外界溫度和放置時(shí)間對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)測(cè)定的影響

李玉芹，江峰錦

（1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，成都 610072；2.重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 401120）

網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞脫核后仍含有殘留RNA的紅細(xì)胞，用煌焦藍(lán)染色后，根據(jù)RNA含量的多少著色呈點(diǎn)狀及網(wǎng)狀。其傳統(tǒng)分型方法是在顯微鏡下進(jìn)行分類計(jì)數(shù)（計(jì)數(shù)1 000個(gè)紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞），根據(jù)形態(tài)將其分為4型，此種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，受人為因素的影響較大。隨著科學(xué)的不斷發(fā)展，自動(dòng)化血液細(xì)胞分析儀器的廣泛使用，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)也由全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀逐步代替手工操作，并將網(wǎng)織紅細(xì)胞精確分為高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（HFR）、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（MFR）、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（LFR）3部分。但影響血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)的因素很多，除了儀器本身的精密度與準(zhǔn)確性、試劑質(zhì)量、操作者自身水平的高低、標(biāo)本采集等因素外，標(biāo)本采集后保存溫度及放置時(shí)間也是很重要的影響因素。為此，筆者對(duì)53例不同溫度下放置不同時(shí)間的靜脈血標(biāo)本測(cè)定其網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)，以了解時(shí)間和溫度對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)測(cè)定的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

53例標(biāo)本來(lái)源于我院門診病人，標(biāo)本收集以EDTA－K2鹽抗凝真空管（BD公司生產(chǎn)）采集新鮮靜脈抗凝全血。

1.2 儀器和試劑

日本希森美康公司生產(chǎn)的Sysmex XE－2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及其配套試劑；質(zhì)控品是Sysmex公司生產(chǎn)在線質(zhì)控物，分為高、中、低3個(gè)水平。

1.3 方法

1.3.1 Sysmex XE－2100血細(xì)胞分析儀各項(xiàng)參數(shù)均經(jīng)校準(zhǔn)，每天用Sysmex公司生產(chǎn)高、中、低3個(gè)水平的質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。

1.3.2 檢測(cè) 將靜脈血標(biāo)本采集后立即上機(jī)檢測(cè)（用手動(dòng)方法，為保證結(jié)果的可靠性，減少人員操作誤差，所有實(shí)驗(yàn)均由1人完成）網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)（此次計(jì)數(shù)為0h結(jié)果），然后將標(biāo)本均勻分成兩組（用未加抗凝劑的空白管），一組放室溫（24℃），另一組放冰箱（4℃），分別在2、4、6、8、10、12、24、48、72h測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）形式表示，運(yùn)用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)量分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 室溫（24℃）不同放置網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)測(cè)定結(jié)果

網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)在12h內(nèi)與即刻值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），12h之后與即刻值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表1）。

2.2 冰箱（4℃）不同放置時(shí)間網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)測(cè)定結(jié)果

與即刻值進(jìn)行比較，網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率和HFR在72h內(nèi)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），IRF、LFR、MFR值與即刻值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表2）。

表1 室溫（24℃）不同放置時(shí)間網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)測(cè)定結(jié)果

表2 冰箱（4℃）不同放置時(shí)間網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)測(cè)定結(jié)果

3 討論

網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞脫核后到完全成熟紅細(xì)胞間的過(guò)渡細(xì)胞，是反映骨髓造血功能的重要指標(biāo)。在貧血診斷、療效觀察、腫瘤化療及骨髓移植等方面都有重要的臨床價(jià)值［1－4］。

隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，目前對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù)已由原先簡(jiǎn)單傳統(tǒng)的手工計(jì)數(shù)法衍變成現(xiàn)在的血細(xì)胞分析儀檢測(cè)，不僅能更精確地計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞的個(gè)數(shù)，還能將網(wǎng)織紅細(xì)胞精確地分為HFR、MFR及LFR 3部分，即“分群”。熒光越高，表示網(wǎng)織紅細(xì)胞含核酸越多，細(xì)胞也就越幼稚。IRF為MFR和HFR之和（MFR＋HFR），表示幼稚細(xì)胞占總Ret的百分比。而對(duì)骨髓移植和腫瘤化療病人主要是觀察網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)即“分群”的變化，特別是分析 HFR 或IRF的變化［5－8］.

