灰樹花多糖對高血壓大鼠的血壓及心臟、腎臟超微結(jié)構(gòu)的影響

張立霞 楊 靜 倪艷波 李長城 邵一葉

(濱州醫(yī)學(xué)院，山東 煙臺 264003)

治療高血壓藥物的安全性及其副作用已成為重要問題。近年來，人們希望得到有效且安全、副作用小的抗高血壓藥物?；覙浠ㄓ置惾~多孔菌，是一種珍惜的食藥兩用菌?；覙浠ǘ嗵堑拿庖咴鰪姽δ芤呀?jīng)獲得了廣泛的認(rèn)可，據(jù)相關(guān)報道，灰樹花多糖還有抗HIV病毒，調(diào)節(jié)血糖、血脂、膽固醇水平〔1～4〕，抗氧化和防衰老的作用〔5，6〕，有的研究已經(jīng)將其作為抗癌藥物應(yīng)用于臨床〔7，8〕?？娠@著抑制血壓、血脂和體重的增加，但后對于灰樹花對高血壓的影響的報道極少。本研究通過對高血壓大鼠血壓的檢測及其心臟、腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)、超微結(jié)構(gòu)的觀察，發(fā)現(xiàn)灰樹花多糖對高血壓導(dǎo)致的大鼠心臟、腎臟的損傷有保護作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 體重180～200 g的雌性SD大鼠，由濱州醫(yī)學(xué)院動物中心提供。

1.2 主要藥品及儀器 灰樹花多糖，由浙江方格藥業(yè)有限公司;硝苯地平，10 mg/片，由山西太原藥業(yè)有限公司提供;BP-6無創(chuàng)血壓測試儀，成都泰盟科技有限公司;BX51生物顯微鏡，奧林巴斯株式會社;JEM1400透射電子顯微鏡，日本電子。

1.3 動物模型的制備 參照文獻〔9〕方法，加以改進。取3周齡的SD大鼠(體重在180～200 g)，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，除對照組外各組給予高鹽顆粒飼料(含8%氯化鈉)，飲用含0.85%氯化鈉的自來水，BP-6無創(chuàng)血壓測試儀2次/w進行血壓檢測飼養(yǎng)4 w后血壓明顯升高并穩(wěn)定，血壓穩(wěn)定1 w(成模后，正常飲食)開始實驗，灌胃給藥4 w，實驗過程中予以正常飲食。

1.4 實驗動物分組 實驗動物分為對照組(1 ml/100 g生理鹽水)、硝苯地平組(0.005 g/kg)、模型組、灰樹花多糖低(0.075 g/kg)、中(0.100 g/kg)、高劑量組(0.150 g/kg)，每組10只。

1.5 動物取材、觀察 實驗動物取材后多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色觀察心臟、腎臟形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的變化;透射電子顯微鏡標(biāo)本按照其要求取材、固定、包埋、切片、染色，觀察心臟、腎臟超微結(jié)構(gòu)的變化。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進行t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 灰樹花多糖對大鼠收縮壓的影響 高鹽飲食4 w后，除對照組外，各組收縮壓都顯著升高(P＜0.01)且穩(wěn)定。灌胃給藥灰樹花多糖高、中、低劑量4 w后，與模型組相比，三組血壓顯著下降(P＜0.01);且灰樹花多糖高、中、低劑量組之間收縮壓下降水平無顯著性差異(P＞0.05);灌胃給藥硝苯地平4 w后與模型組相比，硝苯地平組血壓顯著下降(P＜0.01)，且其血壓下降水平與灰樹花高、中、低劑量組有差異，但不明顯(P＞0.05)。見表1。

表1 各組大鼠收縮壓變化，mmHg，n=10)

表1 各組大鼠收縮壓變化，mmHg，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.01

?

2.2 組織形態(tài)觀察 HE染色后觀察發(fā)現(xiàn)，模型組心臟、腎臟損傷嚴(yán)重。心臟中、小血管壁增厚，心肌細胞腫脹，部分區(qū)域可見炎性細胞浸潤;腎臟皮質(zhì)部分腎小球腫脹，囊腔消失，腎小體失去正常結(jié)構(gòu)，可見大片腎小體形態(tài)改變的區(qū)域性。灰樹花多糖各組及硝苯地平組心臟、腎臟在形態(tài)學(xué)損傷較模型組為輕，心臟亦可見心內(nèi)中、小血管壁增厚，但增厚程度較模型組有所減輕，未見炎性細胞浸潤及心肌細胞腫脹區(qū)域;腎臟皮質(zhì)部分損傷減輕，特別是灰樹花多糖高劑量組，腎皮質(zhì)中未見成片損傷的腎小體。見圖1，圖2。

