miRNA-196b過(guò)表達(dá)對(duì)K562細(xì)胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2表達(dá)的影響

尹虹 劉玥 鄭文嶺 宋艷斌 馬文麗

南方醫(yī)科大學(xué)基因工程研究所，廣東 廣州 510515

miRNA-196b過(guò)表達(dá)對(duì)K562細(xì)胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2表達(dá)的影響

尹虹 劉玥 鄭文嶺 宋艷斌 馬文麗*

南方醫(yī)科大學(xué)基因工程研究所，廣東 廣州 510515

背景與目的：BCR-ABL融合基因是慢性粒細(xì)胞白血病發(fā)病的分子病理基礎(chǔ)，也是診斷慢性粒細(xì)胞白血病、觀察療效、評(píng)估預(yù)后等的有效指標(biāo)。miRNA-196b在急性粒細(xì)胞白血病中低表達(dá)并對(duì)疾病的發(fā)展起主要作用。在慢性粒細(xì)胞白血病中miRNA-196b的靶基因?yàn)锽CR-ABL，miRNA-196b過(guò)表達(dá)抑制BCR-ABL融合基因的表達(dá)。生存素(survivin)是BCR-ABL的一個(gè)下游基因，已在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)survivin與環(huán)氧化酶-2(Cox-2)協(xié)同調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖凋亡。本研究旨在探討miRNA-196b過(guò)表達(dá)對(duì)K562細(xì)胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2 mRNA表達(dá)的影響。方法：實(shí)驗(yàn)分為K562-196b組、空載K562-pLV組與K562組，采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖；采用AnnexinⅤ-PE檢測(cè)細(xì)胞凋亡；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)Cox-2、survivin mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果：miRNA-196b過(guò)表達(dá)可以明顯抑制K562細(xì)胞增殖；K562-196b組細(xì)胞凋亡率顯著高于K562組(P＜0.05)；miRNA-196b組中survivin基因顯著低表達(dá)(P＜0.05)，Cox-2基因中無(wú)明顯變化(P＞0.05)。結(jié)論：miRNA-196b對(duì)K562細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡有顯著作用；miRNA-196b過(guò)表達(dá)可下調(diào)survivin基因的表達(dá)，為miRNA-196b作為慢性粒細(xì)胞性白血病的治療靶點(diǎn)提供了依據(jù)。

miRNA-196b；K562細(xì)胞；細(xì)胞增殖；細(xì)胞凋亡

BCR-ABL融合基因所編碼的具有絡(luò)氨酸激酶活性的P210融合蛋白在慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelogenous leukemia，CML)的發(fā)生中起著重要作用［1］，是研究治療CML的關(guān)鍵所在。伊馬替尼作為治療CML的一線用藥，其作用機(jī)制就是通過(guò)抑制BCR-ABL蛋白的自身磷酸化和底物磷酸化，使BCR-ABL陽(yáng)性細(xì)胞的增生受到抑制或凋亡。但隨著越來(lái)越多的耐藥情況出現(xiàn)，需要尋找治療CML的新方法或補(bǔ)充途徑。

在我們之前的研究中，已經(jīng)驗(yàn)證了miRNA-196b的靶基因?yàn)锽CR-ABL，miRNA-196b過(guò)表達(dá)可下調(diào)BCR-ABL的表達(dá)。又有研究表明miRNA-196b在急性粒細(xì)胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)中低表達(dá)［2］，并且對(duì)混合淋巴細(xì)胞型白血病的發(fā)展起重要作用［3］。因此，推測(cè)miRNA-196b在CML的治療中也有著重要的意義。

生存素(survivin)和環(huán)氧化酶-2(Cox-2)這兩種細(xì)胞因子均可抑制細(xì)胞凋亡，并在腫瘤的形成中發(fā)揮重要作用。Survivin作為BCR-ABL的一個(gè)下游基因，以survivin為分子靶點(diǎn)的聯(lián)合治療策略是近來(lái)CML治療的研究熱點(diǎn)。Cox-2不僅能夠促進(jìn)細(xì)胞黏附，抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生，促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移，還發(fā)現(xiàn)Cox-2高表達(dá)與白血病進(jìn)展及預(yù)后不良有密切關(guān)系。miRNA-196b過(guò)表達(dá)抑制BCR-ABL融合基因，是否對(duì)survivin、Cox-2 mRNA的表達(dá)也有影響，值得深入研究。本實(shí)驗(yàn)用慢病毒介導(dǎo)的miRNA-196b處理K562細(xì)胞，檢測(cè)miRNA-196b對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡的影響，以及Cox-2、survivin癌癥因子表達(dá)的變化，從分子水平探討針對(duì)BCR-ABL的CML的治療。

