當(dāng)歸紅花湯對糖酵解供能條件下力竭性游泳訓(xùn)練小鼠耐缺氧能力、抗疲勞能力的影響

蔣 麗 殷 勁

(成都體育學(xué)院運動醫(yī)學(xué)系，四川 成都 610041)

現(xiàn)階段中藥治療運動性疲勞多存在針對性不足的問題，未能根據(jù)疲勞產(chǎn)生的主要環(huán)節(jié)及不同運動項目給藥;且中藥治療運動性疲勞多用補益之法，然單純補益雖可消除疲勞，但往往使運動員感到口舌干燥、胸中憋悶等不良反應(yīng)，故抗運動性疲勞中藥配伍組方應(yīng)調(diào)理、補益并重。反復(fù)短時力竭性訓(xùn)練所致的疲勞在糖無氧酵解供能為主的速度耐力性項目運動員身上多見，對運動員的身心健康和運動水平造成了嚴(yán)重的影響，如何提高機(jī)體耐缺氧能力，緩解機(jī)體在短時力竭訓(xùn)練疲勞階段的缺血缺氧狀況，保護(hù)運動員內(nèi)臟器官不受損傷就成為關(guān)鍵所在〔1〕。當(dāng)歸紅花湯，由當(dāng)歸、紅花兩味藥組成，具有很強(qiáng)的調(diào)理氣血、提高機(jī)體耐缺氧能力〔2～4〕。本研究探討當(dāng)歸紅花湯對糖酵解供能條件下力竭性游泳訓(xùn)練小鼠的影響。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗儀器與實驗設(shè)備 當(dāng)歸紅花湯制備:中藥回流提取裝置1套，調(diào)溫電烤箱1個;實驗中小鼠灌胃:12號針頭(針尖磨鈍)1個。

1.2 中藥組成與加工 當(dāng)歸紅花湯復(fù)方，由當(dāng)歸、紅花等為主要組方組成。實驗動物服用劑量按成人每公斤體重劑量的10倍計算。所有中藥均由成都同仁堂藥店購入。藥物制備:取紅花等味藥，精選、洗凈、烘干、切碎，得凈生藥。稱量配齊。先加8倍量的乙醇，用中藥回流提取裝置回流1 h，得提取液，過濾;再加5倍量的乙醇回流30 min，得提取液，過濾，合并兩次所得濾液，過濾得清液，25℃下減壓濃縮至相對密度為1.3～1.32的稠膏。在40℃～50℃下干燥為干粉。用時將干粉倒入少量溫開水中，使1 ml藥液中含生藥0.36 g，充分?jǐn)嚢?、搖勻。

1.3 實驗動物與分組 由成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供昆明種健康小鼠63只，雌雄各半，年齡60～80歲，體重28～32 g，分籠飼養(yǎng)，予以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來水飼養(yǎng)，保持籠內(nèi)通風(fēng)干燥。

1.4 研究方法 將63只小鼠隨機(jī)分為三組:M組(服用當(dāng)歸紅花湯，參加訓(xùn)練，n=28)、C組(運動對照組，不服用當(dāng)歸紅花湯，參加訓(xùn)練，n=28)和R組(安靜對照組，不服用當(dāng)歸紅花湯，不參加訓(xùn)練，n=7);再將M組和C組各分為四個小組:C1組(過度訓(xùn)練1 d組，n=7);C2組(過度訓(xùn)練5 d組，n=7);C3組(過度訓(xùn)練10 d組，n=7);C4組(過度訓(xùn)練15 d組，n=7)和M1組(過度訓(xùn)練1 d組，n=7);M2組(過度訓(xùn)練5 d組，n=7);M3組(過度訓(xùn)練10 d組，n=7);M4組(過度訓(xùn)練15 d組，n=7)。將56小鼠進(jìn)行模擬乳酸能代謝的短時負(fù)重劇烈游泳訓(xùn)練，在力竭訓(xùn)練游泳后即刻、5、10、15 d，分別測定血乳酸含量、CK、LDH總活性以及在光鏡下觀察肝臟和腎臟結(jié)構(gòu)改變。訓(xùn)練期間，每日測定小鼠的體重、游泳時間，觀察其精神、飲食狀況等。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS9.0軟件進(jìn)行獨立樣本t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 一般情況和體重 實驗期前11 d，游泳訓(xùn)練的各組小鼠活動力增強(qiáng)，游泳時間延長，眼睛鮮紅而有精神，被毛濃密有光澤，無松散毛，無豎毛現(xiàn)象，呼吸正常，食欲正常;對敲籠反應(yīng)敏捷，大便正常，用藥組小鼠實驗期間體重呈正性增長，實驗后體重(35.1±1.9)g比實驗前體重(29.1±1.8)g有顯著增高，為19.59%，在第10天，用藥組小鼠體重達(dá)到最高峰(37.8±1.9)g;第12天起，用藥組小鼠活動力逐漸減弱，游泳時間逐漸變短，籠內(nèi)休息聚團(tuán)、少動、反應(yīng)遲鈍、大便稍稀，但敲籠反應(yīng)尚可，食欲較前有所下降，體重增長緩慢。

