非血緣供者異基因外周血造血干細(xì)胞移植治療急慢性白血病37例療效分析

朱 玲，薛 梅，閻紅敏，韓冬梅，丁 麗，鄭曉麗，劉 靜，王志東，王恒湘

異基因造血干細(xì)胞移植是目前根治白血病的惟一方法，尋找人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)相合的供者非常重要，但是由于我國(guó)獨(dú)生子女政策等原因，尋找血緣HLA相合供者的難度增加，因此，從骨髓庫(kù)尋找非血緣HLA相合供者成為另一種途徑。我院2005—2012年，采用非血緣供者異基因外周血干細(xì)胞移植(URD-PBSCT)治療37例急慢性白血病，取得較好效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 病例資料 37例均為我院住院的急慢性白血病患者，男25例，女12例；年齡3～43歲，中位年齡22歲，年齡<30歲者31例(占84%)。其中慢性粒細(xì)胞白血病(CML)15例(慢性期14例，加速期1例)，急性髓系白血病(AML)7例(M1 1例，M2 3例，M4 1例，M5 2例)，急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)15例(T-ALL 2例，B-ALL 13例)。病例入選標(biāo)準(zhǔn)：高危急性淋巴細(xì)胞白血病、急性非淋巴細(xì)胞白血病第一次緩解期、慢性粒細(xì)胞白血病加速期及慢性期，且在中華骨髓庫(kù)、陽(yáng)光骨髓庫(kù)找到相合供者。所有患者均采用非血緣HLA配型相合(高分辨配型8位點(diǎn)以上相合)的外周血干細(xì)胞移植。

1.2 供者來(lái)源 37例非血緣供者中，35例來(lái)自中華骨髓庫(kù)，2例來(lái)自陽(yáng)光骨髓庫(kù)。其中25例10/10相合，10例9/10相合，2例8/10相合；28例男性供者，9例女性供者；血型相合10例，血型不合27例(其中主要不合18例，次要不合9例)。

1.4 預(yù)處理方案 4例B-ALL患者預(yù)處理方案為全身放療+環(huán)磷酰胺+阿糖胞苷(TBI/CY/Ara-C)：TBI -7～-6 d，4.5 Gy/d；Ara-C -5～-4 d，4 g·(m2)-1·d-1；CY -3～-2 d，55 mg·kg-1·d-1，均靜脈滴注。其余33例患者均采用白消安(馬利蘭)聯(lián)合環(huán)磷酰胺和阿糖胞苷(BU/CY/Ara-C)方案：BU -8～-6 d，0.8 mg·kg-1·d-1；CY -4～-3 d，55 mg·kg-1·d-1；Ara-C -6～-5 d ，4 g·(m2)-1·d-1，均靜脈滴注。

1.5 急性移植物抗宿主病(aGVHD)防治 采用環(huán)孢素A(CsA)、抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)、霉酚酸酯(MMF)及短程甲氨蝶呤(MTX)方案預(yù)防aGVHD。CsA 3 mg·kg-1·d-1，-1 d開(kāi)始靜脈滴注，+28 d改為口服，維持血藥濃度在200～400 ng/L；MTX +1 d 21 mg/m2，+3、+6、+11d 10 mg/m2，靜脈滴注；MMF 1.0 g/d，口服(移植當(dāng)天開(kāi)始，根據(jù)血象調(diào)整劑量,可減為0.5 g/d維持至移植后90 d)；ATG 200～400 mg/d，-4～-1 d，靜脈滴注。出現(xiàn)aGVHD，給予甲強(qiáng)龍2 mg/kg沖擊，然后逐漸減量。

1.6 支持治療 移植后+7 d給予G-CSF 5～10 μg·kg-1·d-1，至白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥4.0×109/L時(shí)停藥，血小板計(jì)數(shù)≤20×109/L時(shí)，輸注血單采血小板懸液。于-7 d～+2 d給予更昔洛韋250 mg/d預(yù)防巨細(xì)胞病毒(CMV)感染，肝素及前列腺素E1預(yù)防肝靜脈閉塞綜合征，水化、堿化尿液及美司那預(yù)防出血性膀胱炎，監(jiān)測(cè)CMV-DNA，并及時(shí)治療。所有血制品均經(jīng)過(guò)25 Gy照射。

