低分子肝素對兔動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊模型血清CRP、IL-6的影響

胡大軍 劉劍萍 廖 昆 賀立新

(湘南學(xué)院心腦血管疾病研究所 郴州市人民醫(yī)院心內(nèi)科，湖南 郴州 423000)

炎癥反應(yīng)的激活可能是導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定的主要因素〔1〕，炎癥因子可作為動(dòng)脈粥樣硬化疾病的標(biāo)志物〔2〕。研究顯示易損斑塊中的炎癥因子明顯增高〔3〕，同時(shí)降低炎癥因子可穩(wěn)定動(dòng)脈斑塊，改善預(yù)后。低分子肝素廣泛應(yīng)用于急性冠脈綜合征患者，但低分子肝素對易損斑塊動(dòng)物模型中的炎癥因子的影響未見報(bào)道，本研究探討低分子肝素在兔動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊模型中對炎癥因子C反應(yīng)蛋白(CRP)及白介素-6(IL-6)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 購入34只雄性純種新西蘭大白兔(湘雅醫(yī)學(xué)院動(dòng)物學(xué)部)，體重2.0～2.5 kg，月齡3～4個(gè)月。

1.2 動(dòng)物模型制作及分組 34只雄性純種新西蘭大白兔飼養(yǎng)兩周高脂飼料后，行主動(dòng)脈球囊內(nèi)皮拉傷術(shù)，參考國內(nèi)仲琳等〔4〕方法制作動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊兔模型。戊巴比妥鈉經(jīng)耳緣靜脈注射麻醉，在無菌條件下，于兔股動(dòng)脈搏動(dòng)最明顯處暴露股動(dòng)脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，近心端備用。動(dòng)脈夾夾住近心端股動(dòng)脈，靠近遠(yuǎn)心端結(jié)扎處作一動(dòng)脈切口并導(dǎo)入4F無菌球囊導(dǎo)管，放開動(dòng)脈夾并收緊下方細(xì)線，局部壓迫止血，將球囊導(dǎo)管插入15 cm左右，球囊用注射器推注10～15 ml空氣，往返回拉球囊3次損傷血管內(nèi)皮，撤出導(dǎo)管和導(dǎo)絲，結(jié)扎股動(dòng)脈并縫合傷口。陰性對照組麻醉固定，備皮，無菌條件下，暴露股動(dòng)脈，但不作動(dòng)脈切口，直接縫合皮膚。

觸發(fā)易損斑塊:動(dòng)脈粥樣硬化模型制作成功后連續(xù)2 d分別給予2次藥物觸發(fā)，中國斑點(diǎn)蝰蛇毒(CRVV)0.15 mg/kg腹膜下注射，30 min后耳緣靜脈注射組胺0.02 mg/kg。對照組處理同上，動(dòng)脈粥樣硬化組按上述給藥時(shí)間和部位給予同等劑量無菌生理鹽水注射。

34只易損斑塊模型兔為易損斑塊組(其中死亡3只)隨機(jī)分為易損斑塊模型對照組(n=7)、低分子肝素治療組(n=16)、辛伐他汀治療組(n=8)。低分子肝素治療組隨機(jī)分為B1組(8只)低分子肝素30 U/kg IH q12 h，B2組(8只)低分子肝素60 U/kg IH q12 h。辛伐他汀治療組灌胃給藥5 mg·kg－1·d－1。對照組同等劑量無菌生理鹽水皮下注射，q12 h，連續(xù)治療1 w。

1.3 標(biāo)本收集與檢測 模型制作成功后2 d及治療后1 w空腹抽耳靜脈血5 ml，檢測血脂、血常規(guī)等指標(biāo)，采用ELISA法檢測CRP、IL-6濃度(試劑購于晶美公司)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0軟件。計(jì)量數(shù)據(jù)以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用方差分析。

2 結(jié)果

低分子肝素、辛伐他汀治療易損斑塊模型組CRP、IL-6的濃度同治療前比較明顯下降，同治療后易損斑塊模型對照組亦明顯下降(P＜0.05)。低分子肝素、辛伐他汀治療易損斑塊模型組CRP、IL-6的濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，低分子肝素高劑量組CRP、IL-6的濃度較低劑量組下降明顯(P＞0.05)。見表1。

表1 藥物對兔易損斑塊模型中血清CRP、IL-6濃度的影響

表1 藥物對兔易損斑塊模型中血清CRP、IL-6濃度的影響

與同組治療前比較:1)P＜0.05;與模型對照組比較:2)P＜0.05，與B1組比較:3)P＜0.05

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3 討論

CRP是炎癥過程中最具有標(biāo)志性的生化物質(zhì)，被認(rèn)為與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后有著密切的關(guān)系〔5〕。CRP多方面參與了動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制，如能夠調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞攝入低密度脂蛋白，有助于泡沫細(xì)胞的形成;激活粥樣斑塊內(nèi)的補(bǔ)體系統(tǒng)導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定，增強(qiáng)不穩(wěn)定性斑塊的血管活性等。CRP可以直接誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，因此CRP是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素〔6〕。

IL-6是炎癥反應(yīng)中急性期細(xì)胞因子基因表達(dá)的主要調(diào)節(jié)因子，通過放大白細(xì)胞的集聚而起到對局部炎癥的刺激作用〔7〕。IL-6作為炎癥和巨噬細(xì)胞分化的主要調(diào)節(jié)因子在炎癥前發(fā)揮重要作用，促進(jìn)激活巨噬細(xì)胞的分化和浸潤，促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成。IL-6還可上調(diào)黏附分子和其他細(xì)胞因子的表達(dá)，這些細(xì)胞因子可能具有潛在的促進(jìn)炎癥反應(yīng)的作用。

本研究顯示提示低分子肝素可能類似他汀類藥物，具有一定的抗炎作用，與國外研究顯示低分子肝素具有一定的抗炎特性一致〔8〕。有研究提示低分子肝素抗炎作用可能與以下幾個(gè)方面有關(guān):①通過抗凝途徑介導(dǎo)的抗炎作用;②抗細(xì)胞黏附作用;③抗氧自由基作用;④抗脂質(zhì)代謝紊亂作用;⑤抗細(xì)胞增殖作用〔9〕。本研究提示低分子肝素在治療急性冠狀動(dòng)脈綜合征的病人中除了常規(guī)的抗凝作用外，同時(shí)具有降低炎癥因子CRP、IL-6濃度的作用，從而可起到穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊作用，有助于改善疾病預(yù)后。為低分子肝素治療急性冠狀動(dòng)脈綜合征提供新的臨床用藥理論依據(jù)。

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