• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    過(guò)表達(dá)apoA-I對(duì)小鼠非酒精性脂肪性肝炎作用的研究

    2013-07-05 08:06:24馬東林劉文文王宇童
    關(guān)鍵詞:小鼠血清

    劉 偉 馬東林 劉文文 俞 豪 王宇童

    (首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)系,肝臟保護(hù)與再生調(diào)節(jié)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100069)

    非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是以無(wú)過(guò)量飲酒史病人的肝細(xì)胞發(fā) 生 脂 肪 性 變 為 病 理 特 征 的 臨 床 綜 合 癥[1,2]。NALFD的臨床癥狀主要有脂肪變性、肝小葉出現(xiàn)不同程度的炎癥、氣球樣變及纖維化,非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)是其中的一種病理分型。NASH是單純性脂肪肝向肝纖維化、肝硬化進(jìn)展的重要中間環(huán)節(jié)[3]。據(jù)報(bào)道NAFLD在發(fā)達(dá)國(guó)家的發(fā)病率成人約為30%,兒童約為13%。而在肥胖或糖尿病患者中發(fā)病率約為80%。大約10%的NALFD病人會(huì)發(fā)展為NASH,而這些NASH病人中約有20%在10年內(nèi)會(huì)發(fā)展成為肝硬化[4]。由此可見(jiàn),NASH已成為目前備受重視的臨床綜合癥之一。NASH的發(fā)病機(jī)制暫不明確,目前國(guó)際上比較公認(rèn)的機(jī)制為“二次打擊學(xué)說(shuō)”。所謂的“第一次打擊”是指游離脂肪酸(free fatty acid,F(xiàn)FA)和甘油三酯(triglyceride,TG)在肝細(xì)胞內(nèi)大量蓄積,使肝細(xì)胞發(fā)生脂肪性變,影響細(xì)胞的生理和生化功能。這種“第一次打擊”幾乎在所有代謝綜合征患者中出現(xiàn)[5]。變性的肝細(xì)胞在受到外界的刺激,例如氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子刺激等,很容易引發(fā)細(xì)胞凋亡和壞死。這些外界刺激所造成的肝細(xì)胞損傷統(tǒng)稱為“二次打擊”[6]。研究結(jié)果表明,沉積在細(xì)胞內(nèi)的FFA主要集中在線粒體、微粒體和過(guò)氧化酶體等細(xì)胞器,它們不僅作為“第一次打擊”使肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性,而且在它們發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)時(shí),產(chǎn)生的超氧離子及自由基會(huì)對(duì)肝細(xì)胞造成“第二次打擊”[7]。

    眾所周知,膽固醇(cholesterol,Chol)和磷脂等脂質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程主要在肝臟完成。而在經(jīng)典的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中,載脂蛋白A-1(apolipoprotein A-I,apoA-I)起到非常重要的作用。apoA-I是由243個(gè)氨基酸編碼而成的蛋白質(zhì),在肝細(xì)胞合成,分泌到肝細(xì)胞外[8],而 ATP 結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子 (ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)則負(fù)責(zé)將肝細(xì)胞內(nèi)的膽固醇和磷脂接到轉(zhuǎn)運(yùn)到乏脂的apoAI上。這些部分脂質(zhì)化的apoA-I可以在外周細(xì)胞中接收更多通過(guò)ABCA1轉(zhuǎn)運(yùn)的膽固醇和磷脂,形成高密度脂蛋白(HDL),并回到肝臟,經(jīng)過(guò)進(jìn)一步加工代謝,最終以膽汁的方式排出體外[9]。國(guó)內(nèi)外對(duì)于apoA-I的研究主要是在動(dòng)脈粥樣硬化中。例如最近的研究表明,apoA-I的糖基化與二型糖尿病人的動(dòng)脈斑塊進(jìn)展有關(guān)[10]。但是在NASH的領(lǐng)域中,apoA-I的研究卻處于空白。越來(lái)越多的證據(jù)表明,二型糖尿病患者所伴隨高血糖和脂質(zhì)代謝失調(diào)是引發(fā)NASH的重要原因[11];無(wú)論是一型糖尿病患者還是二型糖尿病患者,他們體內(nèi)的FFA都會(huì)增高,并且二型糖尿病患者在代謝失調(diào)的另一個(gè)危險(xiǎn)因素是HDL降低[12]。這些均提示FFA有可能直接參與膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程,從而影響糖尿病病人血脂水平,也有可能在NASH過(guò)程中,對(duì)于FFA也起到類似的作用。所以研究FFA,apoA-I及NASH之間的關(guān)系就有著非常重大的意義。

