藥品微生物檢測(cè)中均質(zhì)器的應(yīng)用探討

王閆

摘 要：隨著我國現(xiàn)代社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平的不斷提高，人們?cè)絹碓阶⒅貍€(gè)人健康，這也就意味著我國的醫(yī)療設(shè)備、技術(shù)、人才、藥品等都會(huì)面臨巨大的挑戰(zhàn)。藥品的安全性也就成為了患者是否能夠獲得生命安全的重要影響因素。藥品微生物檢測(cè)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性對(duì)臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展產(chǎn)生了一定的影響，在藥品微生物檢測(cè)中會(huì)有多種方式，本文將重點(diǎn)對(duì)使用均質(zhì)器進(jìn)行檢測(cè)作相應(yīng)的探究。

關(guān)鍵詞：均質(zhì)器；微生物檢測(cè)；供試液制備

一、藥品微生物使用均質(zhì)器檢測(cè)的事前準(zhǔn)備

（一）準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器

拍擊式均質(zhì)器（西班牙IUL）；旋刀式均質(zhì)器；

（二）準(zhǔn)備所用到的菌株

有中國食品檢定研究院提供的第三代菌種，分別是金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉。

（三）培養(yǎng)基

由美國BD公司提供的胰酪大豆胨瓊脂、沙式葡萄糖瓊脂。

（四）試藥

稀釋劑為PH值為7.0的氯化鈉-蛋白胨緩沖液。

二、藥品微生物使用均質(zhì)器檢測(cè)的具體操作步驟和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的獲取

（一）配制所需要的菌液

按照《中國藥典》中附錄中所說的微生物限度的檢查法規(guī)定的試菌液制備方法，開始制備所需要的菌液。首先將金黃色的葡萄球菌、大腸埃希菌制成每1ml約含50-100cfu的菌懸液；其次將白色念珠菌制成每1ml約含50-100cfu的菌懸液；最后將黑曲霉制成每1ml約含50-100cfu的孢子懸液，完成菌液的制作。

（二）制造所需的供試液

在10g試品中加入100ml的PH值為7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液的均質(zhì)袋中，將其拍擊成1：10的供試品溶液I，完成拍擊式均質(zhì)器的制備。然后同樣在10g供試品中加入100ml的PH值為7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，制成供試品溶液Ⅱ，完成旋刀式均質(zhì)器的制備。

（三）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

按照《中國藥典》中的一部分附錄中所說的微生物限度檢查法規(guī)定方法對(duì)供試品的細(xì)菌數(shù)、霉菌、酵母菌的數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)。每株試驗(yàn)菌的每種培養(yǎng)基至少制備兩個(gè)平皿，最終的技術(shù)結(jié)果可以通過求其數(shù)值的算術(shù)平均數(shù)得到。將1ml的供試液放在90mm的無菌平皿中，并在其中注入15～20ml溫度低于45℃的融化的胰酪大豆胨瓊脂和沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基混合均勻、待其凝固、將其倒置按規(guī)定的條件培養(yǎng)并記錄數(shù)據(jù)。

（四）看不同組中微生物的回收率

按照《中國藥典》后的增補(bǔ)本第二公示稿非無菌產(chǎn)品需要氧菌檢查菌回收率方法將活菌進(jìn)行回收率試驗(yàn)。在此要注意的是：加入的菌液的體積不能夠超過供試液體積的1%。將上述實(shí)驗(yàn)中所用的供試液取出，用稀釋之后的溶液代替菌液同試驗(yàn)組操作，完成對(duì)供試品的對(duì)照。然后再將稀釋后的液體代替供試液，按照實(shí)驗(yàn)組中所論述的步驟加入試驗(yàn)菌液并完成對(duì)微生物的回收試驗(yàn)。試驗(yàn)組以法測(cè)定，同時(shí)測(cè)定供試品對(duì)照組及菌液對(duì)照組菌數(shù)做好相應(yīng)的記錄，然后根據(jù)所記錄的數(shù)據(jù)求出各個(gè)試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)及其回收率。

三、藥品微生物使用均質(zhì)器檢測(cè)后對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比

取40批的樣品，按照上述實(shí)驗(yàn)制備供試品溶液，依法檢驗(yàn)。制定兩種方法檢驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比表，然后對(duì)樣品檢驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的處理并作相關(guān)記錄。

四、分析如何選擇相應(yīng)的均質(zhì)器去檢測(cè)

