組合無創(chuàng)性方法臨床評價祛斑化妝品的功效

程樹軍　潘芳　秦瑤

[摘要]目的：組合運用無創(chuàng)性皮膚檢測方法臨床評價化妝品的美白祛斑功效。方法：選擇平均年齡40歲的女性志愿者25名，連續(xù)使用化妝品8周，使用產(chǎn)品前和使用后第4周、8周分別用CM-2600d分光光度計測量皮膚的L*、a*、b*、△L、△a、△b、△E值，用SIAscopy儀分析色斑處黑素總量、血紅蛋白和膠原蛋白，對照皮膚老化圖譜進(jìn)行色斑臨床分級。結(jié)果：CM-2600d檢測色斑顏色顯示試用產(chǎn)品后色斑部位L*值升高，a*值下降。SIAscopy儀檢測表明總黑素含量、膠原蛋白和血紅蛋白下降，臨床分級顯示色斑評分降低。結(jié)論：組合方法檢測皮膚色斑顏色變化結(jié)合臨床評估可以客觀評價美白祛斑產(chǎn)品的功效。

[關(guān)鍵詞]化妝品；色斑；皮膚分光光度計；皮內(nèi)光譜分析

[中圖分類號]R136.4 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1008-6455（2013）09-0953-04

具有美白祛斑功能的化妝品倍受東方女性推崇，采用反映皮膚生物物理特性的檢測方法，輔助臨床觀察，兩者相互結(jié)合可為化妝品有效性評估提供客觀的數(shù)據(jù)支持。皮膚顏色的測定通常采用三色比色法（如CM-2600d）和窄波段反射分光光度計（如：Maxmeter MX18）測定[1]，近年來，皮內(nèi)光譜分析（SIAscopy）、皮膚感光成像（Visia）臉色分析儀等新的顏色解析技術(shù)得到應(yīng)用[2]，使色斑的量化更為客觀。本研究通過對某品牌祛斑產(chǎn)品的功效評價，比較不同色斑測定儀和檢測指標(biāo)的組合應(yīng)用，為建立標(biāo)準(zhǔn)化的祛斑功效評價方法提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 志愿者篩選

1.1.1入選條件：25例年齡在36～50歲的女性，III型或IV型皮膚，色斑臨床分級在3級以上。以室內(nèi)活動為主，無嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病、急性炎癥、免疫缺陷或其他皮膚病；無過敏性疾?。患韧鶡o護(hù)膚類化妝品過敏史；近2個月內(nèi)未參加藥物臨床實驗或其他化妝品功效評價；自愿參加并能按照試驗要求完成試驗內(nèi)容，并在知情同意書上簽字。

1.1.2排除條件：妊娠及哺乳期婦女；6個月內(nèi)接受過任何形式的皮膚治療，試驗期間可能長期暴露于紫外線下（如旅游、度假）導(dǎo)致日曬增加；試驗期間受試部位應(yīng)用抗炎藥物，試驗期間全身應(yīng)用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑類藥物；不能嚴(yán)格遵守試驗要求，配合試驗。

1.2儀器設(shè)備：日本美能達(dá)分光測色計CM-2600d，可計量皮膚對360～740nm波長范圍光的反射率，獲得皮膚表面的分光光度曲線，并將其轉(zhuǎn)化為L*，a*，b*值，從而對皮膚顏色變化進(jìn)行定量。SIAscopy皮內(nèi)光譜分析儀（英國Molemate公司），結(jié)合了皮內(nèi)血管成像、接觸性分光光度測定法和超光譜成像技術(shù)，可獲得高分辨率的圖像，并解析和顯示表皮黑素、血紅蛋白、膠原蛋白和真皮黑素。

1.3 試驗方法

1.3.1研究設(shè)計：志愿者全面部試用產(chǎn)品，選取額頭、面頰和色斑為測試部位。分別于試驗前及試用產(chǎn)品后4周、8周測定色差值、采集光譜圖像和臨床評分。每位志愿者每一次測試區(qū)域位置盡量一致，以志愿者前后和頸部皮膚為對照。所有操作由同一個人完成，以減少偶然誤差。測試當(dāng)天，志愿者不使用產(chǎn)品，清潔測試部位后需在室內(nèi)[溫度（23±2）℃，濕度（55±5）%]平衡至少30min以適應(yīng)檢測室環(huán)境，1h后檢測。

1.3.2 產(chǎn)品使用方法：產(chǎn)品分美白精華液和祛斑滋潤霜兩款，按照使用流程，每天早晚各一次，均先抹美白精華液，再涂祛斑滋潤霜，連續(xù)使用8周。

1.3.3 功效評估方法

1.3.3.2 皮內(nèi)光譜檢測：在使用產(chǎn)品前和使用產(chǎn)品4周、8周后用SIAScopy儀獲取孤立色斑部位的圖像和數(shù)據(jù)，用圖像分析軟件分析解析色斑的變化。