網(wǎng)織紅細(xì)胞的發(fā)育是從晚幼紅細(xì)胞、HFR、MFR到LFR的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。為探討標(biāo)本離體后溫度和時(shí)間對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)的影響，我們進(jìn)行了上述試驗(yàn)。從表1可以看出網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)在室溫（24℃）12h內(nèi)與即刻值比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，12h之后與即刻值比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；從表2可以看出，4℃ 保存的標(biāo)本72h內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率和HRF與即刻值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IRF、LFR、MFR值與即刻值比較24h內(nèi)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，24h之后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從表1、表2的均值可以看出，在4℃和24℃條件下，IRF均呈降低趨勢(shì)，而LFR有升高趨勢(shì)，其結(jié)果與叢玉隆等［8］報(bào)道有一定差異，與白壵等［10］報(bào)道一致。在4℃時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)在72h內(nèi)均值改變不明顯，而24℃時(shí)較明顯，對(duì)于這種現(xiàn)象，我們認(rèn)為可能是由于低溫條件下，Ret成熟較慢，RNA消失延遲；還有可能是標(biāo)本離體后，在較高溫度條件下越幼稚的網(wǎng)織紅細(xì)胞向成熟階段發(fā)育速度越快，而到了較成熟階段（LFR）發(fā)育速度有所減慢所致。

總之，為了保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，為臨床提供可靠的網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)結(jié)果，我們認(rèn)為在測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞及其參數(shù)時(shí)，標(biāo)本離體后在室溫12h、4℃24h內(nèi)應(yīng)完成檢測(cè)。

［1］Yesmin S，Sultana T，Roy CK，et al.Immature reticulocyte fraction as a predictor of bone marrow recovery in children with acute lymphoblastic leukaemia on remission induction phase［J］.Bangladesh Med Res Counc Bull，2011，37（2）：57－60.

［2］Urrechaga E，Borque L，Escanero JF.Erythrocyte and reticulocyte parameters in iron deficiency and thalassemia［J］.J Clin Lab Anal，2011，25（3）：223－228.

［3］Piva E，Brugnara C，Chiandetti L，et al.Automated reticulocyte counting：state of the art and clinical applications in the evaluation of erythropoiesis［J］.Clin Chem Lab Med，2010，48（10）：1369－1380.

［4］Mullier F，Lainey E，F(xiàn)enneteau O，et al.Additional erythrocytic and reticulocytic parameters helpful for diagnosis of hereditary spherocytosis：results of a multicentre study［J］.Ann Hematol，2011，90（7）：759－768.

［5］Luczyński W，Ratomski K，Wysocka J.Immature reticulocyte fraction（IRF）：an universal marker of hemopoiesis in children with cancer［J］.Adv Med Sci，2006，51：188－190.

［6］洪纓，李熙鴻，不同保存期限紅細(xì)胞輸注對(duì)早產(chǎn)兒影響的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)：研究設(shè)計(jì)［J］.國(guó)際輸血及血液學(xué)雜志，2009，32（5）：471－473.

［7］金勝航，吳敏瑾，郭希超.網(wǎng)織紅細(xì)胞及相關(guān)參數(shù)檢測(cè)在骨髓移植中的應(yīng)用［J］.全科醫(yī)學(xué)臨床與教育，2003，1（2）：22－23.

［8］黃再捷，張兵.采用未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞指數(shù)監(jiān)測(cè)惡性腫瘤患者放療前，后骨髓功能恢復(fù)的臨床價(jià)值［J］.臨床內(nèi)科雜志，2003，20（6）：312－313.

［9］叢玉隆，樂(lè)家新，蘭亞婷，等.標(biāo)本保存條件對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞分析的影響［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2002，20（1）：33－34.

［10］白壵，廖君群，陳宏礎(chǔ)，等.標(biāo)本保存條件對(duì)血液病患者網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)測(cè)定的影響［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2011，40（3）：244－245.