實驗期前9 d，對照組小鼠運動時間逐漸增加，但是增加幅度小于用藥組小鼠，逐漸表現(xiàn)出倦怠、少動等癥狀。對照組小鼠整個實驗期間體重有明顯下降，實驗后體重(26.7±1.5)g比實驗前體重(28.9±1.7)g下降7.61%。從第9天開始，過度訓(xùn)練各組小鼠均出現(xiàn)納差、少動、籠內(nèi)休息時間聚團(tuán)、豎毛、大便稀溏、肛門可見稀便沾著。第13天起，籠內(nèi)聚團(tuán)休息、倦臥、不動、眼神暗淡，毛松散、無光澤、被毛有脫落現(xiàn)象，對敲籠反應(yīng)遲鈍、大便稀溏、肛門口有稀便沾著、平靜時呼吸發(fā)出聲音，進(jìn)食量下降，嗜睡。第14天，對照組小鼠體重明顯減輕、極度衰弱、游泳時間縮短。

2.2 血乳酸含量，LDH總活性和CK總活性測定結(jié)果 用藥組小鼠過度訓(xùn)練第1、5、15天最大血乳酸含量與相同時間對照組過度訓(xùn)練小鼠相比，并無顯著差異(P＞0.05);用藥組小鼠在過度訓(xùn)練第10天最大血乳酸含量較對照組小鼠明顯降低(P＜0.01)。用藥組小鼠過度訓(xùn)練第1天LDH總活性測定值與對照組過度訓(xùn)練第1天小鼠相比，并無顯著差異(P＞0.05);用藥組小鼠過度訓(xùn)練第5天LDH總活性測定值與對照組相比有差異(P＜0.05);用藥組小鼠在過度訓(xùn)練10、15 d的LDH測定值較相同時間過度訓(xùn)練的對照組有較明顯升高(P＜0.01)。用藥組小鼠過度訓(xùn)練1 d CK總活性測定值與對照組相比，無顯著差異(P＞0.05);用藥組小鼠在過度訓(xùn)練5、10、15 d的CK總活性測定值較相同時間過度訓(xùn)練的對照組有較明顯升高(P＜0.01)。見表1。

表1 用藥組、對照組小鼠血乳酸含量，LDH和CK測定值比較

表1 用藥組、對照組小鼠血乳酸含量，LDH和CK測定值比較

與對照組相比:1)P＜0.05，2)P＜0.01

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2.3 肝臟和腎臟光鏡觀察結(jié)果 未服用當(dāng)歸紅花湯過度訓(xùn)練15 d組7例小鼠的肝右葉在光鏡下HE片均顯示肝細(xì)胞廣泛、彌漫性水變性，肝細(xì)胞明顯腫大，胞漿疏松、半透明;肝細(xì)胞索排列紊亂、擁擠、肝竇受壓變窄甚至消失，核變小，深染，匯管區(qū)及小葉間血管擴(kuò)張淤血，間質(zhì)有局灶性中性粒細(xì)胞浸潤。服用當(dāng)歸紅花湯過度訓(xùn)練15 d組7例小鼠的肝右葉在光鏡下HE片顯示有程度不等的肝細(xì)胞水變性，有5例小鼠為少量肝細(xì)胞水變性，其余2例范圍稍大，但多為正常肝細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)嗜酸性，HE染色較紅，含有粒狀或小塊狀的嗜堿性物質(zhì);肝索整齊明顯，無炎癥反應(yīng)，此組有5例小鼠在光鏡下可見肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯再生，再生的肝細(xì)胞體積較大，核大而染色較深，可見雙核，胞漿略呈嗜堿性。未服用當(dāng)歸紅花湯過度訓(xùn)練15 d組7例小鼠的腎臟皮質(zhì)部分在光鏡下HE片均顯示腎近曲小管、遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞水變性較嚴(yán)重，細(xì)胞體積變大，胞質(zhì)變得較透明、淡染;腎小球周圍、間質(zhì)及血管有炎癥反應(yīng)，系小灶性淋巴細(xì)胞浸潤，部分腎小管里有管型。服用當(dāng)歸紅花湯過度訓(xùn)練15 d組4例小鼠的腎臟在光鏡下HE片顯示腎小球及腎小管結(jié)構(gòu)正常，胞質(zhì)嗜酸性較強(qiáng)，游離面可見刷狀緣，皮質(zhì)血管有輕微淤血、擴(kuò)張;有3例小鼠腎近曲小管、腎遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞輕度水變性，腎小球結(jié)構(gòu)正常。

