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    試論瘦肉精的檢測(cè)方法

    2013-07-05 05:27:52羅淑賢
    關(guān)鍵詞:瘦肉精檢測(cè)方法進(jìn)展

    羅淑賢

    【摘 要】“瘦肉精”是β-腎上腺受體激動(dòng)劑類(lèi)化合物的俗稱(chēng),包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇等十幾種物質(zhì)。β-激動(dòng)劑類(lèi)化合物大多是醫(yī)學(xué)臨床普遍使用的平喘類(lèi)藥物。它們另一個(gè)共同特征是,可大大減少食用動(dòng)物的脂肪、增加瘦肉,縮短動(dòng)物的生長(zhǎng)期。但是如果大量攝入瘦肉精,這些物質(zhì)很難通過(guò)動(dòng)物的代謝排出體外,而是會(huì)聚集于肌肉、內(nèi)臟等各部位。當(dāng)通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體,且累計(jì)攝入量超過(guò)一定值,就會(huì)產(chǎn)生毒副作用。在眾多β-腎上腺受體激動(dòng)劑類(lèi)化合物中,鹽酸克倫特羅(Clenbuterol,CL)和萊克多巴胺(Ractopamine,RAC)因藥效顯著、價(jià)格低廉,成為此類(lèi)藥物在畜禽養(yǎng)殖中應(yīng)用最為普遍的。雖然世界各國(guó)紛紛制定法規(guī)嚴(yán)禁鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺用于畜禽養(yǎng)殖,但因利潤(rùn)驅(qū)使,其非法使用的報(bào)道還在不斷出現(xiàn)。如何高效快速地檢測(cè)出瘦肉精成分,成為其有效監(jiān)管的重要環(huán)節(jié)。

    【關(guān)鍵詞】瘦肉精;檢測(cè)方法;進(jìn)展

    1.色譜檢測(cè)法

    目前,檢測(cè)瘦肉精殘留常用的色譜技術(shù)有高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS) 、毛細(xì)管電泳法(CE)等。中國(guó)已將高效液相色譜法(HPLC)作為檢測(cè)飼料中鹽酸克倫特羅殘留的半確證法,將 GC-MS 法定為確證性方法,主要用于最后確認(rèn)和仲裁,GB/T22147-2008“飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的測(cè)定液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法”規(guī)定了同步測(cè)定飼料中β-激動(dòng)劑沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。而對(duì)于動(dòng)物性食品,GB/T 5009.192-2003“動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定”規(guī)定的第一法為氣相色譜—質(zhì)譜法,第二法為高效液相色譜法,第三法為酶聯(lián)免疫法。

    除了國(guó)標(biāo)方法以外,國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者也通過(guò)研究建立了檢測(cè)瘦肉精的色譜法。

    毛細(xì)管電泳免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)尿液中鹽酸克倫特羅的方法,檢測(cè)限1.2nmol/L。對(duì)于尿液樣本的檢測(cè)結(jié)果表明,本方法回收率90%~108%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8%。

    通過(guò)場(chǎng)放大進(jìn)樣同步檢測(cè)西馬特羅、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇的毛細(xì)管電泳法。在該系統(tǒng)的最佳條件下,上述物質(zhì)檢測(cè)限低于2.0ng/ml,與傳統(tǒng)的電遷移進(jìn)樣相比,因更加敏感而更適于尿液中上述指標(biāo)的測(cè)定,在尿液中平均回收率高于95.6%和95.3%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于 3.5%。

    激光誘導(dǎo)熒光毛細(xì)管免疫電泳技術(shù)(CEIA-LIF)檢測(cè)鹽酸克倫特羅的方法0.7ng/ml。在最優(yōu)條件下,自由和異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的鹽酸克倫特羅可在8min內(nèi)分離,遷移時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.72%,峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2.8%。此法具有良好的選擇性,高分離效率和靈敏度。與其他免疫方法比較相比,CEIA-LIF的優(yōu)勢(shì)在于縮短分析時(shí)間,減少試劑消耗,通過(guò)消除洗滌步驟簡(jiǎn)化檢測(cè)方法。適用于尿液和其他生物液體中CLB的檢測(cè)。He等(2007)建立了簡(jiǎn)單,靈敏度高,重現(xiàn)性好的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法檢測(cè)飼料中的萊克多巴胺和鹽酸克倫特羅,檢測(cè)限分別為4μg/kg和2μg/kg。

    快速測(cè)定飼料及肉類(lèi)產(chǎn)品中鹽酸克倫特羅和沙丁胺醇的微型毛細(xì)管電泳法,在最優(yōu)條件下,二者可以60s內(nèi)分離,鹽酸克倫特羅的檢測(cè)限為12mol/L,而沙丁胺醇的檢測(cè)限為0.65nmol/L。鹽酸克倫特羅的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為84.2%和1.3%,而沙丁胺醇的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為81.2%和1.7%。

