烏司他丁和血必凈抑制晚期內(nèi)毒素血癥大鼠炎癥反應(yīng)的對(duì)比研究

蔣國(guó)洪，馮旭明，段 嫄，陳麗芬

1.深圳市寶安區(qū)婦幼保健院(廣東深圳518133)

2.深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院(廣東深圳518133)

烏司他丁(ulinastatin，UTI)與血必凈(Xuebijing，XBJ)在臨床上常用來(lái)治療炎癥反應(yīng)，UTI在臨床治療炎癥反應(yīng)有一定毒副作用，而TUI作為中成藥物臨床療效起效慢，在炎癥反應(yīng)晚期兩種藥物抑制炎癥反應(yīng)是否有差別是臨床關(guān)注的話題，本實(shí)驗(yàn)就此做相關(guān)研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年SPF級(jí)雄性SD大鼠72只，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供體質(zhì)量220～250 g，8～10周齡，隨機(jī)分為內(nèi)毒素(LPS)組、UTI治療組和XBJ治療組，每組24只，先養(yǎng)3d讓大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，實(shí)驗(yàn)前12h禁食，可以自由飲水。

1.2 主要試劑 LPS試劑(美國(guó)，Sigma公司);XBJ針(天津紅日藥業(yè)股份有限公司);UTI針(廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司);HMGB1試劑(美國(guó)，Biosource公司)。

1.3 方法 采用鼠尾靜脈注射LPS建立LPS血癥大鼠模型［1］;分別用 UTI(20000 U/kg，NS 稀釋至 2 ml)［2］、XBJ(4ml/kg，NS 稀釋至 2ml)［3］腹腔注射相應(yīng)組別的大鼠，每天2次，觀察大鼠用藥后活動(dòng)、進(jìn)食、豎毛、眼球凹陷、呼吸抑制等反應(yīng)，各個(gè)時(shí)點(diǎn)麻醉后處死大鼠，取心臟血，分離血清，雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清HMGB1的值，并記錄大鼠死亡情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。計(jì)量資料服從正態(tài)分布及方差齊性，采用方差分析以及重復(fù)測(cè)量方差分析;多組資料兩兩比較采用LSD法。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般觀察指標(biāo) LPS組大鼠注射LPS后8h精神萎靡，豎毛，不進(jìn)食，活動(dòng)減少，體溫升高，呼吸急促，對(duì)刺激反應(yīng)差;12 h后，呈嗜睡狀，倦怠，卷曲，活動(dòng)明顯減少，多數(shù)出現(xiàn)解稀便，至24 h達(dá)到高峰;48h后漸恢復(fù)活動(dòng)，少許進(jìn)食水;72 h后動(dòng)物的一般情況逐漸改善，活動(dòng)、進(jìn)食漸正常。(LPS+UTI)組和(LPS+XBJ)組大鼠注射LPS后的一般情況和高峰與LPS組相似，但程度較輕，24h后活動(dòng)及進(jìn)食漸恢復(fù)，但是(LPS+UTI)組與(LPS+XBJ)組無(wú)明顯差別。

2.2 HMGB1水平在各組中各時(shí)間點(diǎn)的比較 經(jīng)兩兩 LSD 比較，LPS組在 8h、24 h、48 h、72 h 時(shí)間點(diǎn)分別與烏司他丁、血必凈組有差別(P＜0.01或 P＜0.05);UTI組在8h、24h、48h、72h 時(shí)間點(diǎn)與 XBJ組無(wú)差別(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

3 討論

晚期炎癥介質(zhì)HMGB1在膿毒癥的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸及預(yù)后方面扮演著重要角色［4］。相對(duì)于TNF－α等早期炎癥介質(zhì)而言，HMGB1具有釋放晚，維持時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)機(jī)體炎癥反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸等均具有調(diào)控作用等特點(diǎn)，是膿毒癥產(chǎn)生致死效應(yīng)的關(guān)鍵因子，為膿毒癥的治療提供了寶貴的“時(shí)間窗”，可能成為膿毒癥治療的新靶點(diǎn)［5］。HMGB1是膿毒癥致死效應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用的細(xì)胞因子，促炎作用的關(guān)鍵在于其核內(nèi)的DNA結(jié)合蛋白被活化的巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞釋放到細(xì)胞外，從而發(fā)揮一系列炎癥效應(yīng)［6］。HMGB1的胞漿、胞外轉(zhuǎn)移是其發(fā)揮致死效應(yīng)的關(guān)鍵，其表達(dá)的量與膿毒癥嚴(yán)重程度成正比，多與LPS、TNF－α、IL－1β 等刺激有關(guān)，也能被壞死細(xì)胞直接釋放，但凋亡細(xì)胞并不直接釋放HMGB1［7］。UTI在抑制HMGB1表達(dá)、降低膿毒癥死亡率等方面有良好效果［8］。

表1 HMGB1水平在各組中各時(shí)間點(diǎn)的比較(±s，n=6，μg/L)

表1 HMGB1水平在各組中各時(shí)間點(diǎn)的比較(±s，n=6，μg/L)

時(shí)間(h)內(nèi)毒素組 烏司他丁組 血必凈組8 13.24±1.17 10.80±1.34 11.80±1.5024 18.08±2.00 13.20±1.28 13.68±1.8348 22.62±1.85 12.00±1.08 12.03±0.8572 26.51±1.31 10.62±1.49 11.31±0.99

(LPS+UTI)組、(LPS+XBJ)組的 HMGB1水平在注射后8、24、48、72h比 LPS組降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明UTI、XBJ治療可以降低HMGB1水平;(LPS+UTI)組的HMGB1水平在注射后8 h比(LPS+XBJ)組降低更多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但是在注射后 24、48、72 h，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說(shuō)明UTI在晚期抑制LPS血癥大鼠的炎癥反應(yīng)并不優(yōu)于XBJ。

XBJ可拮抗內(nèi)毒素、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、減輕膿毒癥及多器官功能障礙綜合征時(shí)的器官損傷［9］，改善患者病死率。XBJ可以通過(guò)拮抗炎性介質(zhì)TNF－α和IL－6有效降低膿毒癥患者血清中TNF－α、IL－6的水平，打斷炎癥激活的惡性循環(huán)，抑制過(guò)度的炎癥反應(yīng)，減少組織細(xì)胞的損害，改善循環(huán)和組織灌注，改善膿毒癥患者的病情［10］，還能拮抗或抑制心肌抑制物質(zhì)、血管活性物質(zhì)等炎性介質(zhì)釋放的功能，是治療LPS 休克的重要手段［11］。

本研究粗略探討了烏司他丁與血必凈抑制晚期內(nèi)毒素大鼠炎癥反應(yīng)的療效，由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量有限，觀察時(shí)間點(diǎn)較少，所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可能有誤差。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中將增加樣本量，改變用藥劑量，增加測(cè)定值的時(shí)間點(diǎn)，以更深入研究?jī)煞N藥品的療效，為臨床用藥做好基礎(chǔ)理論研究。

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