1 材料和方法

1.1 菌株、細(xì)胞及其培養(yǎng)

K562細(xì)胞293T細(xì)胞和大腸桿菌DH5α為本實(shí)驗(yàn)室保存［4］。K562細(xì)胞接種于含體積分?jǐn)?shù)10%的胎牛血清，青霉素、鏈霉素各100 U/mL的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱，飽和濕度下培養(yǎng)。每隔2～3 d換液傳代。

1.2 主要試劑

慢病毒載體pLVTHM以及包裝質(zhì)粒均為本實(shí)驗(yàn)室保存［5］；CCK-8試劑盒購(gòu)于日本同仁株社；AnnexinⅤ-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司；限制性內(nèi)切酶、MMLV-RT反轉(zhuǎn)錄試劑盒、DNA連接酶、DNA聚合酶和轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000購(gòu)自Invitrogen公司；瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒、PCR產(chǎn)物純化試劑盒和質(zhì)粒提取試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司；實(shí)驗(yàn)所用引物由上海英俊公司合成。

1.3 慢病毒介導(dǎo)的miRNA-196b穩(wěn)定表達(dá)K562細(xì)胞株的構(gòu)建

以人外周血淋巴細(xì)胞cDNA文庫(kù)為模板，通過(guò)采用PCR擴(kuò)增長(zhǎng)度為284 bp 的pre-miR-196b擴(kuò)增片段，PCR產(chǎn)物切膠回收后再進(jìn)行MluⅠ和ClaⅠ雙酶切，與載體pLVTHM連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，在Amp抗性篩選平板上挑取單菌落，并培養(yǎng)鑒定。構(gòu)建成功的重組載體命名為pLVTHM-miR-196b。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞制備慢病毒，病毒滴度測(cè)定后，將K562細(xì)胞接種到6孔板中，24 h后感染病毒，72 h用流式細(xì)胞儀分選GFP陽(yáng)性的細(xì)胞，擴(kuò)大培養(yǎng)，構(gòu)建K562-196b穩(wěn)定細(xì)胞株，同時(shí)設(shè)立空載體(pLVTHM)感染的K562細(xì)胞株為對(duì)照組，命名為K562-pLV細(xì)胞株。具體方法參照文獻(xiàn)［5］。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)

細(xì)胞總RNA的提取過(guò)程參見(jiàn)文獻(xiàn)［6］，逆轉(zhuǎn)錄參照invitrogen的M-MLV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到cDNA，進(jìn)行下一步反應(yīng)。按照ABI 7500 Real-time儀器說(shuō)明書(shū)，每一樣本和基因同時(shí)做3個(gè)復(fù)孔，輸出數(shù)據(jù)為復(fù)孔Ct值的平均值，統(tǒng)計(jì)時(shí)采用2－ddCt進(jìn)行比較。引物見(jiàn)表1。反應(yīng)體系為SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(2×) 10 μL，ROX 0.4 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.4 μL，模板cDNA 2 μL，ddH2O 6.8 μL。反應(yīng)條件為95 ℃ 5 min；94 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，45個(gè)循環(huán)；72 ℃ 30 s；融解曲線。

表 1 RT-qPCR所使用的引物Tab. 1 Primers used for RT-qPCR

1.7 Western blot檢測(cè)BCR-ABL蛋白

裂解細(xì)胞，提取總蛋白，根據(jù)申能博彩BCA法測(cè)定蛋白濃度試劑盒對(duì)蛋白進(jìn)行定量后，進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，以BCR-ABL和β-actin為一抗(1∶500稀釋)，二抗為相應(yīng)的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG，電泳分離、轉(zhuǎn)膜、顯影及照相參見(jiàn)文獻(xiàn)［6］方法操作。圖片結(jié)果應(yīng)用WO-9413B型凝膠成像系統(tǒng)自帶軟件Gelpro32分析目的條帶平均灰度及背景灰度，前者減去后者作為統(tǒng)計(jì)分析數(shù)值。最后統(tǒng)計(jì)取值為其灰度值與相應(yīng)內(nèi)參灰度值比值。

