異常高表達(dá)TCTP通過(guò)上調(diào)Bcl-xL抑制胰腺癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡

張飛王瑧張萍張波楊文濤李影奕

1.復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032；

2.復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032；

3.復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032

異常高表達(dá)TCTP通過(guò)上調(diào)Bcl-xL抑制胰腺癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡

張飛1王瑧1張萍1張波2楊文濤3李影奕1

1.復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032；

2.復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032；

3.復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032

背景與目的：胰腺癌是一種常見的惡性腫瘤，病死率高，5年生存率＜5%，目前尚無(wú)很好的治療方法。翻譯控制腫瘤蛋白(translationally controlled tumor protein，TCTP)是一個(gè)生長(zhǎng)相關(guān)的蛋白質(zhì)，有促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，抗細(xì)胞凋亡的作用，目前有研究顯示TCTP在肝癌、結(jié)直腸癌中異常高表達(dá)，但其在胰腺癌中的相關(guān)研究報(bào)道較少。本研究通過(guò)對(duì)TCTP在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)作用機(jī)制分析，致力于尋找新的腫瘤分子靶點(diǎn)，為胰腺癌的靶向治療提供依據(jù)。方法：采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)胰腺癌組織中TCTP表達(dá)情況；RT-PCR檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞株中TCTP的mRNA表達(dá)，Western blot方法檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞株中TCTP和Bcl-xL蛋白表達(dá)水平；免疫熒光染色方法檢測(cè)TCTP在胰腺癌細(xì)胞中的定位；小分子RNA干擾技術(shù)沉默胰腺癌細(xì)胞中TCTP表達(dá)后，利用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡等生物學(xué)指標(biāo)。結(jié)果：與正常胰腺組織相比，胰腺癌組織中TCTP異常高表達(dá)，并且主要位于胰腺癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中；不同胰腺癌細(xì)胞株中TCTP也呈高表達(dá)；siRNA沉默胰腺癌細(xì)胞中的TCTP，顯著抑制細(xì)胞的增殖速度和細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞的凋亡；在胰腺癌細(xì)胞中Bcl-xL表達(dá)與TCTP表達(dá)呈正相關(guān)，沉默TCTP可以下調(diào)Bcl-xL的蛋白表達(dá)。結(jié)論：異常高表達(dá)TCTP，通過(guò)上調(diào)Bcl-xL抑制細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生和發(fā)展。

翻譯控制腫瘤蛋白；胰腺癌；Bcl-xL；siRNA

胰腺癌是全球范圍內(nèi)常見惡性腫瘤，生存期短，病死率居惡性腫瘤的第4位［1］，早期胰腺癌患者主要接受手術(shù)、化學(xué)藥物及放射治療，其5年生存率約20%。晚期胰腺癌患者已經(jīng)失去了根治性手術(shù)切除的機(jī)會(huì)，中位生存期僅為 3～6個(gè)月，5年生存率＜5%［2］。因此，尋找新的調(diào)節(jié)胰腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵靶基因及相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制，對(duì)于胰腺癌的治療及預(yù)后評(píng)估具有重要的轉(zhuǎn)化應(yīng)用價(jià)值。

翻譯控制腫瘤蛋白(translationally controlled tumor protein，TCTP)是一個(gè)高度保守的親水性蛋白［3］，廣泛存在于真核生物包括真菌、酵母、昆蟲、植物和哺乳動(dòng)物［4］。TCTP又被稱為IgE依賴的組胺釋放因子(HRF)、fortilin、P21、P23和TPT-1［5-7］。TCTP最早發(fā)現(xiàn)于腫瘤細(xì)胞，由于其mRNA具有翻譯控制mRNA的所有序列和結(jié)構(gòu)，所以稱之為翻譯控制腫瘤蛋白［8］。TCTP基因定位于13q12—q14［9］，由5個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成，全長(zhǎng)3 819個(gè)核苷酸，編碼172個(gè)氨基酸［10］。TCTP是一個(gè)生長(zhǎng)相關(guān)的蛋白質(zhì)，有促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、抗細(xì)胞凋亡的作用，阻斷該蛋白表達(dá)能抑制腫瘤細(xì)胞的惡性表型［11］。TCTP在肝癌、結(jié)直腸癌中異常高表達(dá)［12-13］，但其在胰腺癌中的相關(guān)研究報(bào)道較少。本研究通過(guò)對(duì)TCTP在胰腺癌中的表達(dá)及其作用分子機(jī)制解析，致力于尋找新的腫瘤分子靶點(diǎn)，為胰腺癌的靶向治療提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞系