1.3.3.3 臨床色斑評分：根據(jù)文獻(xiàn)[3]臨床評價面頰色斑密度、面頰色斑、面部孤立色斑與周圍皮膚色差和面部孤立色斑的大小4項指標(biāo)的變化。面頰色斑密度（0-7級）指眼眶之下，耳邊緣至鼻翼之內(nèi)面頰的色斑密度；面頰色斑（0-5級）指顴骨區(qū)域附近色素沉著所形成的相對較大的色斑，依次從數(shù)量、色差和大小評估色斑的嚴(yán)重程度；面部孤立色斑與周圍皮膚色差（0-5級）指色斑與其周圍皮膚的色差，準(zhǔn)確定位色斑并重點評估色斑與其周圍皮膚的色差，不考慮色斑大??；面部孤立色斑的大?。?-7級）指面部孤立色斑的大小，包括面頰、前額等部位，準(zhǔn)確定位色斑并重點評估色斑的大小，但應(yīng)排除痣、雀斑、瘢痕所形成的色素沉著和所有病理性色素沉著的情況。計算色斑變化率=（檢測值-基礎(chǔ)值）/基礎(chǔ)值×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析：利用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件包對分光測色計的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，采用配對t檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。并對SIAScopy圖像，通過Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)對不同色素結(jié)構(gòu)所占分析面積的比值進(jìn)行統(tǒng)計。儀器檢測與臨床評估間是否具有一致性，采用Kappa一致性檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 色斑無創(chuàng)性儀器檢測：使用產(chǎn)品不同時間面部皮膚顏色量值的數(shù)據(jù)見表1。結(jié)果顯示頸部皮膚色差儀檢測值無明顯變化，表明試驗期間個體皮膚顏色自然波動不明顯，排除因季節(jié)變化引起的皮膚自然變化。使用產(chǎn)品4周后面頰部、額頭部和色斑部位的L值明顯高于基礎(chǔ)值，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；從變化趨勢看，產(chǎn)品對不同部位的改善效果從高到低依次為色斑部位、面頰和額頭。8周后色斑部位和面頰部a*值明顯低于基礎(chǔ)值，差別有統(tǒng)計學(xué)意義；b*值變化無統(tǒng)計學(xué)意義?！鱈、△a和△b值變化分別與L*a*b*值變化趨勢類似。使用產(chǎn)品8周后色斑部位和面頰部ΔE的變化具有統(tǒng)計學(xué)意義（見表1）。

25名志愿者共分析了45個色斑點，分別獲得色斑、總體黑素、真皮黑素、血紅蛋白和膠原蛋白的圖像。試用產(chǎn)品4周和8周后與試用前相比，色斑解析圖片均顯示顏色變淺和變小的變化（見圖1）。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，各種解析色基占分析面積的百分率明顯下降（P<0.01），第8周與第4周相比有所下降，但下降不明顯（見表2）。提示產(chǎn)品對總體黑色素和膠原蛋白改善效果較好，對真皮黑色素和真皮血色素的改善效果次之。

2.2 研究者臨床評估：25名志愿者面部色斑臨床分級見表3。從分級變化分析，色斑臨床分級均有不同程度下降，對孤立色斑大小和色斑色差的改善較為明顯，對色斑密度和面頰色斑的改善次之，使用8周后的效果更顯著。從色斑變化率的趨勢分析，改善程度從高到低順序與此一致。選擇色斑部位的顏色量值和色斑/分析面積分別與色斑色差臨床分級進(jìn)行一致性檢驗，得出Kappa值為0.6215和0.6376，SIAScopy圖像解析的一致性更佳。

3 討論

利用無創(chuàng)性方法臨床定量檢測皮膚性能是化妝品功效評價的趨勢[4]。皮膚顏色測定是比較客觀分析美白效果的方法，常用的幾種方法各有其優(yōu)勢，如采用三色比色計可反映皮膚顏色空間多維的變化，而窄波段反射分光光度計可檢測皮膚黑色素的紅色素的變化。

本研究對祛斑產(chǎn)品影響皮膚色素斑的動態(tài)觀察，組合采用了CM-2600d三色測色儀和SIAscopy皮內(nèi)光譜分析儀。CM-2600d分光光度計是目前最常用的一種皮膚顏色測定分析儀，靈敏性和重復(fù)性比較好[5]，但其無法提供皮下色素結(jié)構(gòu)變化的詳細(xì)信息。SIAscopy技術(shù)同時運用可見光和紅外線對皮膚內(nèi)的血液、黑素和膠原進(jìn)行分析[2，4]，它可以對被測皮膚孤立色斑采集一張高解析度的白光照片，同時采集4張色基圖片，分別顯示黑素細(xì)胞、血紅蛋白、膠原和真皮乳頭層的黑素。真皮乳頭層的黑素圖像主要用于黑素瘤等色素性皮膚損傷的早期診斷[6]，而表皮黑素、血紅蛋白和膠原圖像主要用于正常皮膚的年齡變化、產(chǎn)品使用過程中的色基動態(tài)變化等[7]。本研究在色差儀結(jié)果證明產(chǎn)品具有美白效果的基礎(chǔ)上，針對色斑進(jìn)行圖像采集和色基解析，結(jié)合圖像觀察和統(tǒng)計分析結(jié)果提示使用祛斑產(chǎn)品后，不同色斑基色所占分析面積的比值均有不同程度下降。再對照亞洲女性皮膚老化標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行色斑臨床分析，較全面和科學(xué)地提供了產(chǎn)品評價的完整信息。

決定皮膚顏色的因素不僅包括黑色素和血紅蛋白，還包括類胡蘿卜素、真皮血管和真皮纖維等，本研究所用的檢測儀器和方法有機(jī)地結(jié)合了分光光度計、皮膚鏡、接觸性間歇性分光光度測定和高光譜成像系統(tǒng)的優(yōu)點。多種皮膚檢測技術(shù)的組合逐漸成為研究皮膚自然老化，測試護(hù)膚品和皮膚藥物等各種產(chǎn)品功效測試的趨勢[7-8]。本研究結(jié)果表明采用不同無創(chuàng)性檢測技術(shù)的組合可有效提高美白祛斑產(chǎn)品臨床評價的客觀性和科學(xué)性，為建立標(biāo)準(zhǔn)化的祛斑功效評價方法提供了臨床依據(jù)。

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[收稿日期]2013-02-16 [修回日期]2013-04-24

編輯/李陽利