復合因素聯(lián)合誘導慢性萎縮性胃炎實驗動物模型方法綜述

火明才 周語平 劉光煒 張永麗

【摘 要】目的：建立與人類慢性萎縮性胃炎疾病特點相似，且耗時較短、效果穩(wěn)定、成功率高的動物造模。方法：查閱中國知網(wǎng)近五年關于如何建立慢性萎縮性胃炎實驗動物模型方法文獻，并對所查閱文獻進行綜述。結果：不同因素聯(lián)合能夠較快建立慢性萎縮性胃炎實驗動物模型，而且模型效果穩(wěn)定，更符合人類慢性萎縮性胃炎病理基礎。結論：復合因素造模法更接近人類慢性萎縮性胃炎的病理變化，且造模時間較短、效果較穩(wěn)定、成功率較高。

【關鍵詞】復合因素；慢性萎縮性胃炎；實驗動物模型建立方法；綜述

慢性萎縮性胃炎（CAG）由慢性淺表性胃炎發(fā)展而來。常見病因包括[1]：①幽門螺桿菌慢性感染；②長期慢性刺激，如急性胃炎多次發(fā)作、喜食熱湯或刺激性食物，長期過度飲酒或吸煙，濫用NSAIDS等；③自身免疫性損傷；④含膽汁的十二指腸液反流對胃黏膜損傷等。 其發(fā)病機制目前尚不十分清楚。如何建立與人類慢性萎縮性胃炎疾病特點相似，且耗時較短、效果穩(wěn)定、成功率高的動物造模，是研究人類CAG的關鍵。目前較多使用的造模方法大體分為生物造模法、免疫造模法和理化學損傷法。但是要建立一個耗時較短、效果穩(wěn)定、成功率高的CAG實驗動物造模大都是這三種造模方法的聯(lián)合使用。

1 各因素誘發(fā)CAG實驗動物模型原理概述

①目前認為Hp感染與慢性胃炎、消化性潰瘍有關。與胃癌和胃惡性淋巴瘤的發(fā)生可能有一定的關系。流行病學提示：Hp感染→慢性胃炎→為粘膜萎縮→腸上皮化生→上皮內(nèi)瘤變→胃癌。Hp感染刺激炎癥性細胞因子前體產(chǎn)生而引起胃炎或者細胞直接損傷胃上皮而繼發(fā)引起炎癥[1]。②自身免疫性胃炎，胃液內(nèi)和血清抗內(nèi)因子抗體陽性，抗壁細胞抗體陽性[1]。

③甲基硝基亞硝基胍（MNNG）可直接與DNA作用的遺傳毒物，通過直接靶定DNA而誘發(fā)細胞產(chǎn)生遺傳毒性應激，并導致染色體異常、姐妹染色單體改變、點突變以及細胞死亡，其引起的與突變有關的主要DNA損傷類型是06-甲基鳥嘌呤，這種損傷與腫瘤尤其是胃癌的發(fā)生密切相關。④雷尼替丁飼料：MNNG誘發(fā)的胃癌癌前病變動物模型多為胃黏膜輕中度異型增生，腸化生不典型。大鼠腸化生模型，在低酸環(huán)境下誘發(fā)較典型[2]。雷尼替丁抑制胃酸，易致胃黏膜發(fā)生腸化生，常與MNNG兩種因素配合使用[3]。⑤鹽水：CAG與長期高鹽飲食也有密切的關系，甚至誘發(fā)癌變。單純高鹽水灌胃不良反應相對較輕，但造模時間比熱鹽水長[4]。因高熱亦能直接損傷胃黏膜損傷，因此可用高熱鹽水造模。⑥去氧膽酸鈉：去氧膽酸鈉模擬十二指腸膽汁反流損傷胃黏膜，造成膽汁反流性胃炎，長期使用可逐步建立CAG模型。⑦氨水：氨水模擬幽門螺桿菌感染時高氨環(huán)境對胃黏膜的毒性損害，使大鼠處于持續(xù)性胃炎狀態(tài)，長期飲用造成大鼠CAG模型。⑧非甾體類抗炎藥：非甾體類抗炎藥如吲哚美辛、水楊酸鈉、阿司匹林等能破壞和削弱胃粘膜的屏障作用，并且胃粘膜能合成和釋放某些前列腺素，而前列腺素有助于損傷胃黏膜的修復和維持其完整性。⑨乙醇：乙醇亦能破壞和削弱胃粘膜的屏障作用，嚴重時可造成胃粘膜的損傷，促進CAG模型的制備。⑩饑飽失常：不規(guī)律進食可促進胃黏膜的損傷 [3]。

