芒果葉中芒果苷含量的測(cè)定*

郭伶伶，張 祎，劉二偉，韓立峰，王 濤

芒果葉為漆樹(shù)科植物芒果（Mangifera indica L.）的葉[1]，其性味酸、甘、涼、平，具有行氣疏滯、祛痧積的功能，主要用于治療熱滯腹痛、氣脹、小兒疳積、消渴[2]等癥。芒果葉中含有芒果苷、高芒果苷、異芒果苷、槲皮素、原兒茶酸等多種化學(xué)成分。主要成分芒果苷具有鎮(zhèn)咳、殺菌、抗病毒、抗腫瘤、降血糖、降血脂、提高腦細(xì)胞功能等多種功效[3-5]。

1 儀器與試劑

Agilent 1260液相色譜系統(tǒng)（UV檢測(cè)器，四元泵，在線脫氣機(jī)，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，可變波長(zhǎng)檢測(cè)器）；BP121S電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；KQ-300B超聲清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）。乙腈（色譜純，天津康科德科技有限公司）；其余試劑均為分析純，水為超純水。芒果苷對(duì)照品（中新藥業(yè)提供，純度>90%）；芒果葉藥材采自海南省?？谑?，由天津中醫(yī)藥大學(xué)李天祥副教授鑒定為芒果葉（Mangifera indica L.），樣品保存于天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，2011年5月采摘的樣品批號(hào)為2011MG05，2012年 4、5、6月樣品批號(hào)為 2012MG04-06。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 供試品溶液的制備 參照文獻(xiàn)[6-7]。稱取干燥芒果葉粉末（批號(hào)2011MG05）約0.2g，精密稱定，加入20 mL 60%甲醇，稱質(zhì)量，浸泡2 h，加熱回流2 h，放冷至室溫，稱質(zhì)量，用60%甲醇補(bǔ)足失質(zhì)量，搖勻，以0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得芒果葉供試品溶液。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 參照文獻(xiàn)[8-9]。精密稱取芒果苷對(duì)照品適量，用50%甲醇溶解，制成1 mL中含0.222 4 mg的對(duì)照品溶液。

2.3 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 參照文獻(xiàn) [10-11]。Cosmosil ODS（5C18-MS-Ⅱ waters，4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，乙腈-1%冰醋酸溶液（15∶85）為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；依上述色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液、樣品溶液各 10 μL，進(jìn)樣。

2.4 線性范圍的考察 精密稱取干燥芒果苷對(duì)照品22.24 mg，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，即得芒果苷對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液5 mL，置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，分別制成含量為222.40、111.20、55.60、27.80、13.90、6.95 μg/mL 系列濃度的對(duì)照品溶液，精密吸取各濃度的芒果苷對(duì)照品溶液10 μL注入高效液相色譜儀測(cè)定，測(cè)定各峰面積。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，依法測(cè)定各峰面積，對(duì)精密度進(jìn)行考察。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一芒果葉供試品溶液，分別于0、2、6、12 h不同時(shí)間間隔點(diǎn)進(jìn)樣分析，依法測(cè)定各峰面積，對(duì)方法的穩(wěn)定性進(jìn)行考察。

2.7 重復(fù)性考察 取同一批芒果葉粉末（批號(hào)2011MG05）約 0.2g，精密稱定，按“2.1供試品溶液的制備”方法平行制備6份，依法測(cè)定各峰面積，計(jì)算出芒果苷的含量，考察其重復(fù)性。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱定已知芒果苷含量的芒果葉樣品粉末（批號(hào)2011MG05）6份各0.2g，每份各加入20 mL 60%甲醇溶液及1.8 mL芒果苷對(duì)照品溶液，處理方法參照“2.1供試品溶液的制備”，依法測(cè)定各份樣品中芒果苷的含量。

2.9 供試品測(cè)定 分別取不同時(shí)期的芒果葉粉末約0.2g，精密稱定，按照“2.1供試品溶液的制備”方法平行制備3份，按“2.2色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性”色譜條件測(cè)定各供試品溶液的峰面積。

3 結(jié)果

3.1 線性考察 在254 nm波長(zhǎng)處測(cè)定系列對(duì)照品溶液，以芒果苷含量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制芒果苷對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸，得芒果苷回歸方程：Y贊=4 986.2X-65.496，r2=0.999 9，芒果苷在0.069 5～2.224 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見(jiàn)圖1。

圖1 芒果苷含量與峰面積線性關(guān)系考察

3.2 精密度考察 在254 nm波長(zhǎng)處連續(xù)6次進(jìn)樣，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品溶液中芒果苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表1，芒果苷的平均濃度為114.07 μg/mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）=0.11%，表明儀器的精密度良好。

表1 芒果苷的精密度實(shí)驗(yàn)

3.3 穩(wěn)定性考察 在254 nm波長(zhǎng)處分別在0、2、6、12 h測(cè)定供試品溶液中芒果苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。供試品溶液在測(cè)定時(shí)間12 h內(nèi)芒果苷含量RSD=0.55%。表明供試品在測(cè)定時(shí)間12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表2 芒果苷的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

3.4 重復(fù)性考察結(jié)果 在254 nm波長(zhǎng)下測(cè)定6份芒果葉供試品溶液中芒果苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表3，6份供試品溶液中芒果苷含量平均值為21.37 mg/g，RSD=1.68%，表明該方法重復(fù)性良好。

表3 芒果苷的重復(fù)性考察

3.5 加樣回收率考察結(jié)果 取6份加有芒果苷對(duì)照品溶液的供試品溶液，在254 nm波長(zhǎng)處測(cè)定芒果苷回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。芒果苷加標(biāo)平均回收率為96.77%，RSD＝1.19%。回收率較高說(shuō)明芒果苷在供試品溶液中不受其他物質(zhì)干擾，可準(zhǔn)確測(cè)定其含量。

表4 芒果苷的加樣回收率實(shí)驗(yàn)（n=6）

3.6 供試品測(cè)定結(jié)果 在254 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定不同批次的供試品溶液中芒果苷的含量，見(jiàn)表5。

表5 不同月份芒果葉中芒果苷的含量（n=3）

4 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定芒果葉提取物中芒果苷的含量，對(duì)照品和供試品溶液在254 nm波長(zhǎng)下峰形一致，無(wú)雜峰干擾。經(jīng)線性關(guān)系分析，在0.069 5～2.224 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，表明在該濃度范圍內(nèi)測(cè)定芒果苷含量準(zhǔn)確度較高。并且采用此方法精密度高、重現(xiàn)性好、加樣回收率高，為芒果葉藥材中芒果苷含量的測(cè)定提供一定的方法。

2011MG05和2012MG05兩批藥材測(cè)定結(jié)果表明，不同年份、相同月份采收的芒果葉中芒果苷含量相差很大。這可能與當(dāng)?shù)氐臍夂?，比如降水量、光照時(shí)間、光照強(qiáng)度及溫度有關(guān)，具體情況有待進(jìn)一步研究。2012MG04、2012MG05和2012MG06的供試品溶液測(cè)定結(jié)果表明，春季芒果苷含量隨芒果葉的生長(zhǎng)有所增加，6月份芒果葉中芒果苷含量最高，此時(shí)期芒果已經(jīng)成熟，采摘芒果葉對(duì)果實(shí)基本無(wú)影響。這為藥材采收提供一定的參考。

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊(cè)）[S].上海：上海人民出版社，1977：1040.

[2]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社,1990:54.

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