南安市部分規(guī)模化養(yǎng)雞場(chǎng)雞新城疫血清學(xué)調(diào)查與分析

黃文生 洪小珠 陳澤金 黃延招 傅霞珠 黃瑞芬 陳美足

（福建省南安市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 福建南安 362300）

雞新城疫（ND）又稱亞洲雞瘟，俗稱雞瘟。是雞的一種烈性病毒性傳染病，被國(guó)際獸醫(yī)局列為對(duì)動(dòng)物危害最大的A 類傳染病?；茧u常呈急性敗血癥狀。主要特征是呼吸困難、便稀、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血。死亡率高，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)為害嚴(yán)重。1926年首先發(fā)現(xiàn)于印度尼西亞，不久又在英國(guó)新城發(fā)現(xiàn)，世界各國(guó)均有流行記載。有強(qiáng)毒株和弱毒株兩類。病毒分為低毒力型（即緩發(fā)型）、中等毒力型（即中發(fā)型）、強(qiáng)毒力型（即速發(fā)型）3 型。多數(shù)高強(qiáng)度毒力株常屬嗜內(nèi)臟型新城疫病毒。雞科動(dòng)物都可感染該病，家雞最易感，雛雞比成年雞易感性更高。

2012年10月至2013年5月，自南安市碼頭、梅山、洪瀨、康美、柳城、豐州、霞美、官橋等8個(gè)鎮(zhèn)的規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)采集了1 390 份雞血清樣品，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，目的是掌握南安市養(yǎng)雞專業(yè)戶雞新城疫血清學(xué)流行情況，以便更好地防控雞新城疫，為養(yǎng)雞專業(yè)戶提供科學(xué)的預(yù)防途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清 隨機(jī)選擇轄區(qū)內(nèi)已免疫和未免疫雞新城疫疫苗規(guī)?；B(yǎng)雞場(chǎng)的雞，局部消毒處理后，用一次性5 mL 采血器翅靜脈采血，室溫靜置1～2 h，3 000 r/min 離心15 min，分離血清，備用。

1.1.2 診斷試劑 廣州市健侖生物科技有限公司生產(chǎn)的雞新城疫抗體檢測(cè)試劑盒。試劑盒中包括預(yù)包被板48T/96T、酶結(jié)合物（1 號(hào)液）、濃縮洗滌液（2 號(hào)液）、底物（3 號(hào)液）、顯色劑（4 號(hào)液）、樣本稀釋液（5 號(hào)液）、終止液（6 號(hào)液）、陽性對(duì)照品、陰性對(duì)照品、不干膠膜等。

1.2 試驗(yàn)方法與步驟

1.2.1 試驗(yàn)方法 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法。

1.2.2 操作步驟

1）洗滌液配制。用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2 號(hào)液）按1：10 稀釋，如取50 mL 濃縮液與450 mL 蒸餾水或去離子水充分混勻，即為工作洗滌液。

2）樣本稀釋。用樣本稀釋液（5 號(hào)液）將待檢血清樣本按1：100 稀釋，如取5 uL 樣本與495 uL 樣本稀釋液，混勻。陰性、陽性對(duì)照品不用稀釋，直接加樣。

3）加樣反應(yīng)。每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽性及空白對(duì)照各1 孔（分別加入陰性、陽性對(duì)照及樣本稀釋液100 uL）。樣本檢測(cè)孔每孔加已稀釋血清樣本100 uL。37 ℃避光反應(yīng)30 min 后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3 次，每次均需停留1 min后再甩凈，拍干。

4）加酶反應(yīng)。除空白對(duì)照孔外，每孔加酶結(jié)合物（1 號(hào)液）1 滴。37 ℃避光反應(yīng)30 min 后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5）顯色反應(yīng)。加底物液（3 號(hào)液）和顯色劑（4 號(hào)液）各1 滴，混勻，37 ℃避光顯色10 min。加終止液（6 號(hào)液）1 滴，終止反應(yīng)（加終止液后，藍(lán)色會(huì)變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。

1.2.3 結(jié)果判定 陰性對(duì)照呈無色或淺黃色，陽性對(duì)照呈明顯黃色，表示試驗(yàn)有效。以空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450 nm（630 nm 作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度（A 值）。待檢孔A 值大于陰性對(duì)照A 值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對(duì)照A 值的平均值低于0.08 時(shí)按0.08 計(jì)算。

結(jié)果判定：樣品OD630值大于0.42，判為陽性；樣品OD630值在0.38～0.42，判為可疑；樣品OD630值小于0.38，判為陰性。

2 結(jié) 果

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法，對(duì)南安市的碼頭、梅山、洪瀨、康美、柳城、豐州、霞美、官橋等8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)49個(gè)存欄3 000 羽以上規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)采集分離到的1 390 份雞血清樣品進(jìn)行雞新城疫抗體檢測(cè)。

2.1 免疫雞群抗體情況 采集免疫雞新城疫疫苗雞群血清樣品共810 份，進(jìn)行抗體檢測(cè)分析，結(jié)果見表1。碼頭、梅山、洪瀨、康美、柳城、豐州、霞美、官橋雞的新城疫血清抗體陽性率分別為86.67%、91.67%、93.33%、90.67%、93.33%、90.00%、86.67%和93.33%。在檢測(cè)的27個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)810 份血清樣品中，平均陽性率為91.23%。其中，洪瀨、柳城、官橋鎮(zhèn)所檢雞場(chǎng)血清抗體陽性率最高，均為93.33%。