圖1 各組大鼠心臟組織形態(tài)觀察(HE，×400)

圖2 各組大鼠腎臟組織形態(tài)觀察(HE，×400)

2.3 電子顯微鏡觀察 電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，模型組心臟、腎臟超微結(jié)構(gòu)損害較重。心臟超微結(jié)構(gòu)可見，模型組線粒體排列不規(guī)則，部分區(qū)域線粒體增多，聚集?；覙浠ǘ嗵歉鹘M及硝苯地平對照組線粒體增生情況較模型組輕，線粒體與肌纖維的排列也較規(guī)則。模型組的腎臟超微觀察可見，腎小球部分區(qū)域可見基底膜增厚，厚薄不均勻，足突融合，系膜插入-系膜細胞增生，插入至血管內(nèi)皮細胞與基底膜之間。灰樹花多糖各組及硝苯地平對照組亦可見少量的基底膜厚薄不均勻，及足突融合，但其程度及范圍均較模型組有所減輕。見圖3，圖4。

圖3 各組大鼠心臟超微結(jié)構(gòu)

圖4 各組大鼠腎臟超微結(jié)構(gòu)

3 討論

高血壓是一種以動脈血壓持續(xù)升高為主要表現(xiàn)的慢性疾病，常引起心臟、腦、腎臟等重要器官的病變并出現(xiàn)相應(yīng)的后果。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過長達4 w的高鹽飲食可以導(dǎo)致大鼠血壓升高并穩(wěn)定，引起心臟、腎臟的器質(zhì)性病變?；覙浠ǘ嗵强梢詫Ω哐獕盒呐K、腎臟的病理學(xué)變化起到一定的保護作用，其效果與陽性對照組藥物相似，甚至在對腎臟的保護作用上，大劑量的灰樹花多糖組優(yōu)于硝苯地平對照藥物組。

心臟在高血壓的早期變化主要為心內(nèi)中、小血管的管壁增厚。研究發(fā)現(xiàn)灰樹花多糖可以使心臟損傷情況得到改善。

腎臟對高血壓極為敏感，其損傷較重，部分腎小體失去其正常的生理結(jié)構(gòu)，這些損傷的腎小體呈局域性出現(xiàn)，部分區(qū)域的腎小體結(jié)構(gòu)仍為正常的。本研究結(jié)果提示灰樹花多糖在超微結(jié)構(gòu)上看其對高血壓大鼠腎臟損傷的保護作用優(yōu)于硝苯地平。較大劑量的灰樹花多糖對高血壓心臟、腎臟的保護作用有可能因為其可以較好的降低血壓，以致因高血壓引起的心臟腎臟損傷不再加重;亦有可能因為其能改善心臟、腎臟因高血壓引起的損害，以達到保護心臟、腎臟的作用，具體機制有待進一步研究。

1 Fan Y，Wu X，Zhang M，et al.Physical characteristics and antioxidant effect of polysaccharides extracted by boiling water and enzymolysis from Grifola frondosa〔J〕.Int J Biol Macromol，2011;48(5):798-803.

2 Masuda Y，Ito K，Konishi M，et al.A polysaccharide extracted from Grifola frondosa enhances the anti-tumor activity of bone marrow-derived dendritic cell-based immunotherapy against murine colon cancer〔J〕.Cancer Immunol Immunother，2010;59(10):1531-41.

3 Kodama LH，de Stanchina E，Zhou XK，et al.Maitake beta-glucan promotes recovery of leukocytes and myeloid cell function in peripheral blood from paclitaxel hematotoxicity〔J〕.Cancer Immunol Immunother，2010;59(6):885-97.

4 Kodama N，Komuta K，Sakai N，et al.Effect s of D-Fraction，a polysaccharide from Grifola frondosa on tumor growth involve activation of NK cells〔J〕.Biol Pharm Bull，2002;39:1647-70.

5 雷學(xué)軍.抗氧自由基的天然藥物〔J〕.日用化學(xué)工業(yè)，1997;27(5):35-9.

6 邊 杉，葉波平，吳梧桐.灰樹花多糖的研究進展〔J〕.藥物生物技術(shù)，2004;11(1):60-3.

7 徐錚奎.灰樹花多糖抗癌作用及相關(guān)產(chǎn)品開發(fā)進展〔J〕.上海醫(yī)藥，2010;31(11):496-7.

8 劉 安，臧立華，孫慶濟.灰樹花多糖抗腫瘤作用的臨床觀察〔J〕.山東輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報，2008;22(2):43-5.

9 Ohno N，Suzuki I，Oikawa S，et al.Antitumor activity and structural characterization of gluons extract from cultured fruit bodies of Grifola frondosa〔J〕.Chem Pharm Bull，1984;32(3):1142-51.