鬼針草屬六種植物的同工酶電泳實(shí)驗(yàn)研究

劉紅燕

(山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南250355)

鬼針草為我國(guó)民間常用中草藥，來(lái)源于菊科(Compaositae)鬼針草屬(Bidens Linn.)多種植物，具有清熱解毒、活血、散淤、消腫之功效，用于治療痢疾、腹瀉、感冒、炎癥等［1］。全球約有230種，我國(guó)有9個(gè)種、2個(gè)變種，其中山東省內(nèi)有6個(gè)品種。為進(jìn)一步探討鬼針草種內(nèi)變異的關(guān)系，揭示其變異規(guī)律，本研究采用過(guò)氧化物酶同工酶電泳生化標(biāo)記方法對(duì)來(lái)源于山東省內(nèi)6個(gè)品種鬼針草進(jìn)行了分析研究，以期為種質(zhì)資源的收集和藥效成分研究提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

DYY－24A型恒流電泳儀、DYY－IH型垂直電泳槽、凹槽玻璃板一套(均為北京市六一儀器廠)、LGR16－W型冷凍離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)、PHS－SD型數(shù)顯酸度計(jì)(上海電子光學(xué)技術(shù)研究所)、FA1104型電子天平(上海天平儀器廠)微量進(jìn)樣器、研缽、離心試管。

1.2 試劑

三羥甲基氨基甲烷、丙烯酰胺、過(guò)硫酸銨、N，N－亞甲基雙丙烯酰胺、甘氨酸、40%蔗糖溶液、考馬斯亮藍(lán)R250、醋酸聯(lián)苯胺、四甲基乙二胺、溴酚藍(lán)等，所用試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)材料

鬼針草屬大狼杷草(Bidens frondosa L.)、金盞銀盤(Bidens biternata Merr.et Scherff)、小花鬼針草(Bidens parviflora Willd.)、婆婆針(Bidens bipinnata L.)、狼杷草(Bidens tripartita L.)、矮狼杷草［Bidens tripartita L.var.repens(D.Don.)Sherff］的成熟新鮮葉片。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 電泳實(shí)驗(yàn)

樣品制備、凝膠制備、電泳操作、染色與保存參照文獻(xiàn)［2］進(jìn)行。

2.2 PAGE 圖譜處理

膠板用EDAS－290凝膠成像紫外分析儀成像(圖1)。根據(jù)各樣品譜帶形態(tài)及出現(xiàn)的先后順序，繪制電泳圖譜(圖2)。根據(jù)譜帶泳動(dòng)率Rf值(泳道中各譜帶與溴酚藍(lán)前沿的位置比值)計(jì)算鬼針草譜帶泳動(dòng)率(表1)。

表1 鬼針草過(guò)氧化同工酶電泳譜帶Rf值

圖1 鬼針草屬藥材植株P(guān)OD圖譜

圖2 鬼針草屬藥材植株P(guān)OD圖譜示意圖

六個(gè)樣品電泳譜帶存在顯著差異，其中共有譜帶11可作為特征鑒別譜帶;譜帶4，5，6，7，8是大狼把草所特有，可作為鑒別譜帶;矮狼把草只有2條譜帶，可區(qū)別于其它品種;金盞銀盤、小花鬼針草、婆婆針均有3條譜帶，但譜帶Rf的顯著差異可用于3種植物的鑒別。譜帶強(qiáng)度的顯著差異，可能與樣品有效成分含量不同有關(guān)?？傊?，鬼針草POD圖譜譜帶模式(數(shù)目、位置)能夠把6種植物區(qū)分開來(lái)。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)所用樣品于同一時(shí)間采集。預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)成熟葉片酶譜較為清晰，所以采樣部位為鬼針草植株莖的成熟葉。

鬼針草藥材形態(tài)學(xué)特征顯示6個(gè)種質(zhì)在葉形、果實(shí)形狀與芒刺數(shù)目上有顯著差異。大狼把草、金盞銀盤、小花鬼針草、婆婆針、狼把草、矮狼把草的葉形分別為羽狀、羽狀、條狀披針形、三角狀或菱狀披針形、矩圓狀披針形、披針形;果實(shí)分別為扁平、條狀略扁具4棱、條形具4棱、條形具3～4棱、扁，楔形，或倒卵狀楔、楔狀條形;果實(shí)頂端芒刺分別為2枚、3～4枚、2枚、3～4枚、2枚、2～3枚。6個(gè)品種的形態(tài)學(xué)差異顯著，與過(guò)氧化物酶同工酶譜差異顯著結(jié)果相吻合。外在形態(tài)學(xué)特征結(jié)合內(nèi)在酶譜特征可作為鬼針草種質(zhì)劃分的一種手段。

聚丙烯酰胺凝膠過(guò)氧化物酶同工酶電泳技術(shù)根據(jù)同工酶的結(jié)構(gòu)差異能夠穩(wěn)定地遺傳給后代的規(guī)律，可以鑒別諸多遺傳變異，如生物的類別、品種的地理分析、演化關(guān)系等［4］。此方法操作簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確，直觀性強(qiáng)，且成本低，可用于鬼針草品種之間的鑒別。

［1］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典:上冊(cè)［M］.上海:上海人民出版社，1997:1354.

［2］徐凌川，盧燕，辛學(xué)梅，等.白首烏蛋白質(zhì)及同工酶電泳實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2003，14(12):3 －4.

［3］石俊英.中藥電泳鑒別法及其在藥用植物、動(dòng)物中的應(yīng)用研究［J］.山東中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1995，19(2):74 －75.

［4］李明，田永云，耿杰.山東玫瑰花的過(guò)氧化物酶同工酶分析［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(7):1624 －1625.