HP L C法對蒙藥四味土木香散中氧化苦參堿含量的測定分析

鄧清平 呂玉光

1.湖南省長沙市四醫(yī)院，湖南 長沙 410006；2.佳木斯大學藥學院，黑龍江 佳木斯 154003

蒙藥四味土木香散是臨床中常見的一種藥物，主要由土木香和苦參以及珍珠桿與山柰等藥物精制而成的，臨床上具有清熱解表的效果。但是，在對其進行質(zhì)量控制時，如何采取有效的方法進行測定顯得尤為重要。臨床中采取測定的方法也比較多，常見的采取高效液相色譜法（HPLC）測定苦參堿的含量，但是這種測定方法中被測峰面積比較小，而且存在拖尾和保留時間長等不足[1]。隨著人們對其質(zhì)量控制的不斷研究，有資料采取HPLC法進行測定其中的氧化苦參堿，且具有較好的應用效果。因此，本文對這種測定方法進行深入的探討，具體的方法如下：

1 材料與方法

1.1 研究材料

儀器：島津LC-6A液相色譜儀和CR-3A記錄儀以及SPD-6AV檢測器與SIL自動進樣器。

試劑：甲醇作為色譜純，其他的試劑為分析純。氧化苦參堿對照品（由中國藥品生物制品檢定所提供），蒙藥四味土木香散（由內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司提供）。

1.2 方法

本次研究對于測定蒙藥四味土木香散中的氧化苦參堿含量采取HPLC法進行測定，條件如下[2]：色譜柱：Shimpack CLC-ODS 色譜柱（6.0 mm×150 mm，5 μm）；流動相：0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液-甲醇-高氯酸鈉（750∶250∶20）；流速：1.0 mL/min；波長：215 nm；溫度：室溫。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗

通過上述的條件下分析，選取供試品和對照品以及陰性空白樣品溶液均取20 μL。結(jié)果顯示，供試品溶液的色譜被測峰和其他的峰分離較好，而且理論塔板數(shù)均按照氧化苦參堿峰計算＞4000[3]。具體的圖像顯示見圖1。

2.2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

取樣品溶液0.5 g，并采取精密進行稱定，然后將其進行置入錐形瓶中，并進行滴加0.5 mL的濃氨試液，精密加入20 mL的三氯甲烷，并對其質(zhì)量進行稱定，采取超聲進行處理40 min，并放冷，再次稱定其質(zhì)量。然后，加入三氯甲烷補足原來的質(zhì)量，經(jīng)慮過和精密量取后，取續(xù)濾液5.0 mL，并進行蒸干處理，在殘渣中加入無水乙醇溶液進行稀釋并進行搖勻。最后采取微孔膜進行過濾，所得的溶液即為供試品溶液；然后依據(jù)處方的比例進行制備缺苦參陰性樣品溶液，并采取同樣的方法制備陰性對照品溶液。同時，精密稱取氧化苦參堿對照品，并利用甲醇制成0.198 mg/mL的溶液作為對照品溶液[4]。

2.3 線性關系

本次研究對于線性關系的考察如下：精密稱取對照品溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，并將抽取的溶液置入 25 mL的量瓶之中，加入流動相稀釋到刻度，并搖勻處理。然后按照上述的色譜條件進行測定峰面積，其中，縱坐標為峰面積的積分值，橫坐標為進樣量[5]。并繪制標準的曲線圖，得出回歸性方程：Y=1118990X+13871，r=0.9999。其中，線性范圍值為 0.2～1.6 μg。

2.4 精密度試驗

首先，精密量取2.0 mL的對照品溶液，并將其置入25.0 mL的量瓶之中，并采取流動相進行稀釋到刻度，進行搖勻，重復進樣5次，每次進行測定20 μL，得峰面積積分值的RSD=0.3%。然后，采取同樣的方法量取2.0 mL的供試品溶液，并將其置入25.0 mL的量瓶之中，并采取流動相進行稀釋到刻度，進行搖勻，重復進樣5次，每次進行測定20 μL，得峰面積積分值的RSD=0.8%。

