PTEN在宮頸癌組織中的表達(dá)及對宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的作用

呂汕群 姚婷婷 黃諾潔 莊 敏

1.廣東省汕頭市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東汕頭 515041；2.中山大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東廣州 510000

宮頸癌是全球婦女第二高發(fā)惡性腫瘤，僅次于乳腺癌，在發(fā)展中國家其發(fā)病率居第一位[1]。近年來，宮頸癌的發(fā)病率有明顯上升趨勢，尤其是年輕宮頸癌患者。第10染色體同源丟失磷酸酶-張力蛋白基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，PTEN）是一種腫瘤抑制基因，在細(xì)胞生長、凋亡、黏附、遷移、浸潤等方面有重要作用。近年來發(fā)現(xiàn)PTEN基因變化與人類多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]，而PTEN與宮頸癌病變的關(guān)系目前尚無定論，所以PTEN的研究對宮頸癌的診斷和治療有重要價值。本研究采用一抗+生物素化二抗+辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素酶標(biāo)親和素-生物素技術(shù)（labelled streptavidinbiotin technique，SP）檢測宮頸癌及正常宮頸組織中PTEN的表達(dá)水平，結(jié)合臨床病例的分期、腫瘤分級、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析來探討PTEN對宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取廣東省汕頭市中心醫(yī)院病理科2009年6月～2010年6月保存的宮頸石蠟包埋組織90例，包括正常宮頸組織20例（從因子宮肌瘤全宮切除的石蠟包埋組織中選?。?，宮頸癌組織70例；患者年齡23～70歲，平均35.8歲，所有患者取標(biāo)本前均未接受放、化療及免疫治療，所有的組織標(biāo)本均由兩名職稱、年資相當(dāng)?shù)牟±磲t(yī)師診斷。宮頸癌的臨床分期采用國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）2009年修訂的臨床分期，其中Ⅰ期41例，Ⅱ期29例，中高分化60例，低分化10例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

標(biāo)本制好后免疫組化染色采用SP法，具體實(shí)驗(yàn)操作步驟如下：抗原修復(fù)后的組織切片用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，5 min×3次；3%過氧化氫甲醇溶液，孵育10 min；PBS沖洗，5 min×3次；每張切片加50 μL非免疫性動物血清，室溫下孵育10 min后吸去多余的液體；每張切片加50 μL的一抗，置于4℃冰箱過夜；PBS沖洗，5 min×3次；每張切片加50 μL生物素標(biāo)記的二抗，室溫下孵育10 min；PBS沖洗，5 min×3次；每張切片加50 μL鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶溶液，室溫下孵育10 min；PBS沖洗，5 min×3次；二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色蘇木精復(fù)染，中性樹膠封固。用PBS代替一抗作陰性對照。以細(xì)胞核著色為PTEN蛋白陽性反應(yīng)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN在正常宮頸組織及宮頸癌組織中的表達(dá)

正常宮頸組織中表達(dá)呈黃褐色或棕黃色，主要表達(dá)于細(xì)胞核中；宮頸癌中表達(dá)呈不著色或淺黃色，主要表達(dá)于細(xì)胞核中。見圖1～4。

PTEN在正常宮頸組織陽性表達(dá)率為100%（20/20），PTEN在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為70%（49/70），宮頸癌中PTEN的表達(dá)明顯低于正常宮頸組織，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.83，P ＜ 0.01）。 見表1。

表1 第10染色體同源丟失磷酸酶-張力蛋白基因在正常宮頸、宮頸癌組織中的表達(dá)

2.2 PTEN表達(dá)與宮頸癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

PTEN在宮頸癌臨床分期Ⅰ期的陽性表達(dá)率為75.6%（31/41），PTEN在宮頸癌臨床分期Ⅱ期的陽性表達(dá)率為62.1%（18/29），PTEN在宮頸癌臨床分期Ⅱ期組與宮頸癌臨床分期Ⅰ期組中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.48，P＞0.05）；PTEN在中高分化宮頸癌的陽性表達(dá)率為71.7%（43/60），PTEN在低分化宮頸癌的陽性表達(dá)率為60.0%（6/10），PTEN在宮頸癌低分化組與中高分化組中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.56，P＞0.05）；PTEN在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌的陽性表達(dá)率為73.6%（39/53），PTEN在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌的陽性表達(dá)率為58.8%（10/17），PTEN在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.34，P＞0.05）。PTEN的表達(dá)量與宮頸癌的病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無關(guān)。見表2。

表2 第10染色體同源丟失磷酸酶-張力蛋白基因表達(dá)與宮頸癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

3 討論

PTEN是第10染色體同源丟失磷酸酶-張力蛋白基因，又名MMACI，是1997年發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤抑制基因，是迄今發(fā)現(xiàn)的第一具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，可通過基因突變、DNA甲基化等方式失活，主要表現(xiàn)為基因缺失、蛋白表達(dá)減少[2]。PTEN定位于人類染色體10q23.3上，含9個外顯子，8個內(nèi)含子。cDNA序列包含由1209個核苷酸組成的開放閱讀框架，編碼403個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。PTEN在細(xì)胞生長、凋亡、黏附、遷移、浸潤等方面有重要作用。目前發(fā)現(xiàn)PTEN主要有以下功能：①抑制細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。②抑制腫瘤血管形成。③抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲。PTEN基因在腫瘤細(xì)胞浸潤、血管發(fā)生和腫瘤惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用[3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白變化與人類多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4-5]。PTEN基因功能異常主要有等位基因缺失、基因突變、基因沉默和轉(zhuǎn)錄后翻譯等機(jī)制，以突變最為常見。PTEN基因突變使其蛋白表達(dá)的突變，如錯構(gòu)瘤綜合征、膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肝癌、消化道腫瘤等[6]。

本研究顯示，PTEN在宮頸癌組織、正常宮頸組織均有表達(dá)，且依次升高，宮頸癌組織與正常宮頸組織差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示PTEN蛋白表達(dá)下降與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)，這可能是由于PTEN基因的功能缺失使其對腫瘤細(xì)胞生長抑制及對細(xì)胞黏附的控制減弱，有助于宮頸癌的發(fā)生[7]。PTEN的表達(dá)量與宮頸癌的病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無關(guān)。

PTEN基因有可能作為早期篩查宮頸癌的指標(biāo)應(yīng)用于臨床，來篩查宮頸癌的高危人群，為宮頸癌的早期診斷提供幫助[8]。PTEN基因可作為評價宮頸癌預(yù)后的指標(biāo)。PTEN基因有可能作為宮頸癌基因治療的靶基因應(yīng)用于臨床。

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