2 生物造模法聯(lián)合理化損傷法誘導CAG模型

Hp，水楊酸鈉，乙醇

唐旭東[5]等造模前用抗生素灌胃抑殺大鼠胃內(nèi)正常菌群破壞其免疫防護作用，再用NSAID損傷胃黏膜屏障功能。模型組大鼠每只灌胃抗生素混合溶液2ml，每天1次，共3d。第4天起給予吲哚美辛預處理，隔日大鼠灌胃50g/L碳酸氫鈉溶液2ml，15min后灌胃Hp菌懸液1次（采用含cagA和vacA基因的Hp菌株，Hp培養(yǎng)48～72h后，用生理鹽水沖洗Hp菌落成菌懸液，比濁法調(diào)整菌懸液菌量為1×1012CFU/L），每只1ml，每2天1次，共6次。灌胃前后分別禁食12及4h。間隔4周后大鼠灌胃水楊酸鈉和乙醇混合溶液（用體積分數(shù)0.95乙醇，將2g水楊酸鈉加入100ml的含體積分數(shù)0.60乙醇溶液中配制成混合溶液），每天1次，每次2ml。灌胃前后1h禁食水，共給藥8周。14周制備出的Hp感染CAG模型。

3 免疫造模法聯(lián)合理化損傷法誘導CAG模型

3.1 去氧膽酸鈉，熱開水，佐劑抗原免疫

藺煥萍[6]等用 2g/L去氧膽酸鈉作飲料，每天灌胃55℃熱開水2ml/只進行刺激，并在造模第1 周及 第5 周每只大鼠皮下注射佐劑抗原（ 同種大鼠胃黏膜的生理鹽水組織勻漿與等量的完全弗氏佐劑配成的乳劑0.3ml） 免疫1 次。連續(xù)造模 90d（13周），成功建立CAG模型。

3.2 乙醇，水楊酸，去氧膽酸鈉，氨水，主動免疫法，饑飽失常

田漢文[7]等采用30%乙醇與2%水楊酸混合液，每周3次，每次10mL·kg-1灌胃；10mmol·L-1去氧膽酸鈉灌胃，每周2次，每次10mL·kg-1，灌胃；0.05%氨水作為大鼠日常飲用水自由飲用；結合主動免疫法每只大鼠足底注射同種大鼠胃黏膜與Freund佐劑以1：1配成乳劑抗原，每次0.3mL，3周1次，共2次，并令其饑飽失常。連續(xù)造模10周后模型建立成功

4 多理化學聯(lián)合造模法

4.1 去氧膽酸鈉，乙醇，

翦林宏[8]等人采用30%和60%乙醇損傷胃粘膜，用20 mmol/L去氧膽酸鈉模擬膽汁反流入胃，膽酸直接破壞胃粘膜的脂蛋白，卵磷脂轉變?yōu)槿苎蚜字筮M一步破壞胃粘膜胃炎模型組，第1～6周飲20 mmol/L去氧膽酸鈉溶液（每天現(xiàn)配），同時前4周每隔5 d，后2周每隔7 d按10 mL/kg劑量，灌胃60%的乙醇溶液1次，第7～13周每隔3 d輪換1次，分別飲用30%乙醇和20 mmol/L去氧膽酸鈉溶液，共13周。成功建立CAG模型。

4.2去氧膽酸鈉，乙醇，氨水

蘇劍東[9]等用20 mmol/L去氧膽酸鈉加熱至50℃，空腹灌胃2mL/次·d，連灌6個月；體積分數(shù)60%的乙醇，每周2及周5空腹灌胃各1次， 每次2mL，連灌6個月；以上均在灌胃后1h方予飼料及體積分數(shù)0.05%的氨水（NaOH與NH4Cl配制而成，日常飲用水，每天更換，連續(xù)6個月。成功建立CAG模型。

4.3 去氧膽酸鈉，氨水，饑飽失常法

聶芳敏[10]等將造模組大鼠分為三組，各組都于20mmol/L 的去氧膽酸鈉2ml 每日空腹灌胃（灌胃前后一小時禁食），而不同組大鼠飲用水分別為 0.02%氨水、0.05%氨水、0.1%氨水，結合饑飽失常（同時單日禁食自由飲水，雙日自由進水足量喂食），通過對比發(fā)現(xiàn)，0.1%氨水模型組、0.05%氨水模型組較0.02%氨水模型組大鼠模型典型，但0.1%氨水模型組大鼠死亡率高達50%，實驗證明選用0.05%氨水造模成功率較，造模時間較短，8 周可成功建立CAG模型。

