無菌藥物生產(chǎn)環(huán)境中微生物的檢測(cè)及控制

張虎 宋麗麗 封春香 路華美

【摘 要】 無菌室是進(jìn)行無菌藥物生產(chǎn)的主要場(chǎng)所，有效控制及檢測(cè)無菌藥物生產(chǎn)環(huán)境微生物含量是保障產(chǎn)品質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo)。本文對(duì)無菌室微生物的種類及檢測(cè)以及如何對(duì)無菌環(huán)境滅菌消毒進(jìn)行了綜述說明。

【關(guān)鍵詞】 微生物檢測(cè)；沉降菌；浮游菌；人員菌

【中圖分類號(hào)】 R95 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A

Aseptic pharmaceutical production environment microbial

detection and control

Zhang Hu Song LIli Feng Chunxiang Lu Huamei

（Shandong Luoxin Pharmaceutical Co.，Ltd. ，Linyi ，Shandong ，27600）

【Abstract】 Sterile room is the main place for aseptic drug production， Effective control and to detect the contents of sterile drug production environment microorganism is an important indicator to safeguard the quality of products .In this paper， the sterile room types and sterile environment and how to detection of disinfection were summarized.

【Keywords】 Microbial detection；Settlement of bacteria；Planktonic bacteria；Personnel bacteria

無菌是指不含存活微生物的狀態(tài)，在實(shí)際使用中的含義是當(dāng)使用微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)試驗(yàn)時(shí)，無任何細(xì)菌生長(zhǎng)，無菌藥品系指不含任何活的微生物的藥品。然而絕對(duì)無菌狀態(tài)是無法實(shí)現(xiàn)的，在藥物生產(chǎn)過程中，非最終滅菌制劑成品染菌率不超過千分之一，最終滅菌制劑成品染菌率不超過百萬分之一，即可認(rèn)為是無菌藥物。無菌藥品的生產(chǎn)須滿足其質(zhì)量和預(yù)定用途的要求，應(yīng)當(dāng)最大限度降低微生物的存在。

伴隨醫(yī)藥行業(yè)的迅猛發(fā)展，藥品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)變得越來越嚴(yán)格，新版GMP標(biāo)準(zhǔn)的推出對(duì)無菌藥物的生產(chǎn)進(jìn)行了更要級(jí)別的要求，GMP內(nèi)容幾乎完全與歐盟GMP標(biāo)準(zhǔn)接軌，不僅對(duì)無菌生產(chǎn)潔凈級(jí)別提高了要求，同時(shí)對(duì)人員管理，生產(chǎn)質(zhì)量管理等多方面進(jìn)行要求。為此，本文主要對(duì)無菌室內(nèi)微生物的控制和檢測(cè)進(jìn)行描述，為正確維持無菌室的環(huán)境提供參考與借鑒。

1 微生物的種類及檢測(cè)

按照微生物檢測(cè)內(nèi)容可將無菌室微生物分為沉降菌、浮游菌、人員菌。在新版GMP要求下不同級(jí)別的潔凈區(qū)域內(nèi)微生物檢測(cè)的限度標(biāo)準(zhǔn)如下：

1.1 沉降菌檢測(cè) 通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿（一般多采用90mm直徑硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿，俗稱沉降碟），經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。（1）采樣方法：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn)，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置，置32.5℃士2.5℃培養(yǎng)48h，取出檢查。（2）采樣點(diǎn)的布置：工作區(qū)采樣點(diǎn)位置離地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。沉降菌的檢測(cè)位點(diǎn)篩選要具有隨機(jī)性和代表性，其檢測(cè)結(jié)果能夠普遍反映無菌室內(nèi)環(huán)境的情況，采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏。對(duì)關(guān)鍵操作點(diǎn)可以采取設(shè)置多個(gè)取樣位點(diǎn)來反映該位點(diǎn)的無菌狀態(tài)。

