魚腥草穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中揮發(fā)油變化情況的研究

何俊婷王曉博曹愛蘭* 翟 帆惠選柱王景峰

（1 陜西新藥技術(shù)開發(fā)中心，陜西 西安 710075；2 陜西中藥研究所，陜西 西安 710075；3 陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)山海丹制藥有限責(zé)任公司，陜西 西安 710075）

魚腥草穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中揮發(fā)油變化情況的研究

何俊婷1王曉博1曹愛蘭2* 翟 帆1惠選柱3王景峰3

（1 陜西新藥技術(shù)開發(fā)中心，陜西 西安 710075；2 陜西中藥研究所，陜西 西安 710075；3 陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)山海丹制藥有限責(zé)任公司，陜西 西安 710075）

目的 研究魚腥草藥材中揮發(fā)油量和甲基正壬酮含量隨時(shí)間變化的規(guī)律，為確定魚腥草適宜的貯藏條件及期限提供科學(xué)依據(jù)。方法 采用加速和長期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)考察魚腥草的穩(wěn)定性，測定不同貯藏時(shí)期魚腥草中揮發(fā)油含量，并采用氣相色譜法測定魚腥草中甲基正壬酮的含量。結(jié)果 經(jīng)加速試驗(yàn)，魚腥草揮發(fā)油含量降幅低于3.85%，甲基正壬酮含量下降4.06%～4.76%。經(jīng)長期穩(wěn)定性試驗(yàn)，甲基正壬酮含量下降3.25%～4.76%，揮發(fā)油下降1.20%～1.28%。結(jié)論 經(jīng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，魚腥草中揮發(fā)油量和甲基正壬酮含量在考察期內(nèi)均略有降低，但未發(fā)生顯著變化。

魚腥草；穩(wěn)定性；揮發(fā)油；甲基正壬酮

魚腥草是三白草科植物蕺菜 Houttuynia cordata Thunb.的新鮮全草或干燥地上部分。具有清熱解毒，排膿消癰，利尿通淋功能[1]。揮發(fā)油是魚腥草的有效成分之一[2]，通過水蒸氣蒸餾得到的揮發(fā)油為藥效成分的制劑有魚腥草注射液、魚金注射液等，廣泛應(yīng)用于消炎抗菌。因揮發(fā)油成分的不穩(wěn)定性，藥材的采收、加工、貯藏對其含量影響較大。而藥材是藥品的源頭，原料藥質(zhì)量直接保證終產(chǎn)品的質(zhì)量，從而影響藥品的安全性。魚腥草藥材的揮發(fā)油成分的控制研究較少，注射液生產(chǎn)企業(yè)使用該原料時(shí)缺乏原料選擇及貯藏依據(jù)，給產(chǎn)品埋下了安全隱患。2006年，國家藥品不良反應(yīng)中心因魚腥草類制劑的不良反應(yīng)問題，暫停了7個(gè)魚腥草類制劑的使用，并停止受理和審批其各類制劑的注冊申請。為恢復(fù)該類產(chǎn)品的生產(chǎn)[3]，保證魚腥草類注射劑安全、可靠、穩(wěn)定、可控，企業(yè)做了大量的研究工作，首要任務(wù)就是控制原料的質(zhì)量。筆者通過氣相色譜法檢測甲基正壬酮含量[4]，將其作為指標(biāo)性成分，對魚腥草藥材加工及儲藏過程中揮發(fā)油的穩(wěn)定性進(jìn)行考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子分析天平（AG-135，德國梅特勒）；島津GC-17A氣相色譜儀；PEG毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；水分測定管，揮發(fā)油提取器，冷凝裝置，圓底燒瓶（西安玻璃儀器廠）；WD-A藥物穩(wěn)定性檢查儀（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）。

1.2 試藥

干魚腥草（三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.干燥地上部分，陜西漢中城固縣）；甲基正壬酮（111640-201005，中國藥品生物制品檢定所）；乙酸乙酯（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）

2 方法與結(jié)果

2.1 魚腥草藥材的采收與干燥

魚腥草2009年9月5日采自陜西漢中城固縣，晴天采收，用刀具割取地上部分植株或用手直接拔取地上部分。采收后的藥材除去雜質(zhì),抖凈泥沙，清洗。干燥條件為室溫條件下（溫度為25℃左右）自然干燥。

2.2 揮發(fā)油量測定

取干魚腥草約300g置圓底燒瓶中，加8倍藥材量的水，搖勻。連接揮發(fā)油測定裝置，回流提取6h，按規(guī)定[6]方法操作讀取揮發(fā)油量。

2.3 甲基正壬酮含量測定

2.3.1 樣品處理

精密稱取干魚腥草25g，置圓底燒瓶中，加水250mL，連接揮發(fā)油測定器，自測定器上端加水使充滿刻度部分，再加乙酸乙酯約3mL，連接回流冷凝管。加熱回流2h，停止加熱，放置片刻，分取乙酸乙酯層，測定器再用乙酸乙酯洗滌3次，每次1mL，合并洗滌液，定量轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，并加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。