人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)CI35、PCI55、Miapaca-2、PANC-1、L3.6pL培養(yǎng)于37 ℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為5%，含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，BxPc-3、人胚腎HEK293細(xì)胞培養(yǎng)于37 ℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為5%，含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(培養(yǎng)基和血清均購(gòu)自Gibco公司)。

1.2 試劑

具體抗體試劑包括兔抗TCTP抗體(Epitomics公司)、鼠抗Bcl-xL抗體(ProteinTech公司)、羊抗兔HRP抗體、羊抗鼠HRP抗體(Santa Cruz Biotechnology公司)和綠色熒光抗兔HRP抗體(Jackson ImmunoResearch公司)。PCR反應(yīng)試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司，免疫組化試劑盒GTvision DAB試劑盒購(gòu)自Gene Tech公司，CCK-8試劑盒購(gòu)自Dojindo公司，細(xì)胞周期和Annexin Ⅴ/PI凋亡試劑盒購(gòu)自Invitrogen。LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自Invitrogen公司。

1.3 免疫組化染色

人胰腺癌組織來(lái)自復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，并且經(jīng)過(guò)患者知情同意，距離癌組織2 cm以上的胰腺組織被視為正常胰腺組織用來(lái)做陰性對(duì)照組。組織經(jīng)過(guò)脫蠟，用3%H2O2消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，正常羊血清常溫封閉1 h，抗TCTP抗體(1∶500)4 ℃溫育過(guò)夜，二抗(1∶100)37 ℃溫育1 h，GTvision DAB kit免疫組化試劑盒顯色。顯微鏡下觀察結(jié)果，棕色顆粒定位于細(xì)胞質(zhì)中。

1.4 逆轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription PCR，RT-PCR)

根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)提供的TCTP基因序列信息，采用Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物，經(jīng)BLAST分析，由上海捷瑞公司合成。GAPDH引物為：上游5’-TGTGATGGTGGGAATGGGC -3’；下游5’-TTTGATGTCACGCACGATTTC -3’。TCTP引物為：上游5’-GGGGAAGATGGTCAGTAG-3’；下游5’-TCACGGTAGTCCAATAGAG -3’。

培養(yǎng)胰腺癌PCI35、PCI55、MiaPaca-2、BxPc-3、PANC-1、L3.6pL細(xì)胞和人胚腎HEK 293細(xì)胞，用TRIzol試劑提取細(xì)胞總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用PCR試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增。GAPDH循環(huán)次數(shù)為25，退火溫度為60 ℃，TCTP循環(huán)次數(shù)為30，退火溫度為58 ℃。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離目的條帶和內(nèi)參，條帶經(jīng)紫外光顯色灰度掃描，半定量檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞系及HEK293細(xì)胞中TCTP基因表達(dá)水平。

1.5 蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)

收集胰腺癌PCI35、PCI55、Miapaca-2 BxPc-3、PANC-1、L3.6pL細(xì)胞和人胚腎HEK 293細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度后，每個(gè)樣品上樣30 g，行蛋白電泳，電轉(zhuǎn)移到PVDF膜(美國(guó)MiLLipore公司)上，封閉后順序加一抗(1∶1 000)，二抗(1∶5 000)，進(jìn)行雜交，ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒(美國(guó)MiLLipore公司)檢測(cè)雜交信號(hào)。

1.6 免疫熒光染色

將PCI55和MiaPaca-2細(xì)胞培養(yǎng)于載玻片上，4%的多聚甲醛固定，3%羊血清封閉1 h，一抗(抗TCTP抗體1∶100)4 ℃過(guò)夜，熒光二抗(1∶100)37 ℃溫育1 h，細(xì)胞核用DAPI染色15 min，激光共聚焦(萊卡)檢測(cè)熒光信號(hào)。

1.7 siRNA干擾TCTP蛋白表達(dá)

合成TCTP小分子干擾RNA(siRNA)，TCTP siRNA序列為5’-AAGGTACCGAAAGCACAGT-3’，對(duì)照Scramble siRNA 序列為5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’。PCI55和MiaPaca-2細(xì)胞傳代第2天用LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑(Invitrogen)按照說(shuō)明書要求，將TCTP siRNA和 Scramble siRNA分別轉(zhuǎn)入PCI55細(xì)胞中。

1.8 細(xì)胞活力檢測(cè)