    研究apoA-I在 NASH 中的治療作用,選擇NASH動(dòng)物模型很重要。目前的動(dòng)物模型主要為三種:①基因敲除或基因突變模型;②營(yíng)養(yǎng)、藥物或毒物誘發(fā)模型;③復(fù)合模型(聯(lián)合應(yīng)用基因模型和營(yíng)養(yǎng)模型)[13]。由于很少的NASH病人是遺傳基因缺陷的先天原因造成,因此飲食引起的NASH動(dòng)物模型和人類的NASH有很大的相關(guān)性。飲食造成的NASH動(dòng)物模型也有很多,各自都有優(yōu)缺點(diǎn):如普通高脂飼料主要的病理特征和NASH病人很相似,但是飼養(yǎng)周期長(zhǎng)[14];蛋氨酸膽堿缺乏飲食(methionine and choline-deficient,MCD)飼養(yǎng)周期短,造???,但是動(dòng)物往往無(wú)肥胖,高膽固醇以及胰島素抵抗等并發(fā)癥[15]。由此可見(jiàn),MCD可作為研究NASH的良好模型。本研究旨在探索在MCD構(gòu)建的NASH小鼠模型中過(guò)量表達(dá)apoA-I對(duì)于肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積的影響。

    材料和方法

    1.材料

    小鼠抗甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)抗體(上海康辰生物有限公司);小鼠抗apoA-I抗體(Cell Signaling Technology公司,美國(guó));辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗小鼠IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司);Western blotting超敏化學(xué)發(fā)光液、游離脂肪酸超敏測(cè)定試劑盒、組織細(xì)胞總膽固醇酶法測(cè)定試劑盒、三酰甘油測(cè)定試劑盒(北京蒂諾奧基因技術(shù)有限公司);對(duì)照腺病毒 (ad-Null)、apoA-I腺病毒(adapoA-I)購(gòu)于北京諾賽基因組研究中心有限公司;6-8周齡C57/BL6雄性小鼠,體重20-25g(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物部);MCD飼料參考國(guó)外文獻(xiàn)配方[16]并由北京華阜康有限公司制作;其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

    2.模型制備及分組

    20只C57/BL6雄性小鼠飼喂普通飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成正常飼料組對(duì)照組(control)、MCD飼料組(MCD)、MCD+對(duì)照腺病毒組(MCD+Null)和 MCD+apoA-I腺病毒組(MCD+apoAI)4組,每組5只。MCD+Null組小鼠以1×108PU/只的劑量通過(guò)股靜脈注射ad-Null,MCD+apoA-I以1×108PU/只的劑量通過(guò)股靜脈注射腺病毒ad-apoA-I,注射病毒24h后,飼喂 MCD飼料。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由攝食、飲水。

    3.取材

    兩周實(shí)驗(yàn)結(jié)束,小鼠禁食水12h后,稱重;4%水合氯醛麻醉;下腔靜脈取血,分離血清。-80℃保存;肝臟稱重后部分液氮凍存,部分4%多聚甲醛固定。

    4.指標(biāo)檢測(cè)

    4.1 一般情況

    觀察各組小鼠行為活動(dòng)、形體狀態(tài)、毛發(fā),飲食及死亡情況,稱取體重和肝臟濕重,計(jì)算肝臟指數(shù)〔肝指數(shù)(%)=肝臟重量(g)/體重(g)×100%〕。

    4.2 肝組織病理學(xué)檢測(cè)

    取小鼠肝組織制作冰凍切片,進(jìn)行油紅O染色;同時(shí)制作肝組織石蠟切片,進(jìn)行H&E染色。在光鏡下分別觀察油紅O染色切片機(jī)H&E染色切片,并對(duì)肝臟脂肪變性和炎癥情況進(jìn)行評(píng)估。病理學(xué)診斷采用由美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院NASH臨床研究網(wǎng)絡(luò)病理委員會(huì)2005年所定的指南[17],根據(jù)其制定的NAFLD活動(dòng)度積分(NAFLD Activity Score,NAS)進(jìn)行評(píng)估。NAS組織學(xué)評(píng)分系統(tǒng)對(duì)14項(xiàng)病理改變,3項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行了半定量評(píng)估計(jì)分:肝脂肪變(按發(fā)生脂肪變性實(shí)質(zhì)細(xì)胞/總細(xì)胞數(shù),<5%、5%-33%、33%-66%、>66%,分別計(jì)0-3分)、小葉內(nèi)炎癥(按無(wú)病灶、<2、2-4、>4,分別計(jì)0-3分)、肝細(xì)胞氣球樣變(按無(wú)、少量氣球樣細(xì)胞、較多/顯著氣球樣變,分別計(jì)0-2分),其中NAS≥5分者可明確NASH的診斷,NAS<3分則可排除NASH,兩者之間者為NASH可能。油紅O及H&E切片使用Leica攝像系統(tǒng)進(jìn)行觀察和攝片。

    4.3 血清學(xué)檢測(cè)

    通過(guò)下腔靜脈取血獲取血清,保存于-80℃冰箱中。采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT),谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST),TG和Chol。

    4.4 肝組織TG,F(xiàn)FA,Chol含量測(cè)定

    精確稱取0.5mg肝組織,按照三酰甘油酶法測(cè)定試劑盒、游離脂肪酸超敏測(cè)定試劑盒以及組織總膽固醇酶法測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)中針對(duì)組織提取脂質(zhì)的方法研磨萃取脂質(zhì),隨后按照說(shuō)明書(shū)操作,得到相應(yīng)的OD值,依標(biāo)準(zhǔn)曲線,分別得到組織內(nèi)三酰甘油、游離脂肪酸以及總膽固醇的濃度,結(jié)果以mmol/L表示。

