論少見念珠菌在口腔念珠菌感染病例中的分布及其致病性

常欣魁,賀靜,宋揚△,鄭光輝,見碩（.北京大學(xué)口腔醫(yī)院,北京 0008;.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院,北京 00070;.北京市海淀區(qū)婦幼保健院,北京 00080）

念珠菌作為一類寄生在人體各個部位的真菌，口腔是其常見寄生部位，對維持口腔中的菌群平衡起到重要的作用，屬于正常菌群[1]?？谇荒钪榫腥緦儆谝环N真菌感染，主要表現(xiàn)為口干、發(fā)黏、口腔黏膜疼痛、有燒灼感、味覺減退等癥狀，如果不能及時采取有效的治療，不僅會加重癥狀，還會有誘發(fā)癌變的風(fēng)險，為患者的身體、心理上帶來巨大的影響[2]。隨著廣譜抗菌素、糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑的應(yīng)用，器官移植及化學(xué)治療的廣泛開展以及HIV的流行，口腔念珠菌病的患病率呈現(xiàn)不斷攀升的趨勢[3]。雖然白色念珠菌仍然是口腔念珠菌病最常見的致病菌，但非白色念珠菌種，尤其是少見念珠菌近年來存在上升的趨勢[4]。本研究旨在探究目前歸類為少見念珠菌分布情況，為口腔念珠菌病的臨床治療提供更多證據(jù)和幫助。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2021年7-10月北京大學(xué)口腔醫(yī)院黏膜科就診且開具唾液真菌培養(yǎng)鑒定檢查項目的患者共1376人。對他們的培養(yǎng)結(jié)果進行篩選，選取分離培養(yǎng)結(jié)果中含有少見念珠菌的樣本作為本實驗研究對象。

1.2 樣本采集菌種 患者留取足量唾液樣本至帶蓋無菌容器中，用一次性吸管轉(zhuǎn)種0.5ml患者樣本至沙保羅培養(yǎng)基中，在30℃恒溫孵箱中培養(yǎng)48小時。有念珠菌生長的培養(yǎng)基的樣本作為陽性樣本，然后把該平皿上的念珠菌轉(zhuǎn)種至科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基中，于35℃恒溫孵箱中培養(yǎng)48小時后根據(jù)顏色篩選出除白色念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌和光滑念珠菌以外的其他少見念珠菌。

1.3 鑒定 將分離所得的全部少見念珠菌分純，使用法國生物梅里埃公司的API 20C進行生化反應(yīng)鑒定，對于鑒定率不高的個別真菌選擇用全自動快速微生物質(zhì)譜檢測系統(tǒng)VITEK MS進行補充鑒定，所得鑒定結(jié)果概率為99.9%認(rèn)為可以接受。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 將所得全部少見念珠菌的鑒定及藥敏結(jié)果錄入Excel表格中進行匯總。分別計算每種念珠菌占少見念珠菌整體的百分比。

2 結(jié)果

在2021年7-10月內(nèi)從1376位患者體內(nèi)分離出的117株少見念珠菌中，近平滑念珠菌60株，占51.28%；季也蒙念珠菌25株，占21.37%；葡萄牙念珠菌8株，占6.84%；平常念珠菌2株，占1.71%；海洋酵母菌4株，占3.42%；無名念珠菌1株，占0.85%；變隱念珠菌5株，占4.27%；挪威念珠菌1株，占0.85%；粗狀念珠菌2株，占1.71%；朗比可念珠菌1株，占0.85%；蜜蜂克勒克酵母菌1株，占0.85%；木蘭念珠菌1株，占0.85%；檸檬克勒克酵母菌3株，占2.56%；擬平滑念珠菌1株，占0.85%；勞倫氏念珠菌1株，占0.85%；霍氏念珠菌1株，占0.85%。統(tǒng)計結(jié)果見表1。

表1 少見念珠菌結(jié)果分布

3 結(jié)論

通過結(jié)果可以看到，在2021年7-10月內(nèi)1376位患者體內(nèi)分離出的117株少見念珠菌中，分離比例最高的前三位依次是近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌和葡萄牙念珠菌。其中近平滑念珠菌最多，占全部少見念珠菌的51.28%，季也蒙念珠菌其次，占21.37%，葡萄牙念珠菌第三，占6.84%。此外包括平常念珠菌在內(nèi)的其他13種少見念珠菌雖也有檢出，但它們分布比例較為平均且顯著低于前三位少見念珠菌，因此不作為分析討論的重點。

