454例肝酶水平與血清IL—22水平的相關(guān)性分析

萬(wàn)靜　朱敏　林丹紅　史虹莉

摘要 目的：初步探討血肝酶水平與血清IL-22水平的相關(guān)情況。方法：對(duì)象為華山醫(yī)院體檢者454名，進(jìn)行全面檢查，采用ELISA方法檢測(cè)IL-22水平，采用Spearman等級(jí)分析IL-22水平和肝酶的關(guān)系。結(jié)果：IL-22水平與谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶明顯相關(guān)（相關(guān)系數(shù)分別為-0.122，-0.123及-0.127，P值分別為0.020，0.019及0.015）。結(jié)論：血清IL-22水平與血肝酶水平顯著負(fù)相關(guān)，提示IL-22可能與肝臟疾病相關(guān)。

關(guān)鍵詞 肝酶IL-22 肝臟疾病

中圖分類(lèi)號(hào)：R392

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C

文章編號(hào)：1006-1533（2013）02-0022-04

近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)IL-22作為新型的炎癥細(xì)胞因子在肝臟疾病中發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用。IL-22受體僅能在肝細(xì)胞中檢測(cè)到，IL-22在肝臟疾病中的主要功能在于促進(jìn)肝細(xì)胞存活，刺激肝細(xì)胞增殖和刺激肝細(xì)胞產(chǎn)生急性反應(yīng)蛋白。本研究通過(guò)對(duì)454例成人體檢者外周血IL-22水平的檢測(cè)及其與肝酶相關(guān)性研究，探討IL-22的變化與肝臟疾病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1研究設(shè)計(jì)及對(duì)象

入選者為2008年10月-2009年9月在華山醫(yī)院體檢中心進(jìn)行體檢者共454例，其中男292例，女162例，平均年齡（45.0±11.4）歲。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本收集

于體檢日清晨從研究對(duì)象前臂周?chē)o脈采取空腹血標(biāo)本，標(biāo)本置入肝素鈉抗凝管內(nèi)，以3000rpm高速離心后，取上清液置于-80℃冰箱保存、待測(cè)。

病史及體檢 問(wèn)卷表格明確年齡、性別、吸煙史、飲酒史。測(cè)量體重（Kg），身高（cm），腰圍（cm），血壓（mmHg），體重指數(shù)（BMI）為體重（k曲除以身高（m）的平方。

1.2.2實(shí)驗(yàn)室及輔助檢查

采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）及γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（gamma-glutamyl transferase，GGT）（合富生化科技貿(mào)易有限公司），連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）（羅氏診斷有限公司），釩酸鹽氧化法測(cè)定總膽紅素（TBIL）（和光純藥工業(yè)株式會(huì)社）。采用尿酸酶-Trinder法測(cè)定血尿酸（上?？迫A東菱診斷用品有限公司）。采用肌氨酸氧化酶法測(cè)定血肌酐（上海科華東菱診斷用品有限公司），紫外-GLDH法測(cè)定血尿酸氮（上?？迫A東菱診斷用品有限公司）?？崭寡遣捎闷咸烟茄趸阜ǎ℅OX0560，上海景源醫(yī)療器械有限公司），同時(shí)測(cè)定血總膽固醇（CHOD-PAP法，CHO0560，上海景源醫(yī)療器械有限公司）、血甘油三脂（GPO-PAP法，TGP0560，上海景源醫(yī)療器械有限公司）、高密度脂蛋白（IRC法，21200AMZ00404000，Daiichi Pure Chemicals Co.Ltd）。以上所有生化檢查均在日立7600-020自動(dòng)分析儀上完成。

1.2.3血漿IL-22水平檢測(cè)

采用BioLegend公司生產(chǎn)的Legend Max Human IL-22 ELISA Kit檢測(cè)人血清中IL-22含量。該檢測(cè)方法采用雙抗體夾心ELISA法，加入酶聯(lián)抗人IL-22多克隆抗體，樣本和標(biāo)準(zhǔn)品中的IL-22與多抗結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，洗去游離的酶聯(lián)抗體；加入顯色底物；加入終止液終止反應(yīng)，檢測(cè)吸光度。采用四參數(shù)方程擬合IL-22標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣本OD值求出標(biāo)本中IL-22濃度。

1.3肝功能肝酶指標(biāo)異常標(biāo)準(zhǔn)

參照肝功能檢查正常參考值，本研究分析中將ALT、AST、GGT和ALP的正常范圍分別定義為<50U/L、<30U/L、3-45U/L和35-104U/L，TBIL的正常范圍定義為3.4～20.4μmol/L。

1.4統(tǒng)計(jì)分析

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)描述采用x±s或中位數(shù)表示，計(jì)量資料采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或非參數(shù)統(tǒng)計(jì)分析，IL-22與肝酶相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法分析。

2 結(jié)果

2.1臨床特征

研究顯示男性和女性的年齡和收縮壓之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在身高、體重、體重指數(shù)、舒張壓、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、空腹血糖、ALT、AST、ALP，TBIL間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。然而兩組在IL-22水平上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

2.2IL-22與肝酶相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)分析結(jié)果，總體檢測(cè)的IL-22水平與ALT、AST及GGT水平明顯相關(guān)（相關(guān)系數(shù)分別為-0.122，-0.123及-0.127，P值分別為0.020，0.019及0.015），但未顯示與ALP（相關(guān)系數(shù)：-0.060，P=0.257）和TBIL相關(guān)（相關(guān)系數(shù)：-0.014，P=0.784）。