    5.Western blot

    取0.5mg肝組織,用RIPA裂解液裂解提取總蛋白,用BCA定量法測(cè)定樣品濃度。取適量樣品進(jìn)行SDS-PAGE。樣品在濃縮膠恒壓80V電泳,進(jìn)入分離膠后電壓調(diào)制120V,電泳1h。電泳后將膠中的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上,通過(guò)Bio Rad mini-ProteinⅡ電轉(zhuǎn)系統(tǒng)(美國(guó)Bio Rad公司)進(jìn)行濕轉(zhuǎn),轉(zhuǎn)后PVDF膜經(jīng)5%脫脂奶粉在室溫封閉1h,而后加入相應(yīng)稀釋的一抗,4℃孵育過(guò)夜。TBST緩沖液洗膜3次,每次10min,稀釋后的二抗(1∶5000)室溫孵育1h,TBST緩沖液洗膜3次,每次10min,于暗室內(nèi)化學(xué)發(fā)光液孵育后對(duì)X光片曝光。

    6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用SPSS13.0軟件分析,組間比較采用單因素方差分析;以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1.構(gòu)建的ad-apoA-I腺病毒在肝臟中過(guò)量表達(dá)apoA-I蛋白

    注射ad-Null腺病毒或ad-apoA-I腺病毒2w后提取小鼠肝組織蛋白進(jìn)行apoA-I蛋白 Western blot檢測(cè)顯示,與注射ad-Null腺病毒的小鼠肝臟組織比較,在注射ad-apoA-I腺病毒的小鼠肝臟中可apoA-I蛋白表達(dá)水平明顯增高(圖1)。

    圖1 ad-apoA-I腺病毒注射對(duì)小鼠肝內(nèi)apoA-I蛋白質(zhì)水平影響的 Western blot檢測(cè).*P<0.05Fig.1 Western blot detection of effect of ad-apoA-I virus injection on apoA-I level in the MCD diet-mouse liver.*P<0.05

    2.過(guò)表達(dá)apoA-I減輕由MCD飼喂所引起的小鼠體重下降及小鼠肝臟指數(shù)下降

    飼養(yǎng)過(guò)程中各組小鼠均無(wú)死亡,對(duì)照組小鼠體毛整齊有光澤,體重正常,且穩(wěn)步增長(zhǎng),活動(dòng)度正常,精神良好,進(jìn)食正常,墊料干燥。與對(duì)照組相比,MCD組及MCD+Null組小鼠的體毛凌亂、無(wú)光澤,體重減輕,活動(dòng)減弱,精神萎靡,進(jìn)食量明顯下降,進(jìn)水量上升,墊料潮濕;而MCD+apoA-I組小鼠體活動(dòng)度尚可,精神較好,進(jìn)食量無(wú)明顯下降,進(jìn)水量微有上升,墊料稍微潮濕。比較各組小鼠體重、肝濕重和肝臟指數(shù)可以看出,MCD組比對(duì)照組小鼠體重下降明顯,而 MCD+apoA-I組體重明顯大于 MCD組及MCD+Null組(圖2A);MCD組小鼠肝濕重較對(duì)照組明顯下降,MCD+apoA-I組肝濕重較MCD組和MCD+Null組明顯增加(圖2B);MCD組肝臟指數(shù)較對(duì)照組顯著下降,MCD+apoA-I組肝臟指數(shù)較MCD組和MCD+Null組明顯增加(圖2C)。

    圖2 每組小鼠的體重、肝濕重和肝臟指數(shù)比較。A,體重;B,肝濕重;C,肝臟指數(shù)。*P<0.05。Fig.2 Comparision of body weight,liver wet weight and hepatic index of mice in each group.A,body weight;B,liver wet weight;C,hepatic index.*P<0.05.

    3.過(guò)表達(dá)apoA-I改善由MCD飼喂所引起的小鼠肝臟病理學(xué)變化

    H&E染色顯示,對(duì)照組小鼠肝組織肝竇清晰可見(jiàn),肝索排列整齊,形態(tài)結(jié)構(gòu)均正常(圖3Aa);MCD組小鼠及MCD+Null組肝細(xì)胞內(nèi)充滿大量大小不一的脂肪空泡,肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂呈氣球樣變,多數(shù)細(xì)胞脂肪化發(fā)生,肝小葉內(nèi)多淋巴結(jié)細(xì)胞浸潤(rùn)(圖3Ab和圖3Ac);MCD+apoA-I組小鼠肝組織部分肝細(xì)胞內(nèi)存在脂肪空泡,與MCD組比較脂肪空泡明顯減少,少部分區(qū)域出現(xiàn)肝索結(jié)構(gòu)紊亂,偶見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖3Ad)。