表1 免疫雞群抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 未免疫雞群抗體情況 采集未免疫雞新城疫疫苗雞群血清樣品總共580 份，進(jìn)行抗體檢測(cè)分析，結(jié)果見表2。在所檢的22個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)580 份血清樣品中，其中碼頭、梅山、洪瀨、康美、柳城、豐州、霞美和官橋雞血清抗體陽性率分別為15.00%、14.67%、8.00%、6.67%、10.00%、15.00%、10.00%和2.5%，而碼頭、豐州地區(qū)出現(xiàn)抗體陽性最高，官橋抗體陽性最低。在檢測(cè)的22個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)中，雞新城疫血清抗體陽性率平均為8.45%。

表2 未免疫雞群抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 免疫不同疫苗后雞群血清抗體的分布情況

1）在二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗（La Sota 株+H120 株）及注射雞新城疫滅活疫苗的雞群中，挑選5個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)，采集血清樣品180 份進(jìn)行抗體檢測(cè)，結(jié)果見表3。在采集的5個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)的30 份、60 份、30 份、30 份、30 份血清中，血清抗體陽性數(shù)分別為28、57、30、30和29，血清抗體陽性率分別為93.33%、95.00%、100.00%、100.00%和96.67%，抗體滴度很高，免疫力堅(jiān)強(qiáng)，能夠有效阻止病毒對(duì)雞群的攻擊。

表3 免疫二聯(lián)活疫苗及滅活疫苗后雞群抗體檢測(cè)結(jié)果

2）從二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗（La Sota 株+H120 株）的規(guī)?；B(yǎng)雞場(chǎng)中隨機(jī)抽選5個(gè)場(chǎng)的120 份血清樣品，抗體檢測(cè)結(jié)果見表4。5個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)的120 份血清樣品中，陽性95 份，平均陽性率79.17%。5個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)的血清抗體陽性率分別為80.00%、75.00%、85.00%、80.00%和70.00%，說明二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗（La Sota 株+H120 株）也能產(chǎn)生有效免疫。

表4 免疫二聯(lián)活疫苗后抗體檢測(cè)結(jié)果

3 分析與討論

1）從血清學(xué)調(diào)查結(jié)果分析得出，該病血清學(xué)陽性雞在南安市部分養(yǎng)雞場(chǎng)中小范圍存在。在檢測(cè)未免疫雞群的580 份血清樣品中，陽性血清為49 份，平均陽性率為8.45%。這也意味著養(yǎng)雞場(chǎng)潛在暴發(fā)新城疫的風(fēng)險(xiǎn)，在生產(chǎn)過程中隨時(shí)有可能引起較大的經(jīng)濟(jì)損失。在27個(gè)免疫過雞新城疫疫苗的養(yǎng)雞場(chǎng)的810 份血清樣品中，平均抗體陽性率為91.23%，說明免疫接種是防止該病發(fā)生的一種經(jīng)濟(jì)又簡(jiǎn)便的有效手段，是預(yù)防和控制該病的根本措施。

2）免疫雞新城疫疫苗后，平均抗體陽性率在91.23%以上，能夠?qū)﹄u群產(chǎn)生較好的保護(hù)。二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗（La Sota 株+H120 株）及注射雞新城疫滅活疫苗對(duì)雞群可產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫力，平均抗體陽性率為96.67%。二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗（La Sota 株+H120 株）的平均抗體陽性率為79.19%，其原因有待進(jìn)一步研究。

3）由表2 可以看出，養(yǎng)雞相對(duì)集中的地區(qū)，養(yǎng)殖設(shè)施簡(jiǎn)單，肉雞交易、從業(yè)人員流動(dòng)頻繁的地區(qū)，暴發(fā)流行該病的機(jī)會(huì)大，如碼頭、梅山、豐州地區(qū)，暴發(fā)的機(jī)會(huì)較大，官橋地區(qū)則相對(duì)較低。

4）調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大部分養(yǎng)雞場(chǎng)戶主還是很清楚疫苗免疫接種是預(yù)防和控制該病的主要措施，并且也會(huì)按免疫程序進(jìn)行疫苗免疫。但有個(gè)別養(yǎng)殖戶存在僥幸心理，不按免疫程序、免疫劑量的要求去實(shí)施。

5）筆者認(rèn)為今后應(yīng)加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)雞場(chǎng)的技術(shù)培訓(xùn)，規(guī)范免疫程序，積極推廣應(yīng)用活疫苗+滅活苗的免疫程序和相應(yīng)配套的血清學(xué)鑒別診斷方法，以對(duì)雞新城疫進(jìn)行控制。養(yǎng)殖戶一定要注意，單純靠疫苗免疫接種是不能控制和消滅任何一種傳染病的，應(yīng)該采取綜合防治措施。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，注意控制雞舍內(nèi)的溫度、濕度、光照，保持空氣新鮮。在天氣突然變化時(shí)，飲水中應(yīng)添加一些抗應(yīng)激藥物，如維生素C、維生素E、電解多維等。提高飼料營(yíng)養(yǎng)水平：可在飼料中添加2%大豆磷脂，并加大多維的使用量，提高飼料營(yíng)養(yǎng)水平。

6）目前南安市的養(yǎng)雞從業(yè)人員文化素質(zhì)相對(duì)較低，在養(yǎng)殖過程中缺乏專業(yè)的獸醫(yī)進(jìn)行指導(dǎo)，主要靠經(jīng)驗(yàn)養(yǎng)殖，所以，在疫病防控方面是非常欠缺科學(xué)知識(shí)。為此，不僅要加強(qiáng)對(duì)該病的防控，還要盡早建立一整套培訓(xùn)養(yǎng)雞業(yè)從業(yè)人員的課程，有效地預(yù)防和控制該病，為南安市雞新城疫防控提供科學(xué)依據(jù)和方法。