微生物檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告和不確定度的應(yīng)用

沈泓++李玨++孫晗

摘 要：檢測(cè)報(bào)告的質(zhì)量直接影響客戶對(duì)報(bào)告的理解和使用，在微生物領(lǐng)域，除了做好檢測(cè)過程的質(zhì)量控制和保證外，也應(yīng)重視對(duì)結(jié)果報(bào)告的質(zhì)量保證工作。本文在微生物檢測(cè)結(jié)果的表示、評(píng)定和不確定度的應(yīng)用三方面進(jìn)行探討。

關(guān)鍵詞：微生物檢測(cè)；不確定度；結(jié)果評(píng)定

中圖分類號(hào)：TS207.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1671-2064（2017）20-0235-01

檢測(cè)報(bào)告的質(zhì)量直接影響客戶對(duì)報(bào)告的理解和使用，在微生物領(lǐng)域，除了做好檢測(cè)過程的質(zhì)量控制和保證外，也應(yīng)重視對(duì)結(jié)果報(bào)告的質(zhì)量保證工作。

1 微生物檢測(cè)結(jié)果的表示

在微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的表示中，菌落計(jì)數(shù)、MPN值和定性結(jié)果表示方式不同。

菌落計(jì)數(shù)結(jié)果表示：通常用菌落形成單位CFU（colony forming unit）表示菌落計(jì)數(shù)結(jié)果，如：“CFU/g”（一般是固體樣品），“CFU/mL”（一般是液體樣品），“CFU/cm2”（表面積取樣法時(shí)）和“CFU/雙”（如加工人員的手）等，也有用“個(gè)/g”，“個(gè)/mL”表示。菌落計(jì)數(shù)數(shù)字的表示需要符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的具體要求。如GB 4789.2-2016對(duì)菌落總數(shù)報(bào)告的要求為：菌落數(shù)小于100 CFU時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。菌落數(shù)大于或等于100 CFU時(shí)，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)。也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約。如：20532CFU/g修約為21000CFU/g，也可用2.1×104CFU/g來表示。

MPN值結(jié)果表示：有一些細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果用最大可能值MPN（Most Probable Number）表示，如：“MPN/g”，“MPN/mL”，“MPN/100g”和“MPN/100mL”等。MPN是表示樣品中活菌密度的估算值，并不是樣品中活菌數(shù)的真值。MPN計(jì)數(shù)法是基于泊松分布的一種間接計(jì)數(shù)方法，適用于測(cè)定混雜微生物群落中含量較低的微生物。通過確證的陽性管數(shù)，檢索MPN表來獲得檢驗(yàn)微生物的最可能數(shù)（MPN）。MPN值可以根據(jù)稀釋度檢樣量的不同，對(duì)表內(nèi)數(shù)字進(jìn)行相應(yīng)得降低或增加。

定性檢測(cè)結(jié)果的表示：在微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室中，一種常見的結(jié)果表示方式是對(duì)定性檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告。如：“陰性或陽性”，“檢出或未檢出”。在定性結(jié)果表示時(shí)有時(shí)會(huì)標(biāo)注取樣量，如“陰性或陽性/25g”，“陰性或陽性/100g”等。定性檢測(cè)的目標(biāo)需要明確，如根據(jù)GB 4789.42檢測(cè)結(jié)果報(bào)告“檢出諾如病毒基因”或“未檢出諾如病毒基因”。

2 微生物檢測(cè)結(jié)果的評(píng)定

根據(jù)微生物學(xué)指標(biāo)值或限量值對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判定，還應(yīng)考慮抽樣方法，以及評(píng)定的范圍，是對(duì)某一樣品進(jìn)行評(píng)定，還是對(duì)整批產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)定。國(guó)際食品微生物標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（The International Committee on Microbiological Specification for Food，ICMSF）制定的食品微生物學(xué)分析采樣方法，我國(guó)目前也逐漸采納了與國(guó)際接軌的ICMSF采樣方案。ICMSF提出的采樣基本原則，根據(jù)各種微生物本身對(duì)人的危害程度各有不同和食品經(jīng)不同條件處理后，其危害度變化情況來設(shè)定抽樣方案并規(guī)定其不同采樣數(shù)。ICMSF方法是從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度，依據(jù)一批產(chǎn)品檢查多少個(gè)檢樣才能夠有代表性，才能客觀地反映該批產(chǎn)品的質(zhì)量的原則，其抽樣方法包括二級(jí)法和三級(jí)法。二級(jí)法設(shè)有n、c和m值，三級(jí)法設(shè)有n、c、m和M值。GB 4789.1-2016對(duì)其有明確解釋：

n：同一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品件數(shù)；

c：最大可允許超出m 值的樣品數(shù)；

m：微生物指標(biāo)可接受水平限量值（三級(jí)采樣方案）或最高安全限量值（二級(jí)采樣方案）；

M：微生物指標(biāo)的最高安全限量值。

注1：按照二級(jí)采樣方案設(shè)定的指標(biāo)，在n個(gè)樣品中，允許有≤c個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于m值。

注2：按照三級(jí)采樣方案設(shè)定的指標(biāo)，在n個(gè)樣品中，允許全部樣品中相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值小于或等于m值；允許有≤c個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值在m值和M值之間；不允許有樣品相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于M值。

如GB10765-2010中對(duì)嬰兒配方食品中的阪崎腸桿菌采用二級(jí)采樣的方案，其限度為n=3，c=0，m=0/100g，即抽樣的3個(gè)樣品中均不能檢出該致病菌。而對(duì)大腸菌群的檢驗(yàn)采用的是三級(jí)抽樣的方案，其限度為n=5，c=2，m=10，M=100。