    油紅O染色顯示,對(duì)照組小鼠肝組織未見(jiàn)紅色脂滴(圖3Ae);MCD組及MCD+Null組小鼠肝組織可見(jiàn)大量紅色脂滴,部分融合成片,表現(xiàn)為脂滴彌漫浸潤(rùn)入肝細(xì)胞中,肝小葉內(nèi)含脂滴細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)約為45-60%(圖3Af和圖3Ag);MCD+apoA-I組小鼠肝組織可見(jiàn)局部散在紅色脂滴,成小顆粒狀,肝小葉內(nèi)含脂滴細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)約為0-10%(圖3Ah)。

    肝組織病理評(píng)分顯示,MCD組肝組織評(píng)分較對(duì)照組顯著升高,總分>5分,符合NASH組織學(xué)診斷,表明模型復(fù)制成功;MCD+Null組病理評(píng)分略低于MCD組,而MCD+apoA-I組顯著低于 MCD+Null組(圖3B)。

    圖3 過(guò)表達(dá)apoA-I對(duì)由MCD飼喂所引起的小鼠肝臟病理?yè)p害的影響。A,肝臟病理學(xué)的H&E染色(HE)和油紅O染色(Oil Red);a和e,對(duì)照組;b和f,MCD組;c和g,MCD+Null組;d和h,MCD+apoA-I組;B,病理評(píng)分分析。Fig.3 Effect of apoA-I overexpression on pathological impairment in MCD diet-mouse liver.A,H&E and Oil Red O staining of mouse liver pathology;a and e,control group;b and f,MCD group;c and g,MCD+Null group;d and h,MCD+apoA-I group;B,Histogram of pathological score of liver.

    4.過(guò)表達(dá)apoA-I抑制由MCD飼喂所引起的血清ALT、AST濃度升高和Chol、TG濃度降低

    ALT、AST是反應(yīng)肝臟功能的重要指標(biāo),apoAI作為一種載脂蛋白,對(duì)肝臟脂質(zhì)變化具有重要影響,于是,我們檢測(cè)了血清中的ALT、AST、TG和Chol水平。結(jié)果顯示,血清ALT和AST濃度在MCD組和 MCD+Null組較對(duì)照組顯著上升,在MCD+apoA-I組較對(duì)照組略有升高,但明顯低于MCD組和 MCD+Null組(圖4A和圖4B);血清TG和Chol濃度在MCD組和MCD+Null組較對(duì)照組顯著降低,在 MCD+apoA-I組較 MCD組和MCD+Null組明顯升高(圖4C和圖4D)。

    圖4 過(guò)表達(dá)apoA-I對(duì)由MCD飼喂所引起的血清ALT、AST、Chol和TG水平改變的影響。*P<0.05。Fig.4 Effect of apoA-I overexpression on the change of serum level of ALT,AST,Chol and TG in MCD diet-mouse.*P<0.05.

    5.過(guò)表達(dá)apoA-I抑制由MCD飼喂所引起的肝組織TG、Chol、FFA堆積

    對(duì)小鼠肝組織中脂質(zhì)存留量的檢測(cè)顯示,飼喂MCD飼料后,MCD組小鼠肝組織中的TG、Chol及FFA的含量相對(duì)于對(duì)照組均有不同程度的升高,而過(guò)表達(dá)apoA-I小鼠肝組織中的TG、Chol及FFA的含量相對(duì)于MCD+Null組有顯著降低(圖5)。

    圖5 過(guò)表達(dá)apoA-I對(duì)由MCD飼喂所引起的肝組織TG、Chol、FFA堆積的影響。*P<0.05。Fig.5 Effect of apoA-I overexpression on accumulation of TG,Chol and FFA in MCD diet-mouse liver.*P<0.05.

    討 論

    MCD飼料飼喂誘導(dǎo)的動(dòng)物模型是國(guó)際上公認(rèn)的研究NAFLD中炎癥及纖維化的最好的動(dòng)物模型之一[15]。MCD飼喂小鼠后,小鼠肝組織會(huì)發(fā)生進(jìn)展性脂肪性病變,并進(jìn)一步發(fā)展為纖維化,并伴有無(wú)胰島素抵抗,無(wú)肥胖,無(wú)血脂異常,血清學(xué)TG水平降低,體重下降明顯,肝重及肝指數(shù)下降[18]。本實(shí)驗(yàn)獲得數(shù)據(jù)中,MCD組小鼠體重、肝重及肝指數(shù)均下降,與該模型的描述相符。H&E染色及油紅O染色中獲得的病理評(píng)分及血清學(xué)ALT、AST水平進(jìn)一步說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制了MCD飼料飼喂的小鼠NASH模型。

