骨橋蛋白及白細(xì)胞介素—18在尋常型銀屑病患者血清中的表達(dá)及臨床意義

張麗 簡練 孫樂棟 張苑

[摘要]目的：檢測尋常型銀屑病患者外周血骨橋蛋白（OPN）、白細(xì)胞介素- 18（ IL- 18）的表達(dá)水平，并探討其臨床意義。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA）法檢測30例尋常型銀屑病患者（其中進(jìn)行期18例， 靜止期12例）及30例對正常照者血清OPN、IL-18的表達(dá)水平。結(jié)果：尋常型銀屑病組患者血清骨橋蛋白和IL-18的表達(dá)水平明顯高于正常對照組（P<0.001）；進(jìn)行期銀屑病患者骨橋蛋白和IL-18的表達(dá)水平明顯也高于靜止期（P<0.001），且骨橋蛋白、IL-18的表達(dá)水平和銀屑病的活動性均呈顯著正相關(guān)（P均<0.001）；骨橋蛋白和IL-18的表達(dá)水平也呈顯著正相關(guān)（P<0.001）。結(jié)論：OPN與IL-18在尋常型銀屑病中的表達(dá)上調(diào)提示它們可能參與了尋常型銀屑病的發(fā)病過程，且二者在該病的發(fā)生中起著協(xié)同作用。聯(lián)合檢測血清OPN、IL- 18 可以作為診斷銀屑病活動性的有效的指標(biāo)之一。

[關(guān)鍵詞]尋常型銀屑病；骨橋蛋白；白細(xì)胞介素-18

[中圖分類號]R758.63 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1008-6455（2013）09-0947-03

銀屑病是一種常見的慢性炎癥性疾病，其病因和發(fā)病機制尚未完全清楚。近年來的研究表明，T 細(xì)胞活化及T細(xì)胞-角質(zhì)形成細(xì)胞調(diào)節(jié)水平異常等在銀屑病發(fā)病機制中起著非常重要的作用。骨橋蛋白（osteopontin，OPN）和白細(xì)胞介素（interleuk in，IL-18）已被證實在炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病發(fā)病過程中起重要作用[1-3]。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA）法檢測對30例尋常型銀屑病患者（其中進(jìn)行期18例， 靜止期12例）及30例對正常照者血清OPN、IL-18的表達(dá)水平，以探討其在尋常型銀屑病發(fā)生及發(fā)展過程中的作用。

1 資料和方法

1.1 研究對象：30例尋常型銀屑病患者均來自本院皮膚科門診，其中男15例，女15例，進(jìn)行期18例，靜止期12例，均符合《臨床皮膚病學(xué)》中尋常型銀屑病的診斷和分期標(biāo)準(zhǔn)[4]。年齡18～41 歲，平均28.6歲，中位年齡28.0歲。所有患者3個月內(nèi)未系統(tǒng)使用皮質(zhì)類固醇、免疫抑制劑、維A 酸類及VitD3類藥物， 亦未接受其他系統(tǒng)治療。正常對照組為來我院體檢的健康志愿者，共30例，其中男16例，女14例； 年齡18～39歲，平均年齡28.1歲，中位年齡27.0歲?；颊呓M與正常對照組年齡與性別構(gòu)成具有可比性。研究遵循程序符合單位負(fù)責(zé)人體試驗委員會所制定的倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，且所有受試者均已簽知情同意書。

1.2 主要試劑：OPN 與IL-18試劑盒均購于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 實驗方法：兩組均用EDTA抗凝管抽取5ml靜脈血，離心后取血清，放入EDTA管中，-80℃冰箱凍存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）法檢測血清中的OPN 和IL-18水平，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理：數(shù)據(jù)以（x±s）表示。采用SPSS 13.0分析軟件包進(jìn)行統(tǒng)計處理，各組間血清OPN、IL-18 比較采用兩樣本t檢驗，骨橋蛋白和IL-18的相關(guān)性分析采用pearson相關(guān)分析。性別、年齡與骨橋蛋白和IL-18的相關(guān)性及骨橋蛋白、IL-18與銀屑病的活動性的相關(guān)性采用speaman相關(guān)分析。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清OPN 與IL-18表達(dá)水平：結(jié)果見表1。同正常對照組相比，尋常型銀屑病組OPN 與IL-18 的表達(dá)水平顯著增高，且進(jìn)行期銀屑病組患者血清OPN 與IL-18表達(dá)水平明顯高于靜止期。

2.2 OPN、IL-18與銀屑病之間的相關(guān)性分析：正常對照組血清OPN與IL-18無相關(guān)性（P=0.736）；尋常性銀屑病患者中OPN和IL-18的表達(dá)水平與年齡和性別無相關(guān)性（P>0.05）；OPN、IL-18均與銀屑病的活動性呈明顯正相關(guān)（P均<0.001；r分別為0.849和0.841）；OPN和IL-18也呈顯著正相關(guān)（P<0.001；r=0.815），見圖1。