1.7 植入證據(jù)檢測(cè) 中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)>0.5×109/L為粒細(xì)胞植入;血小板計(jì)數(shù)>20×109/L為血小板植入;進(jìn)行骨髓或外周血HLA分型檢測(cè),HLA鑒定轉(zhuǎn)變?yōu)楣┱咝蜑橹不钭C據(jù);ABO血型不合者,檢測(cè)血型轉(zhuǎn)變?yōu)楣┱哐蜑橹不钭C據(jù);供受者性別不同者,性染色體轉(zhuǎn)變?yōu)楣┱咝托匀旧w為植活證據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 造血重建情況 37例患者中有2例植入失敗，35例獲得造血重建，中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)>0.5×109/L的時(shí)間為10～26 d，中位時(shí)間為15.8 d；血小板計(jì)數(shù)>20×109/L的時(shí)間為10～77 d，中位時(shí)間為19.6 d。移植后1個(gè)月骨髓像基本恢復(fù)正常,植入鑒定證實(shí)HLA為供者型,供受者性別不同者其性染色體轉(zhuǎn)型成功,移植后3個(gè)月內(nèi)血型不合患者ABO血型轉(zhuǎn)變?yōu)楣┱咝汀?/p>

2.2 aGVHD發(fā)生率及治療 14例發(fā)生aGVHD，發(fā)生率為38%，其中8例Ⅰ～Ⅱ度皮膚aGVHD，均痊愈；3例Ⅰ～Ⅱ度肝臟aGVHD，經(jīng)免疫抑制劑治療后均痊愈；3例Ⅱ～Ⅲ度腸道aGVHD，經(jīng)CsA、MMF、糖皮質(zhì)激素、布地奈德治療后，有2例好轉(zhuǎn)，1例于+1.5個(gè)月死于aGVHD；9 例發(fā)生慢性移植物抗宿主病(cGVHD)，其中2例病變廣泛(表現(xiàn)皮膚Ⅳ度及肝臟Ⅱ度GVHD)、7例病變局限，經(jīng)免疫抑制劑治療均痊愈。本研究采用CsA、ATG、MMF及短程MTX方案預(yù)防aGVHD，Ⅰ～Ⅱ度aGVHD發(fā)生率為32%(12/37)，Ⅲ度aGVHD發(fā)生率為5%(2/37)，無(wú)Ⅳ度aGVHD發(fā)生；cGVHD發(fā)生率為24%(9/37)。

2.3 其他并發(fā)癥 合并出血性膀胱炎12例，經(jīng)水化、堿化尿液、美司那治療均痊愈。巨細(xì)胞病毒血癥13例，應(yīng)用膦甲酸鈉或更昔洛韋治療后CMV轉(zhuǎn)陰?？ㄊ戏文蚁x(chóng)肺炎1例，經(jīng)磺胺及糖皮質(zhì)激素治療后痊愈。臨床診斷真菌感染4例，經(jīng)抗真菌治療痊愈。合并純紅細(xì)胞再生障礙性貧血3例，經(jīng)促紅細(xì)胞生成素(EPO)、糖皮質(zhì)激素及美羅華治療均痊愈。無(wú)一例發(fā)生間質(zhì)性肺炎及肝靜脈阻塞綜合征。

2.4 隨訪(fǎng)及生存情況 37例患者的隨訪(fǎng)時(shí)間為1.5～90.0個(gè)月，中位隨訪(fǎng)時(shí)間45.7個(gè)月，其中8例復(fù)發(fā)(3例急性非淋巴細(xì)胞白血病，5例急性淋巴細(xì)胞白血病)，5例接受了二次移植。觀察期間全組共30例存活，7例死亡，死亡時(shí)間+1.5～+24個(gè)月。死亡原因包括：3例死于第一次移植后復(fù)發(fā)，2例死于第二次移植后復(fù)發(fā)、感染和Ⅲ度腸道aGVHD，2例植入失敗分別于+14 d和+45 d因感染及腸道Ⅲ度aGVHD死亡?？傮w生存率為81%(30/37)，其中6/7例AML生存，10/15例ALL生存，14/15例CML生存，4例CML生存時(shí)間超過(guò)5年，其中1例已無(wú)病生存78個(gè)月(見(jiàn)表1)。