1.2 浮游菌檢測(cè) 浮游菌即懸浮在空氣中的活微生物粒子。本方法采用計(jì)數(shù)濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的生長(zhǎng)條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中的活微生物數(shù)，以此來評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。常用采集儀器有“浮游菌空氣采樣器”。采樣方法及采樣點(diǎn)布置：采樣人員嚴(yán)格按照浮游菌空氣采樣器的操作規(guī)程進(jìn)行采樣。工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.8m～1.5m左右；送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右；可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。為防止交叉污染，在不同級(jí)別的環(huán)境下建議配備專門的空氣采樣器，并定期用無塵抹布和消毒劑對(duì)空氣采樣器表面進(jìn)行擦拭，保證期檢測(cè)數(shù)據(jù)真實(shí)可靠；在使用空氣采樣器采集浮游菌時(shí)，采集人員不要在儀器前走動(dòng)，以免影響結(jié)果。安裝培養(yǎng)皿時(shí)手要在側(cè)面，不能放在培養(yǎng)皿的前方。

1.3 人員菌的檢測(cè) 人員菌的檢測(cè)主要為無菌室的工作人員進(jìn)行更衣驗(yàn)證及離開無菌室的工作人員進(jìn)行的微生物檢測(cè)，即手部及潔凈服的不同部位進(jìn)行取點(diǎn)檢測(cè)，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，并由菌落數(shù)量來反映工作人員在正常工作狀態(tài)下所攜帶的微生物數(shù)量。采樣方法及采樣位點(diǎn)：對(duì)無菌室工作的人員進(jìn)行更衣驗(yàn)證，取樣位點(diǎn)頭部、眼罩、腰部、手部、肘部、小腿等。手部檢測(cè)時(shí)，受測(cè)人員用手指輕按培養(yǎng)皿停留5秒鐘（五指平均分布于培養(yǎng)皿區(qū)域），雙手都要取樣；潔凈服的取樣點(diǎn)取樣時(shí)停留時(shí)間同樣要停留5秒鐘，然后押迅速蓋上平皿，送化驗(yàn)室培養(yǎng)。

2 無菌環(huán)境微生物數(shù)量的控制方法

2.1 規(guī)范人員的衛(wèi)生操作規(guī)程 人員是無菌環(huán)境中最大的污染源，據(jù)有相關(guān)調(diào)查表明，在無菌藥品生產(chǎn)過程中，有70%的污染來自于人員。人體攜帶微生物的數(shù)目十分驚人，在沒有消毒的情況下，手部大約有1000～6000個(gè)微生物/cm2 ，一個(gè)噴嚏可以射出100000～1000000個(gè)微生物；健康人群站立不動(dòng)也可以每分鐘向環(huán)境中散步100000個(gè)顆粒，移動(dòng)時(shí)微粒數(shù)量會(huì)迅猛增加。

為控制人員對(duì)無菌室的環(huán)境產(chǎn)生的影響，所有人員都應(yīng)當(dāng)接受衛(wèi)生要求的培訓(xùn)，企業(yè)應(yīng)當(dāng)建立人員衛(wèi)生操作規(guī)程，最大限度地降低人員對(duì)藥品生產(chǎn)造成污染的風(fēng)險(xiǎn)。人員衛(wèi)生操作規(guī)程應(yīng)當(dāng)包括與健康、衛(wèi)生習(xí)慣及人員著裝相關(guān)的內(nèi)容[1]。人員進(jìn)入無菌室要求人員不得化妝、帶手表、戒指等首飾；不得吃東西、嚼口香糖。嚴(yán)格按照進(jìn)入無菌室的穿衣規(guī)程穿戴潔凈服。生產(chǎn)過程中出現(xiàn)人員菌檢測(cè)不合格的工作人員應(yīng)取消其進(jìn)入無菌室的資格，并對(duì)其進(jìn)行再次培訓(xùn)，直到無菌檢測(cè)合格后方可恢復(fù)進(jìn)入無菌室的資格；另外，要嚴(yán)格按照新版GMP對(duì)人員的要求，有效控制無菌室人員數(shù)量，并盡量避免人員在無菌室不必要的活動(dòng)，減少人員對(duì)環(huán)境的污染。

