藏藥寬筋藤中總黃酮和蘆丁含量的測(cè)定

鐘文　翟瑤　盧永昌

摘要：對(duì)藏藥寬筋藤（Fallopia aubertii）中總黃酮和蘆丁的含量進(jìn)行了測(cè)定。確定了總黃酮的比色測(cè)定法和蘆丁的高效液相色譜法，總黃酮的回歸方程Y=0.080 5 X+0.000 9， R2=0.999 8。蘆丁的色譜分離條件流動(dòng)相為甲醇∶0.1%磷酸溶液（40∶60，V/V），回歸曲線(xiàn)為Y=131 0.8 X+1.553 9，R2=0.999 8，總黃酮和蘆丁分別在0.004～0.032 mg/mL、0.4～3.0 μg范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，該方法簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確，可作為寬筋藤的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：寬筋藤（Fallopia aubertii）；總黃酮；蘆丁；HPLC

中圖分類(lèi)號(hào)：O657.7+2；O657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）09-2151-02

寬筋藤（Fallopia aubertii）為蓼科植物木藤蓼的莖，在藏藥中又名“勒哲”，是藏藥中的常用藥材。在藏藥藥典《晶珠本草》中記載，其功效為清除隆熱癥[1]。黃酮類(lèi)化合物在植物界分布廣泛，對(duì)植物生長(zhǎng)具有重要作用，同時(shí)也具有一定的抗菌防病功效[2]。蘆丁是黃酮化合物中的一種，有降低毛細(xì)血管通透性和脆性的作用[3]。對(duì)寬筋藤中的總黃酮和蘆丁含量的測(cè)定尚未見(jiàn)報(bào)道，為控制該藥材的質(zhì)量，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[4-11]，采用比色法測(cè)定寬筋藤中的總黃酮，HPLC法測(cè)定蘆丁的含量，該方法的建立為控制寬筋藤的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與材料

Agilent 1200高效液相色譜儀（含自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度泵、DAD檢測(cè)器）；T6新銳-紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器）；KQ-300B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；索式提取器。

甲醇、乙醇、磷酸為色譜級(jí)試劑；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為化學(xué)純。

寬筋藤于2011年10月采于青海省互助北山，由青海民族大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院毛繼祖教授鑒定，蘆丁對(duì)照品由中國(guó)藥品生物檢定所提供。

1.2 方法

1.2.1 比色法測(cè)定總黃酮含量

1）對(duì)照品溶液的制備。稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品20 mg，用70%乙醇溶解并定容于100 mL的容量瓶中，搖勻，得0.2 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備。精確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加入1 mL 5% NaNO2溶液， 搖勻，放置6 min；加入1 mL 10% Al（NO3）3溶液，搖勻，放置6 min；加入10 mL 5% NaOH溶液，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。以試劑空白作為參比溶液。用1 cm比色皿，在510 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得到回歸方程Y=0.080 5C+0.000 9，R2=0.999 8。結(jié)果表明，蘆丁對(duì)照品在0.004～0.032 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

3）樣品測(cè)定方法。稱(chēng)取寬筋藤干粉1.0 g置于100 mL圓底燒瓶中，加入30 mL 70%乙醇，加熱回流 1 h，反復(fù)提取3次，趁熱過(guò)濾，濾液用70%乙醇定容于100 mL容量瓶中，得到黃酮提取液，待用。

1.2.2 HPLC法測(cè)定蘆丁含量

3）樣品溶液的制備。稱(chēng)取寬筋藤干粉10 g，加入300 mL 70%乙醇反復(fù)回流提取1 h，重復(fù)3次，濃縮蒸干，再用甲醇定容于50 mL容量瓶中，所有需測(cè)定的溶液均先過(guò)0.45 μm的濾膜[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 總黃酮的測(cè)定結(jié)果

2.1.1 重現(xiàn)性試驗(yàn) 稱(chēng)取寬筋藤干粉1 g，共5份，分別按上述方法測(cè)定吸光度。結(jié)果RSD值為1.42%，重現(xiàn)性試驗(yàn)符合要求。

2.2 蘆丁的HPLC法測(cè)定結(jié)果

2.2.4 樣品中蘆丁含量的測(cè)定 根據(jù)上述方法，測(cè)得寬筋藤中蘆丁含量為0.081%。

3 小結(jié)與討論

研究結(jié)果表明，寬筋藤中總黃酮含量為0.620%，蘆丁含量為0.081%。由于本試驗(yàn)材料為植物的莖部，相對(duì)于植物全草來(lái)說(shuō)，黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量不多。

3.1 流動(dòng)相選擇

在流動(dòng)相的選擇過(guò)程中，選擇甲醇與水適量比例，反復(fù)試驗(yàn)，使雜質(zhì)峰與所測(cè)物質(zhì)峰充分分離，加入適量酸可達(dá)到最佳分離效果，定量更準(zhǔn)確。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

用蘆丁的甲醇溶液在紫外可見(jiàn)光分光光度儀上掃描，發(fā)現(xiàn)在254 nm和360 nm處都有吸收，由于在液相上254 nm處雜質(zhì)峰比較多，所以選用360 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 帝瑪爾·丹增彭措.晶珠本草[M]. 毛繼祖，譯.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2012.329.

[2] EMILIA J M，WENZEL U，RUIZ-GUTIERREZ V，et al. O-live fruit extracts inhibit proliferation and induce apoptosis in HT-29 human colon cancer cells[J]. Journal of Nutrition，2006， 136（10）：2553-2557.

[3] 盧永昌，閆 紅.HPLC測(cè)雪蓮中蘆丁和槲皮素的含量[J].華西藥學(xué)雜志，2007，22（1）：79-80.

[4] 涂 波，汪志勇.當(dāng)歸補(bǔ)血湯顆粒中黃芪甲苷和黃芪多糖的含量測(cè)定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（18）：115.

[5] 黃艷菲，彭鐮心，丁 玲，等.蕎麥和商品苦蕎麥中蘆丁含量的測(cè)定[J].現(xiàn)代食品科技，2012，28（9）：1219-1222.

[6] 孫 蕓，劉 藝，燕雪花，等.新疆沙棗總黃酮含量測(cè)定及提取工藝優(yōu)化[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，51（16）：3570-3572.

[7] 王 薇，于加平，李 勇，等.黃花忍冬果中總黃酮的提取工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（28）：13790-13792.

[8] 陳英紅，董 芳，姜翔之，等.HPLC法測(cè)定貫葉金絲桃中蘆丁和金絲桃苷的含量[J].中國(guó)藥師，2012，15（10）：1429-1430.

[9] 田振坤，顧媛媛，宋成貴，等.HPLC測(cè)定鳳仙透骨草中蘆丁、槲皮素和山奈酚的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（18）：106-108.

[10] 光 琴，周亞球. HPLC測(cè)定羅布麻葉中總黃酮的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（3）：103.

[11] 李利華.HPLC測(cè)定魚(yú)腥草不同部位綠原酸和蘆丁的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（19）：94-97.