表1 37例患者的臨床資料

注：*例13、15二次移植后復(fù)發(fā)死亡；例17、22、23移植后復(fù)發(fā)死亡；例24、27移植后植入失敗死亡；ANC=中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，PLT=血小板計(jì)數(shù)

3 討論

造血干細(xì)胞移植是治愈白血病的有效手段，患者同胞相合供者的全相合概率約為25%，由于我國(guó)獨(dú)生子女政策，使許多患者缺乏了同胞造血干細(xì)胞的來(lái)源，血緣相合移植可能性明顯降低。因此，從骨髓庫(kù)尋找非血緣供者對(duì)白血病患者的長(zhǎng)期生存至關(guān)重要。既往，URD-HSCT 的風(fēng)險(xiǎn)在于植入失敗、GVHD等并發(fā)癥。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，捐獻(xiàn)者登記人數(shù)的增加，HLA高分辨配型的應(yīng)用，GVHD治療方案的改進(jìn)及感染等并發(fā)癥的控制等，URD-HSCT 應(yīng)用率逐年提高，目前我國(guó)20歲以下患者的URD-HSCT已占異基因造血干細(xì)胞移植的50%左右[1]。URD-HSCT治療的效果多與疾病自身狀態(tài)有關(guān)。Yumura等[2]研究提示，惡性血液病標(biāo)危組無(wú)事件生存率明顯高于高危組的生存率。對(duì)不同疾病、疾病類(lèi)型及疾病分期患者，URD-PBSCT的無(wú)病生存率分別為：CML為75%，ALL CR1及CR2為47%，CR3為20%。AML緩解期接受移植較進(jìn)展期移植有明顯的生存優(yōu)勢(shì)[3]。單個(gè)位點(diǎn)不配的血緣相合移植與URD-PBSCT的療效類(lèi)似[4]，急慢性白血病患者非血緣移植的總生存率為84%[5]，Zhang等[6]比較了采用血緣全合移植與非血緣移植、臍血移植在兒童高危ALL的療效，患兒均為第二次緩解，兩組無(wú)病生存時(shí)間相似，因而主張?jiān)跓o(wú)同胞供者情況下，可選用全合非血緣移植治療高危兒童ALL。Nemecek等[7]回顧分析了155例接受無(wú)關(guān)供者捐髓移植治療第3次緩解ALL的療效，發(fā)現(xiàn)患者5年無(wú)病生存率為30%，復(fù)發(fā)者和非復(fù)發(fā)者5年病死率分別為25%和45%,并認(rèn)為該移植方法可使第3次緩解ALL兒童長(zhǎng)期無(wú)病生存。

本組接受URD-PBSCT 治療的37例患者中，31例年齡在30歲以下。病例主要為高危ALL、AML第一次緩解期、CML加速急變期及慢性期，在中華骨髓庫(kù)、陽(yáng)光骨髓庫(kù)找到相合供者。移植失敗2例，總生存率為81%。在不同類(lèi)型疾病接受URD-PBSCT患者中CML的生存率最高，15例中有14例生存，總生存率高達(dá)93%，其中4例生存時(shí)間超過(guò)5年，1例已無(wú)病生存78個(gè)月。結(jié)果與以上文獻(xiàn)資料相似甚至優(yōu)于相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，這與預(yù)處理方案優(yōu)化、移植所擁有的經(jīng)驗(yàn)等均有關(guān)。