轉(zhuǎn)染24 h后，將表達(dá)TCTP siRNA和 scramble siRNA的PCI55，MiaPaca-2細(xì)胞消化，分別以每孔3 000個(gè)細(xì)胞的密度接種于96孔培養(yǎng)板，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)做5個(gè)平行樣本，將培養(yǎng)板在37 ℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)。分別于圖示時(shí)間向每孔加入10 μL CCK-8檢測(cè)試劑，在培養(yǎng)箱內(nèi)溫育2 h。用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度值(A)，計(jì)算每5孔的A值的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

1.9 細(xì)胞周期與凋亡分析

PCI55和MiaPaca-2細(xì)胞分別以每孔2×105密度接種于6孔培養(yǎng)板，每孔細(xì)胞懸液體積2 mL。將細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染TCTP siRNA和 scramble siRNA，在37 ℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)48 h后，胰酶消化收集細(xì)胞(培養(yǎng)基上清液一起收集)，1 000 r/min，離心5 min，然后細(xì)胞用預(yù)冷的PBS洗兩遍。用1倍結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度到1×106個(gè)細(xì)胞/mL。接著加入5 μL Annexin V-FITC及1 μL 100 μg/mL的PI工作液，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng)15 min。最后加入1倍結(jié)合緩沖液400 μL，輕輕混勻，用流式細(xì)胞檢測(cè)儀器檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

2 結(jié) 果

2.1 TCTP在胰腺癌組織中異常高表達(dá)

胰腺癌組織免疫組化染色結(jié)果顯示，TCTP存在于胰腺癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，在胰腺導(dǎo)管癌上皮細(xì)胞中異常高表達(dá)，而在癌旁正常的胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞中則不表達(dá)(圖1A，B)。當(dāng)用兔IgG來(lái)代替抗TCTP抗體作為陰性對(duì)照時(shí)，結(jié)果并沒有陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明上述免疫組化染色反應(yīng)具有特異性(圖1C)。

2.2 TCTP在胰腺癌細(xì)胞中異常高表達(dá)

因?yàn)門CTP在胰腺癌組織中異常高表達(dá)，因此我們進(jìn)一步檢測(cè)了人胰腺癌細(xì)胞系PCI35、PCI55、MiaPaca-2、BxPc-3、PANC-1和L3.6pL中TCTP的表達(dá)情況。RT-PCR和蛋白免疫雜交結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)的6株胰腺癌細(xì)胞中，在mRNA水平和蛋白表達(dá)水平均檢測(cè)到TCTP的表達(dá)，并且不同的胰腺癌細(xì)胞系中TCTP的表達(dá)不盡相同，但是都明顯高于正常HEK293細(xì)胞(圖2A，B)。免疫熒光染色結(jié)果進(jìn)一步顯示TCTP存在于PCI55細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，成顆粒狀分布(圖 2C)。

2.3 沉默TCTP表達(dá)通過(guò)阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程和促進(jìn)細(xì)胞凋亡從而抑制細(xì)胞增殖

利用siRNA技術(shù)沉默胰腺癌細(xì)胞中TCTP，觀察其對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖、周期、凋亡的影響。PCI55細(xì)胞轉(zhuǎn)染TCTP siRNA和scramble siRNA后，Western blot檢測(cè)兩組細(xì)胞中的TCTP含量，結(jié)果顯示，干擾組中的TCTP蛋白表達(dá)明顯低于對(duì)照組(圖3A)，沉默率達(dá)95%以上，說(shuō)明沉默胰腺癌細(xì)胞中TCTP實(shí)驗(yàn)成功。沉默TCTP的PCI55細(xì)胞增殖速度顯著慢于scramble對(duì)照組(圖3B)。同時(shí)PCI55細(xì)胞中TCTP被沉默后，細(xì)胞G0/ G1期比例顯著增加，S期、G2/M期細(xì)胞比例顯著降低(圖3C)，伴隨凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加(圖3D)。在MiaPaca-2胰腺癌細(xì)胞中得到了相似的結(jié)果。

圖 1 免疫組化檢測(cè)TCTP在胰腺癌組織中表達(dá)情況(400×)Fig. 1 Aberrant expression of TCTP in human pancreatic cancer tissue detected by immunohistochemistry (400×).