1.8 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

實(shí)驗(yàn)分K562-196b組、K562-pLV組，K562組和空白對(duì)照組4組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。每組細(xì)胞以2×107/L的密度接種于96孔板，每孔100 μL，每2～3 d換1次液。每隔24 h加入CCK-8液體10 μL，3 h后在多功能酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度A450值，共測(cè)量7 d，繪制生長(zhǎng)曲線。A=As-Ab，其中As為實(shí)驗(yàn)孔(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8)，Ab為空白孔(不含細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8)。

1.9 Annexin V-PE檢測(cè)細(xì)胞凋亡

實(shí)驗(yàn)設(shè)K562組為對(duì)照組，K562-196b組、K562-pLV組為處理組。細(xì)胞處理48 h后，收集細(xì)胞，PBS重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)，取5×104重懸細(xì)胞，1 000×g離心5 min，棄上清液，加入195 μL Binding Buffer重懸細(xì)胞，加入5 μL Annexin V-PE，混勻后室溫避光溫育10 min，1 000×g離心5 min后收集細(xì)胞，棄上清液，將細(xì)胞重懸于0.5 mL 1×Binding Buffer，流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用ONEWAY ANOVA分析，并對(duì)各組之間數(shù)據(jù)進(jìn)行兩兩比較(Scheffe法)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 pLVTHM-miR-196b重組載體的鑒定

pLVTHM-miR-196b重組載體轉(zhuǎn)化DH5α菌后，在Amp抗性篩選平板上挑取單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，提取質(zhì)粒后進(jìn)行雙酶切鑒定和測(cè)序鑒定。結(jié)果顯示，兩條條帶分別為11 085 bp(pLVTHM片段)和284bp(pre-miR-196b擴(kuò)增片段)。B為pLVTHM-miR-196b測(cè)序結(jié)果，陰影部分與數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的pre-miR-196b 84 bp片段一致(圖1)。

圖 1 pre-miR-196b慢病毒表達(dá)載體pLVTHM-miR-196b的鑒定Fig. 1 Identification of the lentiviral expression vector pLVTHM-miR-196b

2.2 RT-qPCR驗(yàn)證感染病毒后miRNA-196b在K562細(xì)胞中表達(dá)增多

K562細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒pLVTHM-miR-196b 48 h后收集細(xì)胞，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄得到第一鏈cDNA，并進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)，得到Ct值，采用2－ddCt表征各組之間miRNA-196b表達(dá)的倍數(shù)關(guān)系。其中U6為內(nèi)參基因，K562組為對(duì)照組，K562-pLV為空載體組，hNC為正常人外周血有核細(xì)胞組。miRNA-196b的表達(dá)水平在K562-196b組中是K562組的10.32倍(P＜0.05)；hNC組是K562組的3.01倍(P＜0.05)；K562-196b組中miRNA-196b的表達(dá)水平高于hNC組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；K562-pLV組與K562組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)果證明轉(zhuǎn)染成功，miRNA-196b在K562-196b細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)(圖2)。

圖 2 3組細(xì)胞miRNA-196b的相對(duì)定量結(jié)果Fig. 2 Relative expression of miRNA-196b in 3 groups

2.3 BCR-ABL融合基因在K562-196b組中表達(dá)降低

K562細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒pLVTHM-miR-196b 48 h后收集細(xì)胞，分別提取總RNA和蛋白進(jìn)行RT-qPCR和Western blot(圖3)。β-Actin為內(nèi)參基因，K562組為對(duì)照組，K562-pLV為空載體組。圖3A為利用RT-qPCR通過(guò)計(jì)算2－ddCt得到BCR-ABL融合基因mRNA水平的相對(duì)表達(dá)量。K562組與K562-pLV組中BCR-ABL mRNA的表達(dá)基本一致；BCR-ABL mRNA在K562-196b組中表達(dá)低于對(duì)照組，約為對(duì)照組的0.5倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。圖3B為Western blot檢測(cè)BCR-ABL融合蛋白的表達(dá)，K562組、K562-196b組與K562-pLV組的灰度值比值分別為0.896 42、0.639 87和0.778 28，BCR-ABL融合蛋白在K562-196b組的表達(dá)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。RT-qPCR檢驗(yàn)結(jié)果與Western blot結(jié)果一致，證明BCR-ABL在K562-196b組中表達(dá)降低。

圖 3 RT-qPCR和Western blot檢測(cè)3組細(xì)胞中BCR-ABL mRNA及蛋白的表達(dá)Fig. 3 Expression of BCR-ABL mRNA and protein in three groups cells by RT-qPCR and Western blot, respectively

2.4 miRNA-196b過(guò)表達(dá)抑制K562細(xì)胞生長(zhǎng)