4.4 去氧膽酸鈉，乙醇，熱鹽水，饑飽失常法

劉磊[11]等人采用20mmol/L去氧膽酸鈉和15%、60%乙醇并結合熱鹽水灌胃及饑飽失常法成功建立大鼠慢性萎縮性胃炎模型。模型組大鼠第1～5 周自由飲用20mmol/L脫氧膽酸鈉溶液（ 每天現(xiàn)配）；第6～13周每隔3d輪換1次，分別自由飲用20mmol/L脫氧膽酸鈉溶液和15%乙醇溶液；同時前5周每5d，后8周每7d，用150g/L氯化鈉溶液加無水乙醇配制成60% 的乙醇溶液，水浴恒溫55℃后，按10 ml/kg劑量灌胃；配合饑飽失常法，即1～8周2 d飽食 1d禁食，9～13周2d飽食1d禁食、水。13周成功建立CAG模型。

4.5 MNNG，鹽酸雷尼替丁，饑飽失常

成映霞[12]等用滅菌水配制0.1g/LMNNG溶液避光給大鼠自由飲用，1d配制1次。給以鹽酸雷尼替丁膠囊0.03g/kg 灌胃，1d1次。采用饑飽失常喂養(yǎng)法，足量喂養(yǎng)2d，禁食1d。至第12周，大鼠CAG模型建立并胃黏膜腸化生形成。

4.6 去氧膽酸鈉，酒精，水楊酸鈉，氨水

馮秀雪[13]等應用 30% 酒精、2% 水楊酸鈉，20mmol/L 的脫氧膽酸鈉及 0.1% 氨水，22 周后成功建立了萎縮性胃炎模型：第 1～10 周用 2% 水楊酸鈉和 30% 酒精混合溶液進行灌胃，第 11～22 周用20mmol/L 去氧膽酸鈉溶液 （ 每天現(xiàn)配 ） 灌胃 ；按1ml/100g 的標準灌胃，1 次 /d。自由飲用 0.1% 氨水 22 周。22 周后成功建立萎縮性胃炎模型。

4.7 MNNG交替鹽水交替吲哚美辛或水楊酸鈉，雷尼替丁，鹽水，氨水交替阿司匹林，

魏玥[3]等用去離子水配成120μg/ml的MNNG溶液5 ml/kg灌胃，每日1次。聯(lián)合以下因素造模：①0.03%雷尼替丁飼料供大鼠自由食用。②10%～15%的鹽水灌胃，每只大鼠2～2.5 ml，每日1次（此因素可與MNNG灌胃交替使用）。③0.05%～0.1%的氨水供大鼠自由飲用。④0.05%吲哚美辛或2%水楊酸鈉溶液灌胃，每次8 ml/kg，每日1次（此因素可與MNNG灌胃交替使用）；或0.6%阿司匹林水溶液供大鼠自由飲用（此方式可與氨水自由飲用交替使用）。能進一步縮短CAG動物模型制備時間。

5 討論

人類CAG病因一般不是單一的病因所致，而常是以某種因素為主，多種病因長期刺激所致。文章綜述不同誘導因素聯(lián)合建立CAG實驗動物模型，更接近人類CAG的病理基礎，較符合人類CAG的實驗研究。

由于CAG的病因尚未完全明確，造模方法亦有較大的差別，選擇何種造模方法，視實驗設計所定。就文獻報道過的造模方法對其模型的穩(wěn)定性、造模時間長短、造模成功率高、動物死亡率以及與人類CAJ病理特征相似程度等等，文獻報道還是有明顯差別的。就以上綜述造模方法依據(jù)參考文獻報道討論：聶芳敏造模方法時間最短為8周，而且實驗發(fā)現(xiàn)選用5%氨水較其他體積分數(shù)的氨水動物的死亡率低。藺煥萍和成映霞造模方法時間較短而且模型出現(xiàn)腸上皮化生或接近癌前病理表現(xiàn)。唐旭東報道14周制備出的Hp感染CAG模型，Hp感染率高、定植時間較長，大鼠模型建立過程與人類CAG發(fā)病途徑相似，病理表現(xiàn)與人類CAG相似，與馮秀雪報道的造模方法二者腸化生和異型增生等病理都表現(xiàn)不典型，但馮秀雪造模方法較穩(wěn)，預實驗停止刺激后觀察8周，大鼠萎縮程度無明顯改善。而且實驗還發(fā)現(xiàn)選用30%的酒精對于造模動物的肝臟影響小，從而減少了非實驗因素對實驗數(shù)據(jù)的影響。翦林宏、蘇劍東、聶芳敏、劉磊、成映霞和馮秀雪報道的造模方法都簡單經(jīng)濟，但造模時間有較大的差別。翦林宏和蘇劍東都報道其造模方法成功率高達90%甚至100%，而且模型的穩(wěn)定性也良好。就每種模型方法跟人類CAG發(fā)病因素的相符程度而論，筆者認為復合因素聯(lián)合誘導慢性萎縮性胃炎實驗動物模型更接近人類慢性萎縮性胃炎的病理變化，且造模時間較短、效果較穩(wěn)定、成功率較高。

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作者簡介：

火明才（1985-），男，在讀碩士研究生，研究方向為經(jīng)方防治消化系疾病。