    我們的實(shí)驗(yàn)表明,apoA-I腺病毒載體注入小鼠體內(nèi)后,可以穩(wěn)定持續(xù)地表達(dá)目的蛋白。由H&E和油紅O結(jié)果可以看出,過(guò)表達(dá)apoA-I可以有效地抑制脂質(zhì)在肝臟中的沉積,從而減輕肝臟的病變,ALT和AST均有不同程度的降低,這證明apoA-I對(duì)小鼠肝臟功能具有一定的保護(hù)作用。apoA-I可以降低肝臟組織中TG,Chol及FFA的含量,與此同時(shí),血清中TG與Chol的含量有所升高。由此表明,apoA-I可以通過(guò)將肝細(xì)胞內(nèi)的過(guò)量脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)出肝臟,進(jìn)入血清中,從而減少肝臟內(nèi)的過(guò)量脂質(zhì)沉積,降低脂質(zhì)對(duì)肝細(xì)胞的“第一次打擊”,這也從根源上減緩了NASH的進(jìn)程,起到有效的治療作用。在肝細(xì)胞的脂質(zhì)堆積中,危害作用最大的是高濃度的FFA。長(zhǎng)期高脂飲食使FFA攝入增加、胰島素抵抗增加、肝細(xì)胞線粒體脂肪酸β氧化減少,以上因素都會(huì)造成肝臟和血清中FFA增加。FFA與NASH的發(fā)生發(fā)展有重要關(guān)系,與疾病的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)[19,20]。而抑制FFA能夠提高肝細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性,降低肝生化酶活性[19,21]。所 以 apoA-I可以通過(guò)其降低FFA濃度的作用,有效地預(yù)防和改善NASH。

    綜上所述,apoA-I在小鼠體內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)后,可以通過(guò)將肝細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)出肝臟,進(jìn)入血清,從而減少脂質(zhì)在肝細(xì)胞內(nèi)的蓄積,減少脂質(zhì)氧化反應(yīng)原料,降低氧化應(yīng)激反應(yīng),最終對(duì)NASH起到防治的作用。而在此過(guò)程中,apoA-I是否對(duì)于脂質(zhì)代謝中的酶(如抗氧化酶SOD、GSH-PX等)具有調(diào)節(jié)作用,仍有待進(jìn)一步研究。

    [1]Marchesini G,Bugianesi E,F(xiàn)orlani G,et al.Nonalcoholic fatty liver,steatohepatitis,and the metabolic syndrome.Hepatology,2003,37(4):917-923

    [2]Kashi MR,Torres DM,Harrison SA.Current and emerging therapies in nonalcoholic fattyliver disease.Semin Liver Dis,2008,28(4):396-406

    [3]Farrell GC,Larter CZ.Nonalcoholic fatty liver disease:from steatosis to cirrhosis.Hepatology,2006,43(2Suppl 1):S99-S112

    [4]Cave M,Deaciuc I,Mendez C,et al.Nonalcoholic fatty liver disease:predisposing factors and the role of nutrition.J Nutr Biochem,2007,18(3):184-195

    [5]Marra F.NASH:are genes blowing the hits?J Hepatol,2004,40(5):853-856

    [6]Romics L Jr,Kodys K,Dolganiuc A,et al.Diverse regulation of NF-κB and peroxisome proliferation-activated receptors in murine nonalcoholic fatty liver.Hepatology,2004,2(40):376-384

    [7]Seki S,Kitada T,Yamada T,et al.In situ detection of lipid peroxidation and oxidative DNA damage in non-alcoholic fatty liver diseases.Hepatology,2002,37(1):56-62

    [8]Nicholls SJ,Gordon A,Johannson J,et al.ApoA-I induction as a potential cardioprotective strategy:rationale for the SUSTAIN and ASSURE studies.Cardiovasc Drugs Ther,2012,26(2):181-187

    [9]Sorci-Thomas MG,Thomas MJ.High density lipoprotein biogenesis,cholesterol efflux,and immune cell function.Arterioscler Thromb Vasc Biol,2012,11(32):2561-2565

    [10]Pu LJ,Lu L,Zhang RY,et al.Glycation of apoprotein A-I is associated with coronary artery plaque progression in type 2diabetic patients.Diabetes Care,2012,Dec.10(Epub ahead of print)

    [11]Hayden JM,Reaven PD.Cardiovascular disease in diabetes mellitus type 2:apotential role for novel cardiovascular risk factors.Curr Opin Lipidol,2000,11(5):519-528

    [12]Sartippour MR,Renier G.Up-regulation of macrophage lipoprotein lipase in patients with type 2diabetes:role of peripheral factors.Diabetes,2000,49(4):597-602

    [13]London RM,George J.Pathogenesis of NASH:animal models.Clin Liver Dis,2007,11(1):55-74

    [14]Adams LA,Angulo P.Treatment of non-alcoholic fatty liver disease.Postgrad Med J,2006,82(967):315-322

    [15]Anstee QM,Goldin RD.Mouse models in non-alcoholic fatty liver disease and steatohepatitis research.Int J Exp Pathol,2006,87(1):1-16

    [16]Lee GS,Yan JS,Ng RK,et al.Polyunsanturated fat in the methinine-choline-deficient diet influences hepatic inflammation but not hepatocellular injury.J Lipid Res,2007,48(8):1885-1896

    [17]Kleiner DE,Brunt EM,Van Natta M,et al.Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease.Hepatology,2005,41(6):1313-1321

    [18]Tiniakos DG,Vos MB,Brunt EM.Nonalcoholic fatty liver disease:pathology and pathogenesis.Annu Rev Pathol,2010,5:145-171

    [19]Kass CE.Mitochondrial involvement in drug-induced hepatic injury.Chem Biol Interact,2006,163(1-2):145-159