每24 h向接種于96孔板的細(xì)胞懸液中加入CCK-8液體10 μL，37 ℃溫育3 h后在多功能酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度A450值，共測(cè)量7 d，繪制生長(zhǎng)曲線(圖4)。K562組與空載K562-pLV組細(xì)胞在第5、6天分別到達(dá)平臺(tái)期，而K562-196b組細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制且無(wú)平臺(tái)期，證明miRNA-196b過(guò)表達(dá)對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用。

2.5 miRNA-196b促進(jìn)K562細(xì)胞凋亡

細(xì)胞培養(yǎng)48 h后收集3組細(xì)胞，按照AnnexinⅤ-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行溫育，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，未經(jīng)處理的K562細(xì)胞對(duì)照組、K562-pLV組與K562-196b組，細(xì)胞凋亡率分別為(4.37±0.44)%、(9.75±0.58)%、(21.42±1.08)%。K562-196b組細(xì)胞凋亡率均顯著高于K562組(P＜0.05)，兩兩相比，K562-196b組細(xì)胞凋亡率顯著高于K562-pLV組(P＜0.05)，K562-pLV組高于K562組(P＜0.05)。

圖 4 3組細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線Fig. 4 The growth curve of the 3 groups of cells

2.6 RT-qPCR檢測(cè)Cox-2、survivin的表達(dá)

3組細(xì)胞提取總RNA和逆轉(zhuǎn)錄同前，β-actin為內(nèi)參基因，Cox-2、survivin為目的基因，通過(guò)計(jì)算2－ddCt得到目的基因mRNA水平的相對(duì)表達(dá)量。與對(duì)照組相比，Cox-2基因在K562-196b組中無(wú)明顯變化(P＞0.05)，Survivin基因在K562-196b組中表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，圖5)。

圖 5 3組細(xì)胞中Cox-2、survivin的相對(duì)定量Fig. 5 The relative quantitaty of Cox-2 and survivin in 3 groups cells

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-196b過(guò)表達(dá)可以有效抑制K562細(xì)胞的生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)K562細(xì)胞的凋亡。這一結(jié)果提示miRNA-196b過(guò)表達(dá)對(duì)CML的治療具有一定作用。但由于每個(gè)miRNA的靶基因一般不會(huì)只有1個(gè)，而每個(gè)靶基因又可能和多個(gè)miRNA相互作用，從而組成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。為了更好地了解miRNA-196b對(duì)CML K562細(xì)胞的作用機(jī)制，我們選取了與腫瘤形成息息相關(guān)的survivin和Cox-2進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè)。Survivin是人們最近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族的新成員［7］，是一種獨(dú)特的細(xì)胞凋亡抑制劑，在腫瘤的形成中發(fā)揮重要作用［8］。Ibrahim等［9］的研究中，AML患者與健康人相比，survivin超標(biāo)達(dá)36.7%，提示survivin對(duì)白血病的生成和預(yù)后有重要意義。Carter等［10］也提出survivin是治療白血病的潛在重要靶點(diǎn)，且研究證明，survivin是BCR-ABL激活的信號(hào)中的一個(gè)下游基因，以survivin為分子靶點(diǎn)聯(lián)合應(yīng)用BCR-ABL阻斷劑是治療CML的良好策略。Cox-2通過(guò)上調(diào)抗凋亡蛋白bcl- 2 抑制細(xì)胞凋亡［11］，在惡性血液病的發(fā)生發(fā)展中有著重要作用。成志勇等［12］研究發(fā)現(xiàn)，CML患者慢性期及急變期細(xì)胞內(nèi)Cox-2 mRNA表達(dá)明顯高于正常對(duì)照，這一發(fā)現(xiàn)表明，Cox-2高表達(dá)與白血病進(jìn)展及預(yù)后不良有密切關(guān)系。又有眾多研究表明，在胃癌、肺癌、老年急性白血病等疾病中，survivin與Cox-2表達(dá)密切相關(guān)，發(fā)揮協(xié)同作用或survivin水平依賴于Cox-2的表達(dá)［13-15］。Guo等［16］的研究也發(fā)現(xiàn)Cox-2與survivin的表達(dá)密切相關(guān)，且核survivin低表達(dá)會(huì)促使肺鱗狀細(xì)胞癌的抗凋亡和過(guò)度增殖，而Cox-2與細(xì)胞質(zhì)survivin在肺鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)與低生存率、獨(dú)立的預(yù)后標(biāo)志以及潛在的治療靶點(diǎn)相關(guān)。根據(jù)以上研究我們推測(cè)miRNA-196b過(guò)表達(dá)下調(diào)BCR-ABL融合基因，會(huì)導(dǎo)致survivin與 Cox-2表達(dá)下調(diào)。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)RT-qPCR結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)miRNA-196b過(guò)表達(dá)可以下調(diào)survivin基因，卻對(duì)Cox-2無(wú)影響，這與推測(cè)不符，進(jìn)行如下分析。