2.5 穩(wěn)定性試驗

稱取同一批的供試品溶液，并且進行分別在2、4、6、8 h時進行進樣1次，而且每次進樣為20 μL，并詳細記錄峰面積積分值，其結(jié)果顯示，在8 h內(nèi)，氧化苦參堿峰面積無任何的改變，并且其RSD=2.0%。

2.6 重復性試驗

稱取同一批號的供試品溶液0.5 g，并取5份，同時進行精密稱定，并按照樣品含量的測定方法進行測定，結(jié)果，氧化苦參堿的平均含量值為2.825 mg/g，RSD=1.2%，n=5。

2.7 加樣回收試驗

選取樣品0.5 g，并進行精密稱定，加入3.0 mL的對照品溶液，并且按照供試品溶液的制備方法進行制備，并計算有效回收率情況，具體的結(jié)果見表1。

2.8 樣品測定

精密稱取供試品溶液和對照品溶液均2.0 mL，并將其置入25.0 mL的量瓶之中，并采取流動相進行稀釋到刻度，搖勻，按照外標法計算氧化苦參堿的含量。具體的數(shù)據(jù)分析見表2。

3 討論

蒙藥四味土木香散的質(zhì)量控制中，常常采取HPLC法進行測定苦參堿的含量，但是這種測定的方法并不是很理想，在實際的操作中存在被測峰面積比較小、拖尾和保留時間長等不足點，從而使得整個應用效果并不理想[6-8]。隨著人們對其測定的不斷研究，采取HPLC法進行氧化苦參堿含量的測定，具有較好的應用效果[9-10]。而且通過本次的臨床研究分析，采取HPLC法測定蒙藥四味土木香散中氧化苦參堿的含量具有較好的應用效果，而且資料顯示，氧化苦參堿在0.2～1.6 μg的范圍內(nèi)和峰面積的線性關系良好，而且平均加樣回收率達到了99.6%，RSD=0.5%。因此，采取這種方法可行，具體的分析如下：

表1 蒙藥四味土木香散中氧化苦參堿加樣回收試驗結(jié)果分析（n=6）

表2 樣品的含量測定結(jié)果比較（n=3）

3.1 波長選擇

由于紫外分光的光度計測得的樣品最大吸收波長在220 nm，而本次研究中采取測定氧化苦參堿樣品溶液在220 nm內(nèi)均具有較好的吸收效果。因此，本次研究選取檢測的波長為215 nm，從而有效地提高了試驗的準確性[11-12]。

3.2 提取條件

本次研究中對于溶液的制備主要依據(jù) 《中國藥典》2010年版苦參藥材含量的測定方法進行制備[13]。文章采取0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液-甲醇-高氯酸鈉（750∶250∶20）這種方法比較方便，而且其重現(xiàn)性也比較好[14]，故選取此條件。

3.3 溶劑選擇

由于本次研究的樣品中含有成膜的物質(zhì)，而且這種物質(zhì)不易溶解于水，而氧化苦參堿比較容易溶于水，因此，本次研究選取了無水乙醇，而且能夠有效地稀釋成較大的體積，并且減小了其體積的變化，從而避免出現(xiàn)誤差[15]。

3.4 處理時間

通過本次的臨床研究分析，而且對不同的超聲處理時間進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲處理40 min后其氧化苦參堿的含量不再變化，而且比較穩(wěn)定[16]。因此，本次研究中選取超聲處理時間為40 min。

綜上所述，臨床中采取HPLC法進行測定蒙藥四味土木香散中氧化苦參堿的含量具有較好的應用效果。這種方法比較簡單，而且測定的結(jié)果也比較準確，重現(xiàn)性和回收率均比較高[17]，是臨床中測定蒙藥四味土木香散中氧化苦參堿的有效方法，值得在臨床中應用。

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