    [20]Toye AA,Lippiat JD,Proks P,et al.A genetic and physiological study of impaired glucose homeostasis control in C57BL/6Jmice.Diabetologia,2005,48(4):675-686

    [21]Schattenberg JM,Wang Y,Singh R,et al.Hepatocyte CYP2E1overexpression and steatohepatitis lead to impaired hepatic insulin signaling.J Biol Chem,2005,280(11):9887-9894

    猜你喜歡
    小鼠血清
    血清免疫球蛋白測(cè)定的臨床意義
    中老年保健(2021年3期)2021-08-22 06:50:04
    慢性腎臟病患者血清HIF-1α的表達(dá)及臨床意義
    慢性鼻-鼻竇炎患者血清IgE、IL-5及HMGB1的表達(dá)及其臨床意義
    血清IL-6、APC、CRP在膿毒癥患者中的表達(dá)及臨床意義
    血清HBV前基因組RNA的研究進(jìn)展
    小鼠大腦中的“冬眠開(kāi)關(guān)”
    米小鼠和它的伙伴們
    Avp-iCre轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
    加味四逆湯對(duì)Con A肝損傷小鼠細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用
    血清β32-MG,Cys-C及U-mALB在高血壓腎損傷中的應(yīng)用
    精品久久久久久成人av| 少妇 在线观看| 国产99白浆流出| 亚洲 国产 在线| 一进一出好大好爽视频| 日本免费a在线| 一区二区三区精品91| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一区二区三区国产精品乱码| 国产99白浆流出| 男人舔女人下体高潮全视频| 黄色视频不卡| 成人黄色视频免费在线看| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品第一国产精品| 一边摸一边做爽爽视频免费| 免费少妇av软件| 国产精品九九99| 18美女黄网站色大片免费观看| bbb黄色大片| av天堂久久9| 色婷婷久久久亚洲欧美| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 欧美乱妇无乱码| 国产激情久久老熟女| 9191精品国产免费久久| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品福利永久在线观看| 精品日产1卡2卡| 热re99久久国产66热| 女同久久另类99精品国产91| 日本 av在线| 久久久精品欧美日韩精品| 成人黄色视频免费在线看| 高清av免费在线| 黑人操中国人逼视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 女性被躁到高潮视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产精品久久久av美女十八| videosex国产| 后天国语完整版免费观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 欧美激情极品国产一区二区三区| www.www免费av| 欧美黄色淫秽网站| 91在线观看av| 日韩欧美国产一区二区入口| 成在线人永久免费视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲 欧美一区二区三区| 日韩精品中文字幕看吧| 在线观看一区二区三区| 亚洲七黄色美女视频| 久久这里只有精品19| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 悠悠久久av| a级片在线免费高清观看视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 最新在线观看一区二区三区| 热99国产精品久久久久久7| 精品人妻1区二区| 亚洲中文av在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产1区2区3区精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 老司机午夜十八禁免费视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久久水蜜桃国产精品网| 成人手机av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美不卡视频在线免费观看 | 国产片内射在线| 国产乱人伦免费视频| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲人成电影观看| 国产99久久九九免费精品| 一区二区三区激情视频| 男女床上黄色一级片免费看| 女警被强在线播放| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| www.自偷自拍.com| 日本免费a在线| 大码成人一级视频| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产色视频综合| 久久国产精品人妻蜜桃| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品一区二区三区四区久久 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 一区在线观看完整版| 黄片播放在线免费| 波多野结衣高清无吗| 久久精品影院6| 久久久国产成人免费| 黄色毛片三级朝国网站| 无遮挡黄片免费观看| 极品教师在线免费播放| 婷婷丁香在线五月| 少妇 在线观看| 在线永久观看黄色视频| 久久午夜亚洲精品久久| 色播在线永久视频| 国产精品久久久av美女十八| 夜夜爽天天搞| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美日韩亚洲高清精品| 成在线人永久免费视频| 欧美一级毛片孕妇| 中文亚洲av片在线观看爽| 宅男免费午夜| 精品无人区乱码1区二区| 9191精品国产免费久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久亚洲真实| 久久伊人香网站| 国产精品99久久99久久久不卡| 日本 av在线| 久久精品成人免费网站| 日日爽夜夜爽网站| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 69av精品久久久久久| 欧美中文综合在线视频| 精品国产亚洲在线| 午夜福利在线免费观看网站| 国产亚洲欧美精品永久| 中文亚洲av片在线观看爽| 岛国视频午夜一区免费看| 久久午夜亚洲精品久久| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 最好的美女福利视频网| 亚洲五月天丁香| 国产片内射在线| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品免费一区二区三区在线| 午夜精品在线福利| 欧美乱码精品一区二区三区| 久热这里只有精品99| 久久精品成人免费网站| 久久青草综合色| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲人成电影免费在线| 一本大道久久a久久精品| 午夜福利欧美成人| 99在线视频只有这里精品首页| 窝窝影院91人妻| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 色尼玛亚洲综合影院| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 丰满的人妻完整版| 无人区码免费观看不卡| 亚洲专区字幕在线| 久久中文看片网| 午夜老司机福利片| 日韩国内少妇激情av| 男女下面进入的视频免费午夜 | 免费av毛片视频| 久久九九热精品免费| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲九九香蕉| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产精品亚洲一级av第二区| 五月开心婷婷网| 大码成人一级视频| 999久久久国产精品视频| 香蕉丝袜av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 