2.2 合理使用消毒劑 無菌室內(nèi)最普遍使用的消毒劑是75%的乙醇，另外常見的消毒劑還有70%異丙醇，酸性苯酚，堿性苯酚，殺孢子劑，新潔爾滅等，75%乙醇和70%異丙醇常作為人員及設(shè)備表面的消毒使用，堿性苯酚、酸性苯酚及殺孢子劑通常用于無菌環(huán)境地面的消毒。為防止微生物產(chǎn)生抗耐受性，通常將消毒劑周期性的交替使用，并保證其使用時(shí)限，例如在單周使用75%乙醇和酸性苯酚，而雙周則使用70%異丙醇和堿性苯酚。為減少人員菌的數(shù)量，工作人員要按照規(guī)定間歇性的對(duì)手掌用消毒劑消毒。

2.3 無菌室的日常管理 建立安全衛(wèi)生值日制度，定期對(duì)無菌環(huán)境進(jìn)行清潔，當(dāng)設(shè)備和地面出現(xiàn)散落的藥物粉末或無菌水時(shí)，要及時(shí)用清理，并用消毒劑擦拭。一旦發(fā)現(xiàn)通風(fēng)系統(tǒng)、墻壁、天花板、地面、門窗及公用介質(zhì)系統(tǒng)等設(shè)施有損壞現(xiàn)象，要及時(shí)報(bào)告并采取相應(yīng)的修復(fù)措施，并保存記錄及時(shí)歸檔。從潔凈室（無菌室）環(huán)境中檢測(cè)到的微生物應(yīng)能鑒別至屬或種，保留鑒別實(shí)驗(yàn)原始記錄及菌種，作為無菌生產(chǎn)、無菌檢查潔凈室環(huán)境質(zhì)量、消毒劑有效性評(píng)估及污染源調(diào)查的依據(jù)，并且也是為無菌檢查陽性結(jié)果的調(diào)查提供第一手資料。

2.4 無菌環(huán)境消毒及設(shè)備的滅菌 無菌環(huán)境的消毒常采用甲醛熏蒸的方法，為獲得最佳的消毒效果，在熏蒸前對(duì)無菌室噴灑適量的水以增加環(huán)境的空氣濕度，同時(shí)將無菌室內(nèi)的物品以一定的空間角度擺放，以增加其表面積而使消毒更加徹底。設(shè)備滅菌使用高壓蒸汽滅菌法（121℃、30min），對(duì)反應(yīng)釜設(shè)備多次脈動(dòng)式抽真空，由于反應(yīng)釜設(shè)備較大，一般會(huì)存在冷點(diǎn)（滅菌時(shí)反應(yīng)釜溫度最低的位點(diǎn)），所以需要對(duì)反應(yīng)釜設(shè)備安裝多個(gè)溫度探頭來確定滅菌溫度。設(shè)備冷點(diǎn)處溫度超過122℃并維持30分鐘蒸汽滅菌，保證設(shè)備滅菌效果。

3 結(jié)語

微生物檢測(cè)是反映無菌環(huán)境無菌性的重要指標(biāo)，但無菌環(huán)境的微生物數(shù)量控制絕不能依賴檢測(cè)，產(chǎn)品的無菌或其它質(zhì)量特性也不能依賴于任何形式的檢驗(yàn)及檢測(cè)結(jié)果，而是應(yīng)該改善無菌環(huán)境衛(wèi)生及工作人員的操作規(guī)范，將微生物的數(shù)量控制在根源處，從根本上提高無菌藥物的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）[S].衛(wèi)生部令第79號(hào)，2010.