因?yàn)槎?jí)采樣對(duì)致病菌“零容忍”，對(duì)阪崎腸桿菌的檢驗(yàn)可以看作是定性檢驗(yàn)，直接報(bào)告結(jié)果為“檢出”或“未檢出”，有任何1個(gè)樣品檢出，則該批次乳粉不合格。

對(duì)大腸菌群的檢驗(yàn)可以分為以下幾種情況：若5個(gè)樣品大腸菌群數(shù)均≤10CFU/g，則該批次產(chǎn)品合格；若≤2個(gè)樣品大腸菌群數(shù)在10CFU/g-100CFU/g，則該批次產(chǎn)品合格；若有3個(gè)樣品大腸菌群數(shù)>10CFU/g，則該批次乳粉全部不合格.若有任何1個(gè)樣品大腸菌群數(shù)>100CFU/g，則該批次乳粉都不合格。

對(duì)于固體樣品，若平板計(jì)數(shù)法的培養(yǎng)計(jì)算結(jié)果為5，低于檢出限，應(yīng)以小于檢出限數(shù)值報(bào)告，即為<10CFU/g。

3 不確定度的應(yīng)用

當(dāng)不確定度與檢測(cè)結(jié)果的有效性或應(yīng)用有關(guān)，或客戶的指令中有要求，或不確定度影響到與規(guī)范限度的符合性時(shí)，則檢測(cè)報(bào)告中還需要有關(guān)不確定度的信息。測(cè)量不確定度是表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性、與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)。測(cè)量不確定度不能用于被測(cè)量值的修正，它可以表征被測(cè)量值的合理范圍。

在APLAC TC 005：2004中指出在對(duì)微生物測(cè)量不確定度評(píng)定方面，微生物測(cè)試有四種主要類型：常規(guī)定量測(cè)試、MPN法、定性測(cè)試和專家測(cè)試如醫(yī)藥測(cè)試等。各種不確定度的評(píng)定方法是用于常規(guī)定量測(cè)試的。

在CNAS-CL09：2013中指出在微生物檢測(cè)領(lǐng)域，某些情況下，一些檢測(cè)無法從計(jì)量學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)角度對(duì)測(cè)量不確定度進(jìn)行有效而嚴(yán)格的評(píng)估，這時(shí)至少應(yīng)通過分析方法，考慮它們對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的重要性，列出各主要的不確定度分量，并作出合理的評(píng)估。有時(shí)在重復(fù)性和重現(xiàn)性數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上估算不確定度也是合適的。

最簡(jiǎn)單的情況是規(guī)范本身清楚地說明測(cè)得值在給定的置信水平下的不確定度擴(kuò)展后不應(yīng)超出規(guī)定的限值或在規(guī)定的限定值內(nèi)。

在多數(shù)情況下，規(guī)范要求在證書或報(bào)告中做出符合性聲明，但沒有指明進(jìn)行符合性評(píng)價(jià)時(shí)需考慮不確定度的影響。在這種情況下，可以在不考慮不確定度的情況下，根據(jù)測(cè)得值是否在規(guī)定限制范圍內(nèi)做出符合性判斷。

在客戶與實(shí)驗(yàn)室之間的協(xié)議或?qū)嵤?zhǔn)則或規(guī)范中可能已聲明其采用方法的準(zhǔn)確性是足夠的，且在判斷符合性時(shí)，可以忽略不確定度。

當(dāng)沒有相應(yīng)的準(zhǔn)則、測(cè)試規(guī)范、客戶要求、協(xié)議或?qū)嵤┮?guī)則時(shí)，可采用下列方法：

（1）當(dāng)測(cè)得值以95%的置信水平延伸擴(kuò)展不確定度時(shí)仍不超過規(guī)定限值時(shí)，則可以聲明符合規(guī)范要求。

（2）如果測(cè)得值向下延伸擴(kuò)展不確定度后，仍超出規(guī)定限值的上限，則可以聲明不符合規(guī)范要求。

（3）如果測(cè)得值向上延伸擴(kuò)展不確定度后仍低于規(guī)定限值的下限，則可以聲明不符合規(guī)范要求。

（4）在不可能測(cè)試同一個(gè)產(chǎn)品單元的多個(gè)樣品，或不可能進(jìn)行重復(fù)測(cè)試的情況下，測(cè)得的單一值若非常接近規(guī)定限值，延伸擴(kuò)展不確定度后高于上限或低于下限，這時(shí)在規(guī)定的置信水平上不能確定是否符合規(guī)范。應(yīng)當(dāng)報(bào)告測(cè)得值與擴(kuò)展不確定度，并聲明無法證實(shí)符合或不符合規(guī)范。

如果可以對(duì)同一產(chǎn)品單元的兩個(gè)或多個(gè)樣品進(jìn)行測(cè)試，或可以對(duì)同一樣品進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，或可以對(duì)留樣進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，則建議做重復(fù)測(cè)試。估算出對(duì)同一樣品所有測(cè)得值的平均值或所有重復(fù)測(cè)試的平均值和該平均值的不確定度，然后做出相應(yīng)的判斷。

（5）如果測(cè)得值恰好為規(guī)定限值，則在指定的置信度水平上不可能做出是否符合規(guī)范的聲明。應(yīng)當(dāng)報(bào)告測(cè)得值與擴(kuò)展不確定度，并說明在指定的置信度水平上無法證實(shí)符合或是不符合規(guī)范。endprint