2.3.2 對照品溶液制備

精密稱定甲基正壬酮對照品108.6mg，置于100mL容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，制成每1mL中含1.088mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3.3 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以聚乙二醇（PEG）—20M為固定液，涂布濃度為10%；柱溫（120±5）℃；進(jìn)樣口溫度230℃；檢測器溫度230℃；分流比為5∶1；程序升溫：初始120℃，保持15min，以每分鐘5℃升至170℃，保持10min；進(jìn)樣量為4μL；理論板數(shù)按甲基正壬酮峰計(jì)算，應(yīng)不低于1000。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液，配置成甲基正壬酮濃度分別為0.034，0.068，0.136，0.272，0.544，1.088mg/mL的對照品梯度溶液，進(jìn)樣，以色譜峰面積和濃度進(jìn)行分析。表明，甲基正壬酮在濃度為0.034～1.088mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，線性回歸方程為：Y=414.99X-32.12，r=0.9998。

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一對照品溶液，按2.3.3色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，通過峰面積計(jì)算，得到甲基正壬酮峰面積的RSD為0.94%，表明所用儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液一份，按2.3.3方法，分別于0，2，4，6，8，10，12，24h進(jìn)樣，測得峰面積計(jì)算RSD為1.38%，表明該樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)測

精密取同一批樣品（批號100901）5份，按2.3.1方法制備供試品，按2.3.3測定，測定甲基正壬酮平均含量為105μg/g，RSD為1.86%。

2.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知甲基正壬酮含量的同一批供試品溶液（批號：100901）5份，分別加入對照品適量，混合均勻，測定其中甲基正壬酮峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果甲基正壬酮平均加樣回收率為97.82%，RSD為1.84%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取三個(gè)批號（100901、100902、100903）干魚腥草藥材對其進(jìn)行加速和長期穩(wěn)定考察[5]。

2.5.1 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)

將魚腥草藥材在40℃±2℃，相對濕度75%±5%條件下儲藏6個(gè)月，濕度調(diào)節(jié)選擇NaCl飽和溶液（15.5～60℃，RH75%±1%）。在試驗(yàn)期間第0、1、2、3、6個(gè)月末取樣檢測。

經(jīng)6個(gè)月加速試驗(yàn)后，魚腥草外觀無變化，揮發(fā)油含量有略微降低（表1），變化率低于3.85%。測定魚腥草中甲基正壬酮含量（表2），發(fā)現(xiàn)其隨著貯藏時(shí)間延長，含量降低，降幅為4.42%～4.76%。

表1 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)魚腥草中揮發(fā)油含量（%）

表2 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)魚腥草中甲基正壬酮含量（μg/g）

2.5.2 長期穩(wěn)定性研究

取三個(gè)批號（100901、100902、100903）的干魚腥草貯存在溫濕度控制為25℃±2℃，RH 60%±10%環(huán)境下，分別與0、3、6、9、12、18個(gè)月取樣測定。經(jīng)18個(gè)月長期穩(wěn)定性試驗(yàn)，測定各階段魚腥草中甲基正壬酮含量（表3），結(jié)果顯示，三個(gè)批次樣品含量均有一定幅度的降低，最大降幅為4.76%。魚腥草的揮發(fā)油量有較小幅度的降低（表4），變化率低于1.28%。貯藏期限內(nèi)藥材外觀無蟲蛀、無霉變。

4 討 論

本文針對魚腥草存儲期間揮發(fā)油的變化進(jìn)行考察。三個(gè)批次魚腥草藥材在40℃±2℃，相對濕度75%±5%條件下儲藏6個(gè)月，其揮發(fā)油和甲基正壬酮含量均發(fā)生降低，但未發(fā)生顯著變化，100901批甲基正壬酮降幅最大，為4.76%（＜5%），說明魚腥草中的揮發(fā)油對超常環(huán)境條件相對較為穩(wěn)定。

表3 長期穩(wěn)定性試驗(yàn)中甲基正壬酮含量（μg/g）

表4 長期穩(wěn)定性試驗(yàn)揮發(fā)油含量（%）

長期穩(wěn)定性試驗(yàn)，各檢驗(yàn)期內(nèi)揮發(fā)油量變化率為1.20%～1.28%，甲基正壬酮含量變化率3.25%～4.76%，二者均＜5%。對比各檢測月的氣相色譜圖，圖譜均相似度較高，圖譜未見隨月份變化發(fā)生明顯變化。說明魚腥草在2年有效期內(nèi)常規(guī)條件下貯藏較為穩(wěn)定。

雖然魚腥草中揮發(fā)油量和甲基正壬酮在考察期內(nèi)未發(fā)生顯著變化，但因其含量均隨時(shí)間有所降低，如將魚腥草揮發(fā)油為主要藥效成分的制劑，為防止制劑因原料中有效成分含量的改變而不穩(wěn)定，建議將其儲存在陰涼、干燥處，貯藏期限不宜過長，如經(jīng)長期儲藏過的原料投料前須進(jìn)行檢驗(yàn)。

[1] 中國藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:208.

[2] 顧靜蓉,馮麗麗,羅建偉,等.魚腥草的藥理作用及臨床應(yīng)用新進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2006,8(4):121.

[3] 國家食品藥品監(jiān)督管理局就魚腥草注射液等7個(gè)注射液作出進(jìn)一步?jīng)Q定:分步驟分階段有條件的恢復(fù)使用[J].中國食品藥品監(jiān)管,2006(10):7.

[4] 彭家敏,李可鵬,晁若冰.魚腥草注射液中3種主要揮發(fā)性成分的測定[J].華西藥學(xué)雜志,2009,24(4):396-397.

[5] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[Z].國食藥監(jiān)注[2006]678號.

[6] 中國藥典委員會.中華人民共和國藥典附錄ⅩD(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄63.

R932

B

1671-8194（2013）26-0062-02

陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目(編號：2011KTCG03-03)

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