3 討論

銀屑病的病因及發(fā)病機制并不完全清楚， 目前普遍認(rèn)為它是一種發(fā)生在遺傳基礎(chǔ)上的慢性復(fù)發(fā)性炎癥性、增生性皮膚病。近年來的研究表明，T 細(xì)胞活化及T細(xì)胞-角質(zhì)形成細(xì)胞調(diào)節(jié)水平異常等在銀屑病發(fā)病機制中起著非常重要的作用。T細(xì)胞活化后分泌大量的細(xì)胞因子。根據(jù)細(xì)胞因子的分泌模式，人體內(nèi)的Th 細(xì)胞可分為三個亞群，即Thl、Th2、Th0 亞群。正常機體內(nèi)，Thl/Th2 網(wǎng)絡(luò)保持著動態(tài)平衡狀態(tài)。當(dāng)Thl/Th2 平衡失調(diào)時，即某一亞群功能增強，另一亞群功能減弱（被稱作Thl/Th2 漂移），即可導(dǎo)致許多疾病的發(fā)生[5]。銀屑病患者體內(nèi)普遍存在“Th1偏倚”現(xiàn)象，屬于典型的Thl反應(yīng)模式，即Th1 細(xì)胞免疫應(yīng)答強于Th2細(xì)胞免疫應(yīng)答。

OPN是一種新近發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞外基質(zhì)蛋白同源的促炎細(xì)胞因子，包含RGD（Arg-Gly-Asp）序列，又稱為早期T淋巴細(xì)胞活化因子或分泌性磷蛋白I， 屬于Thl型細(xì)胞因子。在細(xì)胞表面有許多OPN的受體，包括整合素ɑvβ3、ɑvβ1、ɑ4β1、ɑ9β1、ɑ8β1和CD44等。OPN可通過RGD序列與多種類型細(xì)胞的整合素受體相互作用而調(diào)節(jié)細(xì)胞的聚集、黏附、遷移、增殖，在炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病中起重要的作用?，F(xiàn)有研究認(rèn)為，OPN 是免疫細(xì)胞募集及啟動Th1型細(xì)胞免疫的關(guān)鍵細(xì)胞因子[6]。其可誘導(dǎo)Thl型細(xì)胞因子（IL-12、INF-γ）的產(chǎn)生，抑制Th2型細(xì)胞因子（IL-10）的表達(dá)，從而在Thl/Th2失衡性疾病的發(fā)病中起作用[7]。本研究發(fā)現(xiàn)， 銀屑病患者OPN 血清水平高于正常對照組，且OPN與銀屑病的活動性呈顯著正相關(guān)，與相關(guān)研究結(jié)果相符[8-9]，提示OPN參與了銀屑病的發(fā)生并與疾病的發(fā)展有關(guān)。

白細(xì)胞介素（Interleukin-18，IL- 18） 是一種復(fù)雜的前炎癥細(xì)胞因子，在炎癥反應(yīng)中起著雙向調(diào)節(jié)作用，最早被命名為IFN-γ誘導(dǎo)因子。主要由巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞產(chǎn)生，T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、成骨細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞以及脂肪細(xì)胞也可產(chǎn)生。主要的效應(yīng)細(xì)胞為T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）。大量的研究資料表明IL-18是一種輔助性T細(xì)胞1型的（Thl）細(xì)胞因子，能誘導(dǎo)Thl細(xì)胞、NK細(xì)胞分泌IFN-γ，IFN-ɑ、IL-2粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子，IL-2等多種細(xì)胞因子，抑制IL-4和IL-10的產(chǎn)生，并促進(jìn)Thl細(xì)胞增殖。過度表達(dá)的IL-18 可直接作用于Th1 細(xì)胞，增強FasL 表達(dá)，從而促進(jìn)FaS配體（FasL）介導(dǎo)的NK細(xì)胞的殺傷活性，啟動細(xì)胞凋亡[10-12]?，F(xiàn)已證明，在IL-12刺激下Thl細(xì)胞，可強烈而持久地表達(dá)IL-18受體，故IL-18與IL-12有協(xié)同效應(yīng)[13]。近來的研究還發(fā)現(xiàn)，在一定的條件下，IL-18還參與了Th2型細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)，IL-18可以產(chǎn)生IgE和Th2細(xì)胞因子，比如IL-4、IL-5、LI-13等[14]。也有研究發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞也可分泌IL-18，并參與了銀屑病皮損局部的Thl免疫反應(yīng)[15-16]。本研究發(fā)現(xiàn)， 銀屑病患者IL-18 血清水平高于正常對照組，并與銀屑病的活動性明顯相關(guān)，提示尋常性銀屑病患者血清中IL-18水平與銀屑病病情活動有關(guān)，可望為評估尋常性銀屑病活動性的指標(biāo)。也表明其在銀屑病發(fā)病機制中起到一定的作用。

值得關(guān)注的是IL-18 可誘導(dǎo)活化T 細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，促進(jìn)Th1亞群的分化，增加OPN的表達(dá)。OPN可通過核轉(zhuǎn)因子-kB（NF-κB）的活化而上調(diào)細(xì)胞因子（IL-1和IL-18）和趨化因子（CCL1家族和CXCL家族）的表達(dá)，兩者相互作用，引發(fā)病灶部位的炎癥反應(yīng)并可加重病情[17]。我們研究也發(fā)現(xiàn)OPN和IL-18的表達(dá)水平呈有顯著的正相關(guān)，提示兩者促炎作用有協(xié)同作用。因此，聯(lián)合檢測 OPN和I L- 18的表達(dá)水平，并深入研究相關(guān)因子的受體等的表達(dá)，尋找可能的治療靶點，對進(jìn)一步闡明銀屑病的發(fā)病機制，判斷病情活動性及尋找更佳的治療方案具有重要價值。

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[收稿日期]2013-04-13 [修回日期]2013-05-07

編輯/張惠娟