Krysan等［14］證實(shí)的在非小細(xì)胞肺癌中survivin依賴Cox-2的調(diào)節(jié)，且survivin在Cox-2過(guò)表達(dá)細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。Wang等［17］的研究確定了survivin是BCR-ABL信號(hào)通路的一個(gè)下游基因，且受到BCR-ABL融合基因的調(diào)控。BCR-ABL融合基因是miRNA-196b的靶基因之一，miRNA-196b過(guò)表達(dá)會(huì)下調(diào)BCR-ABL的表達(dá)，從而導(dǎo)致在miRNA-196b組中survivin基因含量顯著低于對(duì)照組。然而，Cox-2的表達(dá)卻沒(méi)有如預(yù)期中協(xié)同survivin一同降低，而是與對(duì)照組基本一致，導(dǎo)致這一結(jié)果的原因，Li等［18］認(rèn)為，miRNA-196b的其他靶基因，如HOXA9/MEIS1、FAS等基因的改變調(diào)控了Cox-2，使Cox-2的表達(dá)與K562組基本一致。

本研究通過(guò)miRNA-196b對(duì)CML K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響，證明miRNA-196b可以抑制K562細(xì)胞的增殖并促進(jìn)K562細(xì)胞的凋亡。通過(guò)比較K562-196b組與K562組中survivin和Cox-2表達(dá)水平的變化，發(fā)現(xiàn)miRNA-196b過(guò)表達(dá)可以下調(diào)survivin的表達(dá)，為miRNA-196b作為CML的治療靶點(diǎn)提供了依據(jù)。

致謝：感謝廣東省優(yōu)秀人才引進(jìn)項(xiàng)目對(duì)該研究的支持。

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Effects of miRNA-196b overexpression on proliferation, apoptosis and survivin, Cox-2 expression of K562 cells

YIN Hong, LIU Yue, ZHENG Wen-ling, SONG Yan-bin, MA Wen-li (Institute of Genetic Engineering, Southern Medical University, Guangzhou Guangdong 510515, China)

MA Wen-li E-mail: 339093503@qq.com

Background and purpose: BCR-ABL fusion gene is considered to be the molecular pathological basis and an effective indicator for diagnosis, observation, prognosis, and monitoring of chronic myelogenous leukemia (CML). MiRNA-196b had low expression in acute myeloid leukemia and played an important role in the development of disease. BCR-ABL is the target gene of miRNA-196b in CML, miRNA-196b overexpression leaded to BCR-ABL down-regulation or silencing. Survivin is a downstream gene of BCR-ABL signal pathways. Various studies had showed that survivin and Cox-2 cooperative regulated of cell proliferation and apoptosis in variety of tumors. The purpose of this study was to investigate the effects of miRNA-196b overexpression on proliferation, apoptosis and surviving, Cox-2 mRNA expression of K562 cells. Methods: Three groups including K562-196b, K562-pLV and K562 control groups were set up in this study. The cell proliferation and apoptosis were measured by CCK-8 assay and Annexin V-PE, respectively. The expression of Cox-2 and survivin genes at the mRNA level were detected by Q-PCR. Results: The proliferation of K562 cells could be significantly inhibited by miRNA-196b overexpression; Compared of the three groups of apoptosis rate, K562-196b group was significantly higher than K562 group (P＜0.05). The expression of survivin gene in miRNA-196b was donwregulated (P＜0.05), but the expression of Cox-2 gene in miRNA-196b group had no significant difference (P＞0.05). Conclusion: The miRNA-196b plays an important role in K562 cells proliferation inhibition and apoptosis; Overexpression of miRNA-196b can down-regulate survivin gene expression, and provide some basis for miRNA-196b as a therapeutic target for chronic myelogenous leukemia.

MiRNA-196b; K562 cells; Cell proliferation; Cell apoptosis

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.05.004

R73-35

：A

：1007-3639(2013)05-0341-06

2012-12-18

2013-04-19）

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No: 2012B031800135)；廣東省自然基金項(xiàng)目(No: S2011020003140)。

馬文麗 E-mail:339093503@qq.com