000 r/min均質(zhì)，37℃培養(yǎng)8～18 h增菌，增菌后再接種分離培養(yǎng)。與此同時吸取1∶10樣品稀釋液1 ml置于營養(yǎng)瓊脂、SS、EMB、TCBS、CAS 和副溶血性弧菌顯色平板及10 ml SC中混勻，同時接種大腸菌群紙片，37℃培養(yǎng)18～24 h，觀察菌落生長情況。分別挑取SS和CAS上可疑菌落涂片革蘭氏染色鏡檢。

1.2.2 生化試驗和血清學(xué)鑒定 分別挑取SS和CAS平板上可疑典型菌落接種TSI培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂平板和腸道微量生化管，37℃培養(yǎng)24 h觀察生化反應(yīng)情況?？梢删溆蒙抽T菌分型診斷血清進(jìn)行血清學(xué)鑒定試驗。

1.2.3 全自動微生物分析儀鑒定 將分離的菌株接種于全自動微生物分析儀進(jìn)行復(fù)核鑒定。

1.2.4 藥敏試驗 對以上檢測確定的菌株用藥敏紙片檢測藥物的耐藥性。

2 結(jié)果

2.1 分離培養(yǎng)和染色鏡檢 結(jié)果見表1。7份食品中，有4份細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)均超出國家標(biāo)準(zhǔn)(GB2726-2005)［8］。4份樣品(①麻辣黃瓜拌豬心，②蠔油瓜條，⑧、⑨2份患者排泄物)在SS和CAS平板上均有典型可疑沙門菌生長?？梢删渫科旧R檢均為G-、無芽孢、桿菌。

表1 所檢樣本細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果

2.2 生化試驗和血清學(xué)鑒定結(jié)果 TSI為斜面紅色、底層黃色、產(chǎn)氣、產(chǎn)硫化氫。腸道微量生化管，4株分離菌生化反應(yīng)完全一致，其余檢樣為陰性。結(jié)果見表2。4株分離菌均與A-F多價“O”因子血清發(fā)生凝集(++++)，與 O 抗原O6、O7、K 抗原Vi、H抗原HC凝集(+++)、H5因子凝集(+++)，與生理鹽水對照均無自凝現(xiàn)象。鑒定結(jié)果為丙型副傷寒沙門菌。

表2 4株可疑菌生化試驗結(jié)果

2.3 全自動微生物分析儀鑒定結(jié)果 4株分離菌在全自動微生物分析儀上顯示較好的鑒定結(jié)果，均為丙型副傷寒沙門菌。

2.4 藥敏試驗結(jié)果 4株分離菌對氨芐西林、復(fù)方新諾明、四環(huán)素、阿莫西林耐藥，對三代頭孢菌素、氯霉素、喹諾酮類敏感。

3 討論

食源性疾病是指食品中致病因素進(jìn)入人體引起的感染性、中毒性等疾病。沙門菌被認(rèn)為是目前世界范圍內(nèi)最重要的食源性致病菌之一，也是美國最常見的細(xì)菌性食源性疾病暴發(fā)的原因［9-10］。人類感染沙門菌的主要途徑是食物傳播，特別在夏秋季節(jié)，是食源性疾病的高發(fā)病原菌。此類食物中毒報告較多，已成為我國常發(fā)的一種突發(fā)性公共衛(wèi)生事件。

本次實驗室檢測分析，7份留樣食品中4份樣品細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)超過國家標(biāo)準(zhǔn)，說明該食堂衛(wèi)生條件較差，衛(wèi)生意識淡薄，這是造成此次食源性疾病暴發(fā)事件的潛在因素。從2份留樣食品和2份患者的排泄物中均檢出丙型副傷寒沙門菌，而從業(yè)人員體檢健康未攜帶病原菌，結(jié)合臨床癥狀和流行病學(xué)調(diào)查，此次事件的原因是由于患者吃了被丙型副傷寒沙門菌污染的麻辣黃瓜拌豬心、蠔油瓜條引起的食源性疾病的局部暴發(fā)。

衛(wèi)生監(jiān)督部門要加大對餐飲單位的食品衛(wèi)生監(jiān)督力度，餐飲單位要落實好食品安全法，提高餐飲從業(yè)人員的衛(wèi)生知識水平。在食用肉制品時一定要加熱充分，煮熟燒透，熟食制品放置時間過長一定要加熱回鍋再食用。嚴(yán)把食品的加工、采購、儲存、消毒關(guān)鍵控制點，確保食品安全［11-12］。

4株菌株藥敏試驗表明，三代頭孢菌素、喹諾酮、氯霉素可為沙門菌類感染的首選類藥物，與岳風(fēng)等［13］報道相關(guān)的藥敏結(jié)果相符。

對致病菌的及時、快速、準(zhǔn)確的檢測，對于食物中毒的調(diào)查至關(guān)重要，一方面可以快速指導(dǎo)臨床用藥，另一方面可以控制疫情的擴(kuò)大，實現(xiàn)在現(xiàn)有的設(shè)備前題下，快速檢出食物中毒的病原菌。本文實驗室檢測是在初步判斷為細(xì)菌性的食物中毒，可能為某些腸道致病菌所致后，按照為此制定的相應(yīng)腸道致病菌檢測方案實施。因為中毒人數(shù)較多，根據(jù)多年的實驗室經(jīng)驗分析，此次致病菌的菌量含量大，所以在進(jìn)行傳統(tǒng)國家標(biāo)準(zhǔn)方法培養(yǎng)分離的同時，直接將標(biāo)本10倍稀釋后置入平板培養(yǎng)鑒定，并使用了CAS培養(yǎng)，以使檢驗結(jié)果更加直觀、快速、準(zhǔn)確。結(jié)果顯示，同時采用直接培養(yǎng)和增菌培養(yǎng)，同時使用SS和CAS培養(yǎng)，對分純后的菌株運(yùn)用全自動微生物分析儀鑒定復(fù)核，均獲得預(yù)期滿意的結(jié)果，上述方法的符合率均為100%。直接培養(yǎng)法比增菌培養(yǎng)法節(jié)約了大約36 h。因此，在處置突發(fā)性公共衛(wèi)生事件病原菌檢測過程中，可根據(jù)實驗室條件和現(xiàn)場情況，采用“多種思路、多種方法”檢測各種細(xì)菌的檢測原則［14］，靈活應(yīng)用直接接種、增菌培養(yǎng)和其他檢測技術(shù)，并且在培養(yǎng)基的選擇上，可以考慮同時選用更加直觀的顯色培養(yǎng)基。幾種方法互為補(bǔ)充，互為參考，既縮短檢測初次報告時間，也可確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和敏感性，為快速、有效控制疫情提供技術(shù)保證。

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