甘露糖結合凝集素在念珠菌性包皮龜頭炎中的表達及臨床意義

方德仁　周云曉　丁穎果　金曉東

【摘要】 目的 探討念珠菌性包皮龜頭炎（CB）患者外周血甘露糖結合凝集素（MBL）水平及其臨床意義。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）法檢測80例CB患者和46例健康對照者外周血MBL水平，運用多因素非條件Logistic法分析MBL與臨床癥狀的相關性。結果 CB組患者血清MBL的平均值為13.6±6.2ug/L，與健康對照組血清MBL的平均值17.6±5.4ug/L比較顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義（P﹤0.05）；血清MBL低水平組中，CB52人，占65%（52/80），健康對照男性7人，占15.2%（7/46），低水平組中CB的發(fā)病率明顯高于高水平組；CB組中MBL血清水平在低水平組中的人數(shù)52人，大于在高水平組中的28人，兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義（x2=2.18，P﹤0.05）；多元素Logistic回歸分析顯示血清MBL水平低、合并性傳播性疾病（STD）、性伴侶合并外陰陰道念珠菌?。╒VC）均增加男性發(fā)生CB的風險（P﹤0.01）。結論 外周血MBL水平在CB的發(fā)病過程中起重要作用，并且與臨床癥狀密切相關。

【關鍵詞】 包皮龜頭炎；甘露糖結合凝集素；念珠菌

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.09.054 文章編號：1004-7484（2013）-09-4837-02

念珠菌性包皮龜頭炎（candidal balanoposthitis；CB）是男性常見的生殖器感染性疾病之一，隨著性傳播疾病發(fā)病率不斷增加及抗生素的廣泛濫用，CB的發(fā)病率也越來越高，尤其是具有反復發(fā)作的特征，不僅給患者帶來巨大的痛苦，也成為臨床醫(yī)生治療和預防復發(fā)的難題，因此MPB一直是臨床研究的熱點。但其病因及發(fā)病機制至今尚不完全清楚，除外界接觸感染外，研究認為自身免疫機制可能在其發(fā)病中起重要作用。甘露糖結合凝集素（Mannan-binding lectin，MBL）是天然免疫中的關鍵分子。我們采用ELISA法對80例MPB患者外周血MBL的表達水平進行檢測，并結合臨床資料進行分析，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2008年9月至2009年9月我院皮膚科和泌尿外科門診經(jīng)真菌學培養(yǎng)確診CB患者80例。年齡19-62（33.4±10.3）歲。病程3天-12個月，平均2個月。其中初發(fā)MPB患者33例，再發(fā)性MPB47例。同期在我院行健康體檢男性，匹配年齡因素后，隨機抽取46例設為健康對照組。所有入組患者采集一般的統(tǒng)計學資料，包括有無合并其他性傳播性疾病，性活躍度，近1月內(nèi)抗生素使用情況，性伴侶患病情況以及生活習慣等，同時排除近4周內(nèi)使用免疫抑制劑及皮質(zhì)類固醇激素，排除糖尿病病史。

1.2 試劑與方法 本試驗采用雙抗體夾心ELISA法，定量檢測血清中MBL的濃度。試劑盒購于北京科杰生物有限公司，最低敏感度5.0ng/L，板內(nèi)變異系數(shù)﹤5.5%，板間變異系數(shù)﹤6.8%。2組受試者于清晨空腹抽取靜脈血2ml，析出血清后置-20℃低溫冰箱保存。操作步驟：①所用血清標本平衡至室溫，高精度加液器和吸頭清潔干燥后備用；②待測標本用濃縮標本稀釋液按1：105倍稀釋；③除空白孔外，分別將不同濃度的標準品、對照品及稀釋后的待測血清標本加入相應孔中（20ul/孔）；④每孔中加標本稀釋液100ul，混勻并封孔，室溫避光孵育120分鐘；⑤標記抗體稀釋液按1：21稀釋HRP標記的MBL抗體；⑥每孔加350ul洗滌液，洗滌5次；⑦除空白孔外，每孔加100ulHRP底物，混勻后封孔，室溫避光孵育20分鐘；8、加100ul終止液，混勻測量OD450值。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。采用多因素非條件Logistic回歸進行分析，病例對照組間計量資料的比較采用t檢驗，樣本率的比較采用x2檢驗，以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CB組與健康對照組血清MBL水平的比較 我們對80例CB患者進行了MBL血清水平的檢測，并以年齡匹配的46例健康男性作為對照，總共126例。血清MBL水平檢測結果的數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，MBL血清值在5.6-38.5ug/L之間，平均值在16.5±4.8ug/L。CB患者血清MBL的平均值為13.6±6.2ug/L，對照組血清MBL的平均值為17.6±5.4ug/L，CB組血清MBL的平均值低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，（P﹤0.05），見表1。