4 討論

念珠菌屬廣泛存在于自然環(huán)境、體表、消化道及口腔黏膜上，是重要的條件致病菌[5]?？谇荒钪榫“Z口瘡、念珠菌口角炎、急慢性萎縮性口炎、慢性增生性念珠菌病等臨床類型，以鵝口瘡最為多見，易感者包含艾滋?。ˋIDS）、惡性腫瘤、長期廣譜抗細(xì)菌藥物或糖皮質(zhì)激素應(yīng)用等免疫功能低下的群體，同時經(jīng)常伴有消化道念珠菌病和播散性念珠菌病[6]。口腔念珠菌感染不僅會造成黏膜病變和口腔癌前病變，還會造成消化道感染，進而有引發(fā)胃癌的風(fēng)險[7]。根據(jù)既往研究，自2015年-2019年，在我院分離口腔念珠菌中，雖然分離率最高的種類依然是白色念珠菌和熱帶念珠菌，但是其他少見念珠菌比例呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，且目前國內(nèi)外對于這些少見念珠菌對人體尤其是口腔部位的影響研究較少，所以對于少見念珠菌的分離鑒定探究就顯得越來越具有臨床意義[4]。此外在先前的研究中，通過對2015年-2019年來我院黏膜科就診的全部共27162例口腔念珠菌病患者唾液中的真菌種類和菌量的分離統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌感染的樣本中均以菌落數(shù)≥200CFU/mL的菌株為主，而克柔念珠菌、其他念珠菌菌落數(shù)≥200CFU/mL的菌株比例低于白念珠菌、熱帶念珠菌和光滑念珠菌，而菌落數(shù)≤30CFU/mL的菌株比例明顯高于白念珠菌、熱帶念珠菌和光滑念珠菌[4]。在對所有口腔念珠菌病患者的觀察中發(fā)現(xiàn)，被少見念珠菌感染的患者往往只需要更少的菌量，就可出現(xiàn)與大量非少見念珠菌感染相近似的臨床癥狀，而對于非少見念珠菌感染的患者，往往只有當(dāng)菌量達(dá)到很大的時候才會出現(xiàn)臨床表現(xiàn)，還有部分患者會處于白色念珠菌的無癥狀攜帶狀態(tài)，這些都側(cè)面反映了少見念珠菌在致病性方面要顯著高于其他種類的念珠菌。

在臨床上，白色念珠菌是口腔念珠菌病的主要致病菌。但是有文獻報道，以近平滑念珠菌和季也蒙念珠菌等少見念珠菌的分離率也在升高[8-9]。由于對于念珠菌所需的鑒定和藥敏結(jié)果時間普遍較長，所以臨床通常會在得到分離鑒定結(jié)果前先進行經(jīng)驗用藥治療。對于最常見的白色念珠菌的常規(guī)治療一般首選氟康唑或伏立康唑，既往報道表明白色念珠菌對這兩種藥的敏感率分別為99%和98.8%[10,12]。根據(jù)其他學(xué)者的研究，筆者此次重點研究的少見念珠菌的耐藥率要明顯高于最常見的白色念珠菌。在本次研究中分離率最高的近平滑念珠菌，對于氟康唑和伏立康唑的耐藥率分別為6.4%和2.7%，其中氟康唑耐藥菌株中41.6%對伏立康唑交叉耐藥，這可能由于唑類藥物作用靶酶編碼基因ERG11發(fā)生突變導(dǎo)致[11]。分離率第二的季也蒙念珠菌對于氟康唑和伏立康唑的耐藥率分別為24.3%和8.1%，交叉耐藥率為8.1%[12]。鑒于少見念珠菌的耐藥率均高于白色念珠菌，因此分離并鑒定少見念珠菌對于臨床抗菌藥物的選擇具有積極指導(dǎo)意義。今后下一步研究方向?qū)⑦M一步擴大樣本數(shù)量進行分析，并對于分離菌種進行藥敏分析，進而豐富研究結(jié)果。