    通過(guò)將解吸電噴霧電離法與串聯(lián)質(zhì)譜法相結(jié)合建立快速檢測(cè)尿液中鹽酸克倫特羅的方法,檢測(cè)限2.0ng/ml,對(duì)不同的尿樣測(cè)定的回收率均在100%±20%,分析一個(gè)加標(biāo)尿樣時(shí)間在4min以?xún)?nèi)可以完成。除了分析速度快,串聯(lián)質(zhì)譜法還能提供結(jié)構(gòu)信息以對(duì)鹽酸克倫特羅確認(rèn)。

    快速分析克倫特羅,沙丁胺醇,丙卡特羅和非諾特羅的毛細(xì)管電泳法,檢測(cè)時(shí)間約1min,檢測(cè)限0.5~2.0mg/L,線性范圍2.0~30mg/L,相關(guān)系數(shù)>0.996。準(zhǔn)確性、特異性高無(wú)疑是色譜法檢測(cè)瘦肉精的顯著優(yōu)勢(shì),但是由于儀器較為昂貴,其在基層檢測(cè)部門(mén)推廣應(yīng)用還存在一定難度,因此,許多學(xué)者開(kāi)展了基于免疫分析法檢測(cè)瘦肉精的研究。

    2.免疫分析法

    在檢測(cè)瘦肉精的免疫法中,酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)較為成熟,國(guó)內(nèi)外許多公司都開(kāi)發(fā)了基于ELISA 法檢測(cè)瘦肉精的試劑盒,與 HPLC法相比,更為敏感、快速和經(jīng)濟(jì),但重現(xiàn)性與特異性較HPLC法差,因此適用于大批量樣品的快速初篩。

    檢測(cè)豬組織中萊克多巴胺時(shí)間分辨熒光免疫分析法,當(dāng)萊克多巴胺濃度為1~10μgkg-1時(shí),加標(biāo)試驗(yàn)豬肌肉和肝臟中萊克多巴胺的回收率分別為88.2%~110.6%以及102.3%~118.5%。變異系數(shù)分別為7.1%~16.4% 以及14.3%~20.5%。同時(shí),通過(guò)使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同步檢測(cè)樣品,證實(shí)了時(shí)間分辨熒光免疫分析法分析樣品的可行性。

    然而,前述方法還存在樣品前處理時(shí)間較長(zhǎng)、過(guò)程較繁瑣的問(wèn)題,因此,通過(guò)制備鹽酸克倫特羅分子印跡聚合物檢測(cè)鹽酸克倫特羅的方法,利用分子印跡技術(shù)(Molecularly imprinted technology, MIT)制備了對(duì) CLB具有高特異性、高選擇性的 MIPs,進(jìn)而建立了MISPE 程序,并與 ELISA技術(shù)結(jié)合,建立了動(dòng)物組織樣品中CLB的聯(lián)用快速檢測(cè)方法,顯著提高了對(duì)動(dòng)物組織類(lèi)樣品的前處理效率和檢測(cè)靈敏度(0.5μg/kg)。更重要的是,這對(duì)于食品安全領(lǐng)域中其它違禁藥物等小分子物質(zhì) MIPs的制備和應(yīng)用提供了一種有益的嘗試和參考。

    通過(guò)分子印跡聚合物(MIP)的使用檢測(cè)動(dòng)物組織中的痕量萊克多巴胺,該方法對(duì)豬肌肉組織和肝臟中萊克多巴胺的檢測(cè)限為0.20~0.90mg/L,回收率分別為85.2%~110.2%及83.8%~115.2%。納米材料是非常敏感的化學(xué)和生物傳感器,固定有能選擇性結(jié)合靶分子的生物探針的納米傳感器稱(chēng)為納米生物傳感器。它們能和生物芯片、免疫技術(shù)、標(biāo)記技術(shù)等技術(shù)手段結(jié)合,從而使檢測(cè)更加高效、簡(jiǎn)便。

    3.展望

    當(dāng)前,造成鹽酸克倫特羅屢禁不止的原因之一就是國(guó)內(nèi)外檢測(cè) CLB的方法、手段還不完善,還沒(méi)有建立宰前(毛、尿液)監(jiān)測(cè)體系和準(zhǔn)確、迅速、方便、精確的檢測(cè)方法,從成本現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)設(shè)備簡(jiǎn)便基層同步篩選法檢測(cè)(試紙條法、試劑盒法)優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、成本低,適合在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行大量樣品的快速篩查,但結(jié)果受環(huán)境、溫度等因素影響大,容易出現(xiàn)“假陽(yáng)性”,因此試紙條法和試劑盒法檢測(cè)結(jié)果不能直接作為執(zhí)法依據(jù)。確證法檢測(cè)采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀等大型高精尖儀器設(shè)備,優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、準(zhǔn)確性好,結(jié)果可作為執(zhí)法依據(jù),但此類(lèi)儀器設(shè)備非常昂貴,環(huán)境要求極高,檢測(cè)周期較長(zhǎng),不適用于基層和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。因此,國(guó)內(nèi)外檢測(cè)鹽酸克倫特羅等“瘦肉精”藥物通行做法是“先篩選后確證”,以確證法的結(jié)果作為監(jiān)管執(zhí)法的依據(jù),這樣既節(jié)約了成本,又不會(huì)誤判。

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