3 討論

當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels.(Chinese Angelica)為傘形科多年生草本植物的根。甘，辛，溫，歸心，肝，脾經(jīng);補血，活血，止痛，潤腸，通補兼施，有血中圣藥之稱，酒制能加強(qiáng)活血的功效;其藥理作用:破惡血，養(yǎng)新血《日華子本草》;治頭痛，和血補血《本草綱目》;潤燥滑腸《本草備要》。紅花Carthamus tinctorious L.(Safflower)為菊科2年生草本植物的干燥花，辛，溫，歸心，肝經(jīng);活血，散瘀止痛，《開寶本草》認(rèn)為酒煮服，亦主盅毒下血;《本草綱目》有活血潤燥，止痛散腫之說〔3～6〕。按中醫(yī)理論，以當(dāng)歸、紅花兩味藥為主要組方的當(dāng)歸紅花湯復(fù)方應(yīng)具有很強(qiáng)的活血、養(yǎng)血、補血的功效，《素問.至真要大論》指出當(dāng)歸、紅花等活血藥可以發(fā)揮“疏其血氣，令其調(diào)達(dá)，而至和平”的作用，而良好的血供不僅回收運動所致的局部代謝產(chǎn)物堆積，也帶來了運動所急需的氧及其他營養(yǎng)物質(zhì)，有效改善機(jī)體缺氧的狀況，改善機(jī)體的血液循環(huán)，增強(qiáng)機(jī)體抗疲勞、耐缺氧的能力，促進(jìn)過度訓(xùn)練后機(jī)體疲勞的恢復(fù)〔7～9〕。

短時力竭游泳訓(xùn)練模型，在無氧運動的疲勞階段，整個機(jī)體處于一種極度缺氧狀態(tài)，運動負(fù)荷與機(jī)體機(jī)能過分相適應(yīng)，以致疲勞連續(xù)積累引起一系列功能紊亂和病理狀態(tài);由于缺氧，使肝臟組織和細(xì)胞受到中等程度損傷，導(dǎo)致腎小管缺血缺氧性損傷，心肌細(xì)胞也由于缺血缺氧而產(chǎn)生損傷，免疫機(jī)能及運動能力下降等癥狀〔10～18〕。

當(dāng)歸紅花湯能有效改善小鼠糖酵解供能條件下力竭性游泳訓(xùn)練所致疲勞及肝腎病理改變，并對糖酵解供能條件下力竭性游泳訓(xùn)練小鼠的耐缺氧、抗疲勞和無氧運動能力有提高作用。

1 殷 勁，高 興.運動性疲勞研究〔M〕.成都:四川教育出版社，1993:1-4，107-10.

2 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會編.中華人民共和國藥典一部〔M〕.廣州:廣東科技出版社，化學(xué)工業(yè)出版社，1995:127，109.

3 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典〔M〕.上海:科學(xué)技術(shù)出版社，1997:993.

4 趙榮萊.臨床中藥學(xué)研究進(jìn)展〔M〕.北京:北京出版社，2000;4:602-3.

5 劉林亞.中醫(yī)藥抗運動性疲勞的研究與進(jìn)展〔J〕.中國臨床康復(fù)，2004;25(18):.

6 張世明，葉銳彬，運動性疲勞的中醫(yī)分型和診斷標(biāo)準(zhǔn)的研究〔J〕.中國運動醫(yī)學(xué)雜志，2003;22(1):47.

7 周志宏，劉建紅.補腎益元中藥對運動性疲勞腎氣不足證及運動性低血睪酮的影響〔J〕.中國運動醫(yī)學(xué)雜志，2004;23(1):96-8.

8 黃成鋼.中藥研究的必然趨勢——中藥復(fù)方系統(tǒng)研究〔J〕.中國藥學(xué)雜志，2000;35(7):433-4.

9 杜朝輝，韋會平.抗運動性疲勞中藥研究現(xiàn)狀〔J〕.中國運動醫(yī)學(xué)雜志，2008;27(2):260.

10 包怡敏，許家佗.中藥抗運動性疲勞的現(xiàn)代研究進(jìn)展〔J〕.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2008;14(10):800.

11 王紅燕，何祖新，劉 鑫.疲勞產(chǎn)生的機(jī)制及抗疲勞中藥的研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2007;27(2):58-9.

12 鄭虎占，董澤宏，余 靖.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用〔M〕.學(xué)苑出版社，1997:228，465-7.

13 朱 全，浦鈞宗.大鼠游泳訓(xùn)練在運動實驗中的應(yīng)用方法〔J〕.中國運動醫(yī)學(xué)雜志，1996:13(2):125-9.

14 陳玉春.當(dāng)歸對血虛小鼠免疫功能的影響〔J〕.中國中藥雜志，1994;19(12):739.

15 黃正良.紅花黃色素對小鼠耐缺氧、抗疲勞能力的影響〔J〕.中草藥，1985;16(10):19-21.

16 福州軍區(qū)總醫(yī)院.紅花乙醇提取液對小鼠耐缺氧能力的影響〔J〕.醫(yī)學(xué)資料，1975;(6):56.

17 徐萃華.當(dāng)歸注射液對大鼠體外培養(yǎng)肝細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的影響〔J〕.藥學(xué)通報，1984;19(2):53.

18 王桂香.當(dāng)歸對大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用〔J〕.甘肅醫(yī)藥，1986;5(1):24.