圖 2 TCTP 在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況Fig. 2 Constitutive expression of TCTP in human pancreatic cancer cell lines

2.4 TCTP通過(guò)上調(diào)Bcl-xL的表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡

Western blot結(jié)果顯示，在胰腺癌細(xì)胞株P(guān)CT55、PCI35、PANC-1、和MiaPaca-2中的TCTP表達(dá)量依次遞減的同時(shí)，Bcl-xL在上述細(xì)胞中的蛋白表達(dá)量也呈相應(yīng)的遞減趨勢(shì)(圖4A)，提示在胰腺癌細(xì)胞中TCTP可能影響B(tài)cl-xL的表達(dá)。當(dāng)用TCTP siRNA沉默PCI55和MiaPaca-2細(xì)胞中的TCTP后，Bcl-xL表達(dá)量也隨之下降(圖4B)。

圖 3 沉默TCTP表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為影響Fig. 3 The effect of TCTP silence on biological behavior of pancreatic cancer cell lines PCI55 and MiaPaca-2

圖 4 TCTP 對(duì)Bcl-xL表達(dá)的影響Fig. 4 The effect of TCTP on Bcl-xL expression

3 討 論

胰腺癌是一種常見的惡性腫瘤，病死率高，5年生存率＜5%，由于大多數(shù)患者診斷時(shí)已屬晚期，無(wú)法進(jìn)行手術(shù)和放射治療，幾種常用的化療藥物也并不能取得很好的療效，并且容易產(chǎn)生耐藥，所以亟待開發(fā)新的、有效的分子靶向藥物治療胰腺癌。

目前為止，TCTP 已被證明在肝癌、結(jié)直腸癌中發(fā)揮重要作用，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TCTP在胰腺癌組織和胰腺癌細(xì)胞株中異常高表達(dá)，而在正常的胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞中不表達(dá)。因此，我們推測(cè)TCTP在胰腺癌中也發(fā)揮著重要的作用。

TCTP在腫瘤的發(fā)生，細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)節(jié)，應(yīng)激反應(yīng)，基因調(diào)節(jié)，熱休克反應(yīng)，甚至是免疫反應(yīng)方面發(fā)揮著一系列重要的生物學(xué)作用［14,15］。在HeLa 細(xì)胞中過(guò)表達(dá) TCTP能夠部分抑制 Na-K-ATPase的活性使EGFR的磷酸化增強(qiáng)，激活Ras/Raf/ERK信號(hào)通路；同時(shí)可以激活PI3K/Akt 信號(hào)通路和使 PLC 的磷酸化增強(qiáng)。這些信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖具有很重要的調(diào)控作用［16］。Chfr是一個(gè)細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)蛋白，在細(xì)胞周期進(jìn)程和腫瘤抑制上起著重要的作用，TCTP在體內(nèi)能與 Chfr 相互作用，通過(guò)調(diào)節(jié)Chfr的穩(wěn)定性調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程［17］。利用 RNAi下調(diào)TCTP的表達(dá)，明顯減少細(xì)胞的數(shù)量，而不影響細(xì)胞的大小，說(shuō)明細(xì)胞有絲分裂明顯變慢。進(jìn)一步研究顯示，下調(diào)TCTP 的表達(dá)使細(xì)胞周期 G1期明顯延長(zhǎng)，而G2/M 期的標(biāo)志蛋白 cyclin A1和cyclin B1 的表達(dá)明顯降低和延遲［18］。除此之外，TCTP還能和微管蛋白結(jié)合，參與細(xì)胞的有絲分裂過(guò)程［19］。因此，TCTP對(duì)細(xì)胞的周期調(diào)控起著非常重要的作用。過(guò)表達(dá)TCTP能夠抑制依托泊苷(etoposide)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡；干擾 TCTP 可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［3,20］。在細(xì)胞內(nèi) TCTP能與抗凋亡蛋白Mcl1相互作用，通過(guò)抑制MCL-1的泛素化降解增強(qiáng)MCL-1的穩(wěn)定性，從而發(fā)揮抗凋亡作用［4］。最近的研究也證實(shí)了TCTP能夠與TSC-22和p53 相互作用，促進(jìn)TSC-22和p53的降解，從而抑制由TSC-22和p53介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［21-22］。我們的研究結(jié)果顯示，沉默胰腺癌細(xì)胞中內(nèi)源性TCTP蛋白表達(dá)，顯著抑制細(xì)胞增殖，阻止細(xì)胞周期進(jìn)程，增加細(xì)胞凋亡。