免费在线观看影片大全网站| 交换朋友夫妻互换小说| 丝袜美足系列| 男人舔女人下体高潮全视频| 人人妻人人澡人人看| 国产1区2区3区精品| 搡老岳熟女国产| 亚洲精华国产精华精| 黄色a级毛片大全视频| 乱人伦中国视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲成人免费av在线播放| 99国产精品一区二区蜜桃av| 在线国产一区二区在线| 亚洲av美国av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲成人免费电影在线观看| а√天堂www在线а√下载| 级片在线观看| 久久人人精品亚洲av| 久久精品91无色码中文字幕| 久久 成人 亚洲| 国产又爽黄色视频| 日本一区二区免费在线视频| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲avbb在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 夜夜爽天天搞| 国产成+人综合+亚洲专区| 18禁国产床啪视频网站| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 一级黄色大片毛片| 精品久久久久久久毛片微露脸| 午夜成年电影在线免费观看| av中文乱码字幕在线| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 人人澡人人妻人| 精品久久久久久,| 久久九九热精品免费| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲激情在线av| 日本wwww免费看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲一区高清亚洲精品| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲av成人一区二区三| 婷婷六月久久综合丁香| 久久久国产成人精品二区 | 中文字幕人妻熟女乱码| 国产精品免费视频内射| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品电影一区二区三区| 他把我摸到了高潮在线观看| 大码成人一级视频| 韩国精品一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区精品| 在线观看免费视频日本深夜| 在线看a的网站| 看免费av毛片| 丰满的人妻完整版| 成人亚洲精品av一区二区 | 91麻豆av在线| 日本五十路高清| 午夜免费激情av| 丝袜美足系列| 日本黄色日本黄色录像| 性欧美人与动物交配| 一区二区三区国产精品乱码| 久久精品国产清高在天天线| 欧美乱妇无乱码| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲片人在线观看| 在线av久久热| 自线自在国产av| 中国美女看黄片| 亚洲欧美一区二区三区久久| 欧美日本中文国产一区发布| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲国产精品sss在线观看 | 国产一区二区三区视频了| 免费观看人在逋| 欧美最黄视频在线播放免费 | 首页视频小说图片口味搜索| 精品电影一区二区在线| 青草久久国产| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 最近最新中文字幕大全电影3 | 美女国产高潮福利片在线看| 叶爱在线成人免费视频播放| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美黄色淫秽网站| av天堂在线播放| 久久九九热精品免费| 手机成人av网站| 免费高清在线观看日韩| 真人做人爱边吃奶动态| www.999成人在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美色视频一区免费| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲av熟女| 丝袜美足系列| 五月开心婷婷网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜影院日韩av| 男人操女人黄网站| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 精品福利永久在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 精品无人区乱码1区二区| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久99一区二区三区| 热re99久久国产66热| 99热只有精品国产| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产又爽黄色视频| 久久久国产成人精品二区 | av网站在线播放免费| 嫩草影视91久久| 午夜精品在线福利| 激情视频va一区二区三区| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 免费在线观看完整版高清| 成人亚洲精品av一区二区 | av天堂久久9| 日本 av在线| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲 国产 在线| 欧美色视频一区免费| 麻豆成人av在线观看| а√天堂www在线а√下载| 在线国产一区二区在线| 美女高潮到喷水免费观看| 9色porny在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品第一国产精品| 午夜福利,免费看| 日本三级黄在线观看| 亚洲国产精品999在线| 日本vs欧美在线观看视频| 18禁观看日本| 一进一出抽搐动态| 成人av一区二区三区在线看| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 两人在一起打扑克的视频| 久久久久久人人人人人| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲精品国产区一区二| 国产精华一区二区三区| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 精品久久久久久久毛片微露脸| 怎么达到女性高潮| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲情色 制服丝袜| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产xxxxx性猛交| www国产在线视频色| 老熟妇仑乱视频hdxx| 午夜精品在线福利| 色哟哟哟哟哟哟| 中亚洲国语对白在线视频| 曰老女人黄片| av网站免费在线观看视频| 757午夜福利合集在线观看| 日韩欧美免费精品| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产精品日韩av在线免费观看 | 色哟哟哟哟哟哟| 嫁个100分男人电影在线观看| 精品福利观看| 久久亚洲真实| 一边摸一边做爽爽视频免费| 视频在线观看一区二区三区| 一区二区三区激情视频| 麻豆国产av国片精品| 老司机靠b影院| 麻豆国产av国片精品| 免费在线观看影片大全网站| bbb黄色大片| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 久久 成人 亚洲| 国产三级黄色录像| 色综合婷婷激情| 久久久久久大精品| 亚洲专区字幕在线| cao死你这个sao货| 国产视频一区二区在线看| www.www免费av| 亚洲成人免费电影在线观看| 久9热在线精品视频| 亚洲成人久久性| 久久久国产成人免费| 少妇粗大呻吟视频| 99久久国产精品久久久| 村上凉子中文字幕在线| 一级片'在线观看视频| 亚洲片人在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 一二三四社区在线视频社区8| 精品国内亚洲2022精品成人| 露出奶头的视频| 黑人操中国人逼视频| 国产精品av久久久久免费| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 长腿黑丝高跟| 丝袜美足系列| 51午夜福利影视在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 午夜久久久在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 