2.2 血清MBL與CB發(fā)生的關系 在本研究中，入組CB患者血清MBL的平均值為16.5ug/L，據(jù)此我們以16.5ug/L作為界值，將血清MBL水平分為低水平組和高水平組。通過觀察MPB組及對照組血清MBL水平的分布可見，患者MBL水平主要集中在低水平組，而健康對照組的MBL值主要集中在高水平組。由表2可見，血清MBL低水平組中，CB52人，占65%（52/80），健康對照男性7人，占15.2%（7/46），低水平組中CB的發(fā)病率明顯高于高水平組；CB組中MBL血清水平在低水平組中的人數(shù)52人，大于在高水平組中的28人，兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義（x2=2.18，P﹤0.05）。

2.3 CB發(fā)病相關因素多元素Logistic回歸分析 CB組患者血清MBL的平均值13.6±6.2ug/L，健康對照組血清MBL的平均值17.6±5.4ug/L；CB組中合并其他性傳播性疾病（STD）的陽性率為52%，健康對照組中支原體亞臨床感染2例，占4.3%；CB組中發(fā)病期間性伴侶陰道分泌物真菌培養(yǎng)的陽性率為21.3%，健康對照組中性伴侶陰道分泌物真菌培養(yǎng)僅1例陽性（陽性率為2.2%）。分別以是否為CB為因變量，其他STD、性伴侶念珠菌性陰道?。╒VC）發(fā)病情況、血清MBL水平為自變量建立多元素Logistic回歸分析模型。模型顯示血清MBL水平低、合并STD、性伴侶合并VVC均增加男性發(fā)生CB的風險（P﹤0.01），見表3。

3 討論

MBL是由肝臟和胰島分泌的一種急性期反應蛋白，廣泛存在于多種哺乳動物血液循環(huán)中，能選擇性的與微生物表面一組特異性的糖結構相結合，進而啟動機體的天然免疫機制（MBL途徑），因此國外有學者將MBL認定為天然免疫中的關鍵分子[1-2]。MBL在人體內(nèi)是通過其受體發(fā)揮作用的。

CB是男性泌尿科及皮膚科的常見病、多發(fā)病，但其機制未明。近年來對該病免疫機制的研究呈現(xiàn)出漸增趨勢。國外Szolnoky等發(fā)現(xiàn)人皮膚角化上皮細胞表達一種與巨噬細胞甘露糖受體不完全一致的甘露糖結合受體，該受體介導了上皮細胞抗白色念珠菌的作用。Nomanbhoy等進一步研究發(fā)現(xiàn)：小鼠陰道上皮細胞經(jīng)高碘酸處理后，與念珠菌之間的粘附力不受影響，但其抗念珠菌作用卻明顯減弱，提示陰道上皮細胞表面的甘露糖結合受體為糖蛋白，其糖鏈對細胞粘附?jīng)]有影響，卻對細胞粘附發(fā)生后的上皮細胞抗念珠菌作用是必要的。目前尚未有關于MBL與CB發(fā)病關系的報道。本研究顯示CB患者血清MBL的水平低于健康對照組，而低血清MBL組中CB的發(fā)病率明顯高于高血清MBL組，這一結果說明血清MBL降低可能增加CB發(fā)病的風險，因此我們推測：MBL作為一個非常重要的免疫因子，其水平的降低可能誘發(fā)CB。

眾所周知，年齡、性伴侶患病史、合并性傳播性疾病等都是CB的高危因素，由于樣本量有限，只能容納2-3個高危因素進行多元素Logistic回歸分析，在匹配了年齡之后，我們將血清MBL水平作為CB發(fā)病的一個高危因素，與上述高危因素一起進行Logistic回歸分析，結果顯示血清MBL水平低與合并性傳播性疾病和性伴侶患VVC均為CB發(fā)病的高危因素，說明MBL血清水平可能是上述高危因素同樣能夠影響CB發(fā)病的另一種獨立危險因素，并且比較三者的OR值可知，對于可能影響CB發(fā)病的因素來說：血清MBL水平可能比合并性傳播性疾病和性伴侶患VVC更有意義。

總之，CB的發(fā)病是一個復雜的過程，既有內(nèi)在的自身免疫包括細胞免疫和體液免疫的因素，也有外在的接觸感染等多種因素，目前對CB發(fā)病原因的認識還是初淺的，有待進一部的研究和探討。

參考文獻

[1] Turner MW.The role of mannose-binding lectin in health and disease[J].Moleul Immunol，2003，40：423-429.

[2] Jack DL，Turner MW.Anti-microbial activities of mannose-binding lectin[J].Biochemi Soci Transaction，2003，31：753-757.