Bcl-xL是Bcl-2家族的重要成員，是一類具有抗凋亡作用的蛋白，在維持細(xì)胞生存中起關(guān)鍵作用。有報(bào)道顯示，在T細(xì)胞激活過(guò)程中，TCTP蛋白與Bcl-xL蛋白同時(shí)表達(dá)上調(diào)；而且通過(guò)反義核酸技術(shù)降低T細(xì)胞中的TCTP時(shí)，T細(xì)胞的凋亡顯著增加。此外，TCTP蛋白的N末端是TCTP與Bcl-xL相互結(jié)合和發(fā)揮抗凋亡作用必不可少的［23］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TCTP異常高表達(dá)的胰腺癌細(xì)胞株中，Bcl-xL也呈高表達(dá)狀態(tài)。沉默PCI55和MiaPaca-2胰腺癌細(xì)胞中的TCTP蛋白，可下調(diào)Bcl-xL蛋白表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖。說(shuō)明在胰腺癌細(xì)胞中異常高表達(dá)的TCTP通過(guò)上調(diào)Bcl-xL表達(dá)發(fā)揮抗凋亡作用，從而促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，本研究結(jié)果證實(shí)，在胰腺癌中存在一條新的抗凋亡途徑TCTP-Bcl-xL，并且在胰腺癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。通過(guò)靶向分子阻斷TCTP-Bcl-xL途徑，可能為臨床治療胰腺癌提供新的思路。

［1］ JEMAL A, BRAY F, CENTER M M, et al. Global cancer statistics ［J］. CA Cancer J Clin, 2011, 61(2): 69-90.

［2］ HOCHSTER H S, HALLER D G, DE GRAMONT A, et al. Consensus report of the international society of gastrointestinal oncology on therapeutic progress in advanced pancreatic cancer ［J］. Cancer, 2006, 107(4): 676-685.

［3］ LI F, ZHANG D, FUJISE K. Characterization of fortilin, a novel antiapoptotic protein［J］. J Biol Chem, 2001, 276(50): 47542-47549.

［4］ LIU H, PENG H W, CHENG Y S, et al. Stabilization and enhancement of the antiapoptotic activity of mcl-1 by TCTP［J］. Mol Cell Biol, 2005, 25(8): 3117-3126.

［5］ BOHM H, BENNDORF R, GAESTEL M, et al. The growthrelated protein P23 of the Ehrlich ascites tumor: translational control, cloning and primary structure ［J］. Biochem Int, 1989, 19(2): 277-286.

［6］ GROSS B, GAESTEL M, BOHM H, et al. cDNA sequence coding for a translationally controlled human tumor protein［J］. Nucleic Acids Res, 1989, 17(20): 8367.

［7］ CHITPATIMA S T, MAKRIDES S, BANDYOPADHYAY R, et al. Nucleotide sequence of a major messenger RNA for a 21 kilodalton polypeptide that is under translational control in mouse tumor cells ［J］. Nucleic Acids Res, 1988, 16(5): 2350.

［8］ THOMAS G, THOMAS G, LUTHER H. Transcriptional and translational control of cytoplasmic proteins after serum stimulation of quiescent Swiss 3T3 cells ［J］. Proc Natl Acad Sci U S A,1981, 78(9): 5712-5716.

［9］ MACDONALD S M, PAZNEKAS W A, JABS E W. Chromosomal localization of tumor protein, translationallycontrolled 1 (TPT1) encoding the human histamine releasing factor (HRF) to 13q12--＞q14 ［J］. Cytogenet Cell Genet, 1999, 84(1-2): 128-129.

［10］ THIELE H, BERGER M, LENZNER C, et al. Structure of the promoter and complete sequence of the gene coding for the rabbit translationally controlled tumor protein (TCTP) P23［J］. Eur J Biochem, 1998, 257(1): 62-68.

［11］ TUYNDER M, SUSINI L, PRIEUR S, et al. Biological models and genes of tumor reversion: cellular reprogramming through tpt1/TCTP and SIAH-1 ［J］. Proc Natl Acad Sci U S A, 2002, 99(23): 14976-14981.

［12］ CHAN T H, CHEN L, LIU M, et al. Translationally controlled tumor protein induces mitotic defects and chromosome missegregation in hepatocellular carcinoma development［J］. Hepatology, 2012, 55(2): 491-505.

［13］ CHUNG S, KIM M, CHOI W, et al. Expression of translationally controlled tumor protein mRNA in human colon cancer ［J］. Cancer Lett, 2000, 156(2): 185-190.

［14］ KOZIOL M J, GURDON J B. TCTP in development and cancer［J］. Biochem Res Int, 2012, 2012: 105203.