9色porny在线观看| 亚洲中文av在线| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久中文字幕人妻熟女| 激情在线观看视频在线高清| www.www免费av| 不卡一级毛片| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产精品久久久av美女十八| 国产精品永久免费网站| 亚洲av美国av| 热re99久久国产66热| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 一级片免费观看大全| 午夜两性在线视频| 欧美日韩一级在线毛片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产区一区二久久| 午夜a级毛片| svipshipincom国产片| 一进一出好大好爽视频| 国产精品电影一区二区三区| 久久中文字幕一级| av免费在线观看网站| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 看免费av毛片| 嫩草影院精品99| 欧美乱色亚洲激情| 国产精品久久视频播放| 妹子高潮喷水视频| 99久久国产精品久久久| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 88av欧美| 黑人操中国人逼视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 一级黄色大片毛片| 久99久视频精品免费| 最好的美女福利视频网| 日韩欧美在线二视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久精品人人爽人人爽视色| 老司机深夜福利视频在线观看| 电影成人av| 久久久久久免费高清国产稀缺| 成熟少妇高潮喷水视频| 18禁观看日本| 大码成人一级视频| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 日本a在线网址| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲五月婷婷丁香| ponron亚洲| 成人国语在线视频| 亚洲激情在线av| 日日夜夜操网爽| 日韩欧美免费精品| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 69精品国产乱码久久久| 91成人精品电影| 亚洲精品国产一区二区精华液| 18禁国产床啪视频网站| 中文字幕高清在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 黄色毛片三级朝国网站| 午夜亚洲福利在线播放| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日本一区二区免费在线视频| 国产xxxxx性猛交| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲伊人色综图| 亚洲欧美精品综合久久99| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产成人精品无人区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 成人精品一区二区免费| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 免费在线观看黄色视频的| 丁香欧美五月| 精品久久久久久久久久免费视频 | 欧美最黄视频在线播放免费 | 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲av熟女| 妹子高潮喷水视频| 亚洲免费av在线视频| 在线永久观看黄色视频| 中文字幕高清在线视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 999精品在线视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 夜夜爽天天搞| 欧美一区二区精品小视频在线| 大码成人一级视频| 国产成年人精品一区二区 | 又大又爽又粗| 亚洲精品在线观看二区| 夫妻午夜视频| 国产精品九九99| 日韩精品中文字幕看吧| 麻豆国产av国片精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久午夜综合久久蜜桃| 日韩视频一区二区在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 一级毛片女人18水好多| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲三区欧美一区| 最新在线观看一区二区三区| 欧美激情 高清一区二区三区| 黑人操中国人逼视频| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 日韩欧美在线二视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美性长视频在线观看| 欧美色视频一区免费| 搡老岳熟女国产| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 天堂中文最新版在线下载| 国产99白浆流出| 国产单亲对白刺激| 国产精品二区激情视频| 不卡av一区二区三区| 制服诱惑二区| 99re在线观看精品视频| 午夜免费鲁丝| 国产成人精品无人区| 午夜视频精品福利| 欧美另类亚洲清纯唯美| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲人成电影免费在线| 日本 av在线| 精品高清国产在线一区| 一级片免费观看大全| 欧美+亚洲+日韩+国产| 成人18禁在线播放| 嫩草影院精品99| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 精品乱码久久久久久99久播| 香蕉久久夜色| 国产精品偷伦视频观看了| 色在线成人网| 亚洲精品久久午夜乱码| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 视频在线观看一区二区三区| 日本五十路高清| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲成人久久性| 欧美中文综合在线视频| 亚洲av电影在线进入| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲av美国av| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 视频区图区小说| 他把我摸到了高潮在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美乱妇无乱码| 亚洲国产看品久久| 国产精品野战在线观看 | 91字幕亚洲| 成人18禁在线播放| 丝袜美腿诱惑在线| 老汉色∧v一级毛片| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 在线观看日韩欧美| 国产精品久久久av美女十八| 国产激情欧美一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 69av精品久久久久久| 韩国精品一区二区三区| 久久国产精品人妻蜜桃| 满18在线观看网站| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品一区二区在线不卡| 男女之事视频高清在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 国产高清videossex| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产高清视频在线播放一区| 高清在线国产一区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美日韩亚洲高清精品| 黄色丝袜av网址大全| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲 国产 在线| 欧美久久黑人一区二区| 日韩av在线大香蕉| 男女午夜视频在线观看| 脱女人内裤的视频| 久久精品成人免费网站| 在线观看一区二区三区激情| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲在线自拍视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲少妇的诱惑av| 99精品在免费线老司机午夜|