根據(jù)肝酶異常定義，ALT、AST、GGT及ALP異常人數(shù)分別為32例、57例、54例及15例。IL-22水平與肝酶（ALT、AST及GGT）異常顯著相關(guān)（相關(guān)系數(shù)分別為-0.129，-0.142及-0.114，P值分別為0.014，0.007及0.029），但也未顯示與ALP（相關(guān)系數(shù)：-0.031，P=0.557）和TBIL相關(guān)（相關(guān)系數(shù)：-0.038，P=0.609）。

3 討論

IL-22是2000年才發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子。IL-22與IL-10二級(jí)結(jié)構(gòu)非常相似，最初被稱(chēng)為IL-10相關(guān)T細(xì)胞衍生誘導(dǎo)因子。IL-22雖然由免疫細(xì)胞產(chǎn)生，但并不作用于這些細(xì)胞，而是以皮膚，胰腺，肝臟等組織細(xì)胞為主要靶細(xì)胞，調(diào)節(jié)這些組織細(xì)胞的功能。

本研究通過(guò)檢測(cè)454例體檢者肝酶與IL-22的含量，相關(guān)分析顯示，ALT、AST與GGT與IL-22都呈負(fù)相關(guān)，也就是IL-22升高時(shí)，3個(gè)肝酶水平下降，表示IL-22可能是肝臟的保護(hù)作用。本組體檢者肝功能異常比例較低（<10%），本研究提示即使在肝功能異常比例較低情況下IL-22與肝酶的ALT、AST及GGT也明顯負(fù)相關(guān)，支持其可能存在的肝細(xì)胞保護(hù)作用。

近年來(lái)研究顯示IL-22可通過(guò)調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝，對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肝壞死起到保護(hù)作用，可能對(duì)脂肪性肝炎的防治提供新思路。

此外，對(duì)于刀豆蛋白A（ConA）及四氯化碳（CCL4）誘導(dǎo)肝炎中也發(fā)現(xiàn)其保護(hù)作用，ConA能與T細(xì)胞表面受體結(jié)合并引起T細(xì)胞活化，從而導(dǎo)致肝臟炎癥，其主要表現(xiàn)為轉(zhuǎn)氨酶的升高以及嚴(yán)重的肝臟病理?yè)p傷，可以很好地模擬由免疫因素介導(dǎo)的肝臟疾病。ConA誘導(dǎo)肝炎時(shí)，保護(hù)性細(xì)胞因子和促炎性細(xì)胞因子之間的平衡決定了炎癥嚴(yán)重程度，TNF-α和IL-4促進(jìn)肝臟炎癥，而IL-6、IL-10和IL-22則減輕肝臟炎癥。大量研究證明IL-22對(duì)ConA誘導(dǎo)的肝炎起保護(hù)作用。在CC14誘導(dǎo)的肝炎中，IL-22也有相似的結(jié)果。Pan等通過(guò)液壓轉(zhuǎn)基因技術(shù)在小鼠肝內(nèi)高表達(dá)IL-22，高表達(dá)的IL-22大量激活肝內(nèi)STAT3，從而顯著上調(diào)抗凋亡蛋白的表達(dá)（包括Bcl-xL、Bcl-2和Mcl-1）。給這些高表達(dá)IL-22的小鼠注射ConA后并沒(méi)有誘發(fā)明顯的肝炎。在其肝內(nèi)僅觀察到了少量的點(diǎn)狀壞死，而對(duì)照組小鼠肝內(nèi)能觀察到大量片狀壞死。以上證據(jù)表明：高濃度的IL-22能顯著改善ConA引起的肝細(xì)胞損傷、壞死和凋亡。其作用機(jī)制可能是：IL-22通過(guò)JAK-STAT途徑激活STAT3，STAT3的激活導(dǎo)致抗氧化蛋白、急性時(shí)相反應(yīng)蛋白、促有絲分裂蛋白和抗凋亡蛋白的上調(diào)，從而起到保護(hù)肝臟的作用。

IL-22在酒精導(dǎo)致的肝病中也起保護(hù)性作用，Ki等通過(guò)對(duì)小鼠的酒精喂養(yǎng)導(dǎo)致脂肪肝和肝損傷，注射含IL-22基因的腺病毒能阻止酒精誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性，而清除STAT3能消除IL-22對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用。

然而IL-22在慢性乙型肝炎和肝癌中的作用還不太明確，有研究認(rèn)為炎癥刺激導(dǎo)致IL-22的大量產(chǎn)生，升高的IL-22能促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和提高了肝細(xì)胞的存活率，在短期內(nèi)起著抗炎和保護(hù)肝細(xì)胞的作用，但在IL-22的期刺激下，長(zhǎng)可能會(huì)誘導(dǎo)肝炎向肝癌的轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致肝癌形成。

盡管本研究?jī)H在體檢人群中對(duì)肝酶指標(biāo)和IL-22水平進(jìn)行了初步相關(guān)性分析，不能推測(cè)因果關(guān)系，并且體檢人群非最佳人群，但是畢竟在較大樣本量完成了相關(guān)性分析，研究提示在肝功能異常較低時(shí)同樣存在IL-22水平和肝酶的負(fù)相關(guān)，提示其可能IL-22和肝病相關(guān)。