（一）簡單分析旋刀式均質(zhì)器和拍擊式均質(zhì)器

我們對(duì)9批供試品進(jìn)行加樣回收率的試驗(yàn)時(shí)，根據(jù)上述試驗(yàn)中的相關(guān)數(shù)據(jù)我們可以得到：旋刀式均質(zhì)器對(duì)細(xì)菌的回收率要比拍擊式均質(zhì)器的回收率稍稍高出一些，兩種均質(zhì)器的檢出率分別是87.5%-100%、77.5%-100%；旋刀式均質(zhì)器對(duì)真菌的回收率是81.6%-98.3%而拍擊式均質(zhì)器對(duì)真菌的回收率為83.3%-102%，相較之下旋刀式均質(zhì)器要比拍擊式均質(zhì)器稍微低一些。

（二）對(duì)檢測(cè)結(jié)果的簡單分析

我們對(duì)40批藥品用拍擊式均質(zhì)器和旋刀式均質(zhì)器進(jìn)行微生物檢測(cè)結(jié)果利用統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行分析時(shí)，可以得出通過兩種方法處理所得到的霉菌及酵母菌和菌落總數(shù)的相關(guān)系數(shù)分別是0.998和1.000，后經(jīng)過配對(duì)t檢驗(yàn)p值是我們得到的數(shù)據(jù)是：霉菌數(shù)為0.324，大于0.05，由這兩數(shù)據(jù)我們可以得知兩種方法差距不大。菌落總數(shù)的P值為0.035說明兩種的方法的檢測(cè)方法也是有差別的。綜上所述，我們可以得到在微生物檢測(cè)中，我們必須要根據(jù)樣品的特性選擇適宜的均質(zhì)器來進(jìn)行樣品的試前處理。

（三）對(duì)蜜丸的微生物檢驗(yàn)的分析

蜜丸的粘性較大，用拍擊式均質(zhì)器可以使蜜丸逐漸分散在稀釋液當(dāng)中，形成較為均勻的供試液，而使用旋刀式均質(zhì)器的時(shí)候蜜丸很容易粘在刀片上，不易均質(zhì)，如槐角丸、明目地黃丸，根據(jù)測(cè)出的數(shù)據(jù)也可以得出旋刀式均質(zhì)器檢出率較低。

（四）對(duì)水丸的微生物檢驗(yàn)的分析

水丸的硬度相對(duì)較大，用拍擊式均質(zhì)器時(shí)，易損壞均質(zhì)袋，而旋刀式均質(zhì)器能夠快速將水丸均勻的打碎，由此可見在水丸的微生物檢驗(yàn)時(shí)我們需要用旋刀式均質(zhì)器。

（五）對(duì)膠囊劑的微生物檢驗(yàn)的分析

在進(jìn)行膠囊試劑的檢測(cè)時(shí)需要先加入45℃左右的稀釋劑軟化膠囊使膠囊殼溶解之后再使用相應(yīng)的均質(zhì)器。

（六）對(duì)顆粒劑以及混合劑檢驗(yàn)分析

顆粒是比較容易溶解的均質(zhì)，兩種均質(zhì)器不會(huì)有太大的差別，所以使用兩種其中的任一均質(zhì)器都可以達(dá)到混合均勻的效果。

（七）對(duì)上述選擇均質(zhì)器作相應(yīng)的總結(jié)

在進(jìn)行微生物檢驗(yàn)使用均質(zhì)器設(shè)備供試液的時(shí)候，必須先對(duì)藥品進(jìn)行分析和歸類，選用合適的均質(zhì)器，這樣才能提高微生物的檢出率，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

總結(jié)：本文通過講述用兩種不同均質(zhì)器進(jìn)行的藥品污染微生物回收率的試驗(yàn)，得到不同劑型的藥品細(xì)菌的回收率有明顯的差距的結(jié)果，因此在使用均質(zhì)器的之前我們首先要分析一下藥品的劑型然后再選擇合適的均質(zhì)器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，否則會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)誤差，從而影響我國的臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，甚至?xí)?dǎo)致患者的生命安全受到威脅，這與中國現(xiàn)階段所講的要實(shí)現(xiàn)全面小康，就先實(shí)現(xiàn)全面健康不相符，所以我們需要更加注重試驗(yàn)的可考察性。

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（作者單位：天津藥物研究院藥業(yè)有限責(zé)任公司）