在URD-PBSCT過(guò)程中，降低GVHD是移植成功的關(guān)鍵。而既往采用CsA+MTX預(yù)防aGVHD，在URD-PBSCT中GVHD較明顯，Carreras等[8]研究顯示URD-PBSCT的Ⅱ～Ⅳ度aGVHD發(fā)生率為32%～78%，Ⅲ～Ⅳ aGVHD發(fā)生率為28%～50%，嚴(yán)重GVHD發(fā)生率在60%以上。本研究采用CsA、ATG、MMF及短程MTX方案預(yù)防aGVHD，Ⅰ～Ⅱ度aGVHD發(fā)生率僅為32%，Ⅲ度aGVHD發(fā)生率為5%，無(wú)Ⅳ度aGVHD發(fā)生；cGVHD發(fā)生率為24%。本組Ⅲ～Ⅳ度aGVHD 發(fā)生率明顯低于文獻(xiàn)，與血緣全合造血干細(xì)胞移植aGVHD的發(fā)生率接近[9]，提示本組預(yù)防GVHD方案可以達(dá)到較好的療效。URD-PBSCT成功的關(guān)鍵除防治GVHD外，防治復(fù)發(fā)也極為重要。本組8例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為24.3%，其中5例復(fù)發(fā)患者均為ALL，與文獻(xiàn)報(bào)道基本相似[10]。移植后感染并發(fā)癥也影響患者生存率，而CMV感染病死率非常高，因此早期監(jiān)測(cè)CMV病毒，提前預(yù)防、積極治療非常必要。本組CMV感染率為35%，均經(jīng)抗病毒和丙種球蛋白治療后全部轉(zhuǎn)陰，無(wú)一例死亡，較好地控制了移植后CMV感染。本研究結(jié)果提示，采用URD-HSCT治療急慢性白血病安全有效可行，URD-HSCT治療效果與血緣供者來(lái)源的移植結(jié)果相似,加強(qiáng)并發(fā)癥的防治、優(yōu)化預(yù)處理方案及GVHD預(yù)防方案，可提高療效。當(dāng)無(wú)血緣相合移植供者時(shí)，應(yīng)及時(shí)選用無(wú)關(guān)相合移植，為更多血液病患者提供造血干細(xì)胞的來(lái)源以及長(zhǎng)期生存的機(jī)會(huì)。

1 Dini G,Cancedda R,Locatelli F,et al.Unrelated donor marrow transplantation:an update of the experience of the Italian Bone Marrow Group(GITMO)[J].Haematologica,2001,86(5)：451-454.

2 Yumura YK,Inoue M,Sakata N，et al.Unrelated donor bone marrow transplantation for 100 pediatric patients:a single institute′s experience[J].Bone Marrow Transplantation，2005，36(4):307-313.

3 Yao YH，Ying CH,Liang TH，et al.Effect of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation from matched siblings or unrelated donors during the first complete remission in patients with cytogenetically normal acute myeloid leukemia[J].European Journal of Haematology，2010，86(3)：237-245.

4 Avid V,Jorge S,Tao W,et al.One-antigen mismatched related versus HLA-matched unrelated donor hematopoietic stem cell transplantation in adults with acute leukemia:Center for International Blood and Marrow Transplant Research results in the era of molecular HLA typing[J].Biol Blood Marrow Transplant，2011，17(5):640-648.

5 張曦，陳幸華，高蕾，等.無(wú)血緣關(guān)系供者異基因外周血干細(xì)胞移植治療急、慢性白血病49例[J].重慶醫(yī)學(xué)，2010，39(14):1834-1838.

6 Zhang MJ,Davies SM,Camitta BM,et al.Comparison of outcomes after HLA-matched sibling and unrelated donor transplantation for children with high-risk acute lymphoblastic leukemia[J].Biol Blood Marrow Transplant，2012 ，18(9):1466.

7 Nemecek ER,Ellis K,He W.Outcome of myeloablative conditioning and unrelated donor hematopoietic cell transplantation for childhood acute lymphoblastic leukemia in third remission[J].Biol Blood Marrow Transplant，2011，17(12):1833-1840.

8 Carreras E,Tomas JF,Sanz G,et al.Unrelateddonor bone marrow transplantation as treatment for chronic myeloid leukemia:the Spanish experience[J].Haematologica,2000,85(5):530-538.

9 Pdala J,Anasetti C,Harfan D,et al.Decision analysis of peripheral blood versus bone marrow hematopoietic stem cells for allogeneic hematopoietic cell transplantation[J].Biol Blood Marrow Transplant,2009，15(11):1415-1421.

10 黃曉軍，許蘭平，任漢云，等.異基因造血干細(xì)胞移植后巨細(xì)胞病毒感染及其危險(xiǎn)因素分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2003,83(9)：766-769.