［15］ MACDONALD S M, RAFNAR T, LANGDON J, et al. Molecular identification of an IgE-dependent histaminereleasing factor ［J］. Science, 1995, 269(5224): 688-690.

［16］ KIM M, JUNG J, LEE K. Roles of ERK, PI3 kinase, and PLC-gamma pathways induced by overexpression of translationally controlled tumor protein in HeLa cells ［J］. Arch Biochem Biophys, 2009, 485(1): 82-87.

［17］ BURGESS A, LABBE J C, VIGNERON S, et al. Chfr interacts and colocalizes with TCTP to the mitotic spindle ［J］. Oncogene, 2008, 27(42): 5554-5566.

［18］ BRIOUDES F, THIERRY A M, CHAMBRIER P, et al. Translationally controlled tumor protein is a conserved mitotic growth integrator in animals and plants ［J］. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010, 107(37): 16384-16389.

［19］ GACHET Y, TOURNIER S, LEE M, et al. The growthrelated, translationally controlled protein P23 has properties of a tubulin binding protein and associates transiently with microtubules during the cell cycle ［J］. J Cell Sci, 1999, 112 ( Pt 8): 1257-1271.

［20］ ZHANG D, LI F, WEIDNER D, et al. Physical and functional interaction between myeloid cell leukemia 1 protein (MCL1) and Fortilin. The potential role of MCL1 as a fortilin chaperone［J］. J Biol Chem, 2002, 277(40): 37430-37438.

［21］ AMSON R, PECE S, LESPAGNOL A, et al. Reciprocal repression between P53 and TCTP ［J］. Nat Med, 2012, 18(1): 91-99.

［22］ LEE J H, RHO S B, PARK S Y, et al. Interaction between fortilin and transforming growth factor-beta stimulated clone-22 (TSC-22) prevents apoptosis via the destabilization of TSC-22［J］. FEBS Lett, 2008, 582(8): 1210-1218.

［23］ YANG Y, YANG F, XIONG Z, et al. An N-terminal region of translationally controlled tumor protein is required for its antiapoptotic activity ［J］. Oncogene, 2005, 24(30): 4778-4788.

Aberrant expression of TCTP protein inhibits cell apoptosis by up-regulating Bcl-xL in human pancreatic cancer

ZHANG Fei1, WANG Zhen1, ZHANG Ping1, ZHANG Bo2, YANG Wen-tao3, LI Yingyi1(1.Cancer Research Institute; 2.Department of Pancreas and Hepatobiliary, Pancreatic Cancer Institute; 3.Department of Pathology, Fudan University Shanghai Cancer Center, Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China)

LI Ying-yi E-mail: liyingyi@fudan.edu.cn

Background and purpose: Translationally controlled tumor protein (TCTP) is a growth-related protein, and involves in promoting cell proliferation and inhibiting cell apoptosis. A lot of evidence shows there is an overexpression of TCTP in liver cancer, colon cancer and other gastrointestinal tumors. However there is no any evidence about TCTP in pancreatic cancer. The present study aimed to investigate the role and mechanism of TCTP in pancreatic carcinogenesis to find new molecular targets and to provide a basis for targeted therapy of pancreatic cancer. Methods: Immunohistochemistry, Western immunoblot analysis, RT-PCR, immunofluorescence analysis, siRNA transfection, cell counting kit 8 (CCK-8) assays, cell cycle and cell apoptosis analysis were used. Results: TCTP was overexpressed in pancreatic cancer tissues and cancer cells. Moreover, silencing TCTP expression by siRNA arrested cell cycle progression, promoted cell apoptosis and eventually inhibited cell proliferation. Furthermore, Bcl-xL protein expression was positively correlatived with TCTP expression in pancreatic cancer cells, and silencing TCTP downregulated Bcl-xL expression. Conclusion: TCTP is overexpressed in human pancreatic cancer, which upregulates Bcl-xL to inhibit cell apoptosis, and eventually promotes pancreatic carcinogenesis.

TCTP; Pancreatic cancer; Bcl-xL; siRNA

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.05.001

R735.9

：A

：1007-3639(2013)05-0321-07

2013-03-13

2013-05-16）

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No：30973476，812727)；上海市浦江人才計(jì)劃(No：10PJ1402100)；復(fù)旦大學(xué)“985工程”三期腫瘤研究項(xiàng)目Ⅱ(No：985Ⅲ-YFX0102)。

李影奕 E-mail:liyingyi@fudan.edu.cn