雙丹滴丸中丹皮酚包合對(duì)其穩(wěn)定性的影響*

史德勝，李志煥，郭潤(rùn)葡

(1.天津丹溪國(guó)藥研究所，天津 300061； 2.天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司藥材公司，天津 300040； 3. 天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，天津 300193)

雙丹滴丸是由雙丹口服液改劑型而成，后者收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，具有活血化淤，通脈止痛的作用，用于瘀血痹阻所致的胸痹，癥見(jiàn)胸悶、心痛。雙丹滴丸由丹參、牡丹皮二藥組成。牡丹皮是雙丹滴丸的主藥，丹皮酚是牡丹皮的重要有效成分，具有止痛、鎮(zhèn)靜、降壓、抗炎和抗氧化作用[1]，因此，丹皮酚的含量與雙丹滴丸的功效密切相關(guān)。由于丹皮酚的揮發(fā)性，在放置過(guò)程中，雙丹滴丸中丹皮酚含量變化應(yīng)該考查。為了提高丹皮酚的穩(wěn)定性，在雙丹滴丸的制備工藝中丹皮酚采用包合工藝以減少其揮發(fā)。本文采用HPLC法測(cè)定雙丹滴丸中丹皮酚的含量，比較了采用β-環(huán)糊精包合丹皮酚的工藝制備的雙丹滴丸(滴丸Ⅰ)與未包合丹皮酚制備的雙丹滴丸(滴丸Ⅱ)在穩(wěn)定性試驗(yàn)中丹皮酚的含量變化，證明包合工藝可以提高雙丹滴丸中丹皮酚的穩(wěn)定性。

1 材料和儀器

LC-10A型高效液相色譜儀(日本島津)；SPD-10A紫外檢測(cè)器(日本島津)；Anastar色譜工作站；甲醇為分析純，水為蒸餾水。丹皮酚對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)110708-200506)。雙丹滴丸Ⅰ、雙丹滴丸Ⅱ均由天津丹溪國(guó)藥研究所制備。

2 方法和結(jié)果

2.1丹皮酚的含量測(cè)定

2.1.1色譜分析條件 Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(60∶40)；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：274 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μl；理論塔板數(shù)：按丹皮酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2．1．2溶液制備

2.1.2．1對(duì)照品溶液的制備 取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含40 μg的溶液，即得。

2.1.2．2供試品溶液的制備 取本品10丸，研細(xì)，取約50 mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定重量，超聲處理45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.2．3陰性樣品的制備 取缺牡丹皮的處方藥，按制備工藝制成陰性樣品。取適量，研細(xì)，取約50 mg，精密稱定，按“2.1.2.2“項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，依“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，見(jiàn)圖1。

1.丹皮酚

2.1.3線性關(guān)系試驗(yàn) 精密稱取丹皮酚對(duì)照品13.58 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 ml置10 ml量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別取上述溶液20 μl注入液相色譜儀，記錄峰面積。以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)(X)，以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=60 344X-6130(r=0.9999)。在13.58～67.90 μg/ml范圍內(nèi)丹皮酚濃度與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.1.4精密度試驗(yàn) 精密吸取丹皮酚對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積值，計(jì)算得RSD為0.26%。

2.1.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0、2、4、6和8 h進(jìn)樣，測(cè)定丹皮酚峰面積，結(jié)果峰面積RSD為0.42%。結(jié)果表明，供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.6重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取雙丹滴丸樣品6份，制備供試品溶液，測(cè)定，RSD為1.36%。

2.1.7加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取樣品約25 mg，9份，分別加入相當(dāng)于該量80%、100%和120%質(zhì)量的丹皮酚對(duì)照品，制備供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定。結(jié)果丹皮酚平均回收率為100.5%，RSD為1.51%(n=9)，見(jiàn)表1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果(n=9)

2.1.8樣品測(cè)定 取丹皮酚對(duì)照品溶液、雙丹滴丸Ⅰ、雙丹滴丸Ⅱ供試品溶液適量，依法操作，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 雙丹滴丸中丹皮酚含量測(cè)定的結(jié)果(n=3)

2.2穩(wěn)定性研究 根據(jù)中藥、天然藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則，將雙丹滴丸Ⅰ、雙丹滴丸Ⅱ樣品進(jìn)行穩(wěn)定性長(zhǎng)期試驗(yàn)。按市售包裝于(25±2) ℃相對(duì)濕度(60±10)%的條件下放置18個(gè)月，于0、3、6、9、12和18個(gè)月分別取樣，對(duì)丹皮酚含量進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 雙丹滴丸穩(wěn)定性試驗(yàn)丹皮酚含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1牡丹皮是雙丹滴丸中的主藥，其主要成分丹皮酚的生物活性對(duì)雙丹滴丸的療效起著極其重要的作用。本文建立了丹皮酚含量測(cè)定的方法，操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，可以作為雙丹滴丸和雙丹口服液等其他劑型質(zhì)量控制的方法。

3.2丹皮酚是一個(gè)揮發(fā)性成分，從試驗(yàn)結(jié)果中可以看出，未包合丹皮酚制備的雙丹滴丸在放置過(guò)程中，丹皮酚的含量逐漸下降，而采用β-環(huán)糊精包合丹皮酚的工藝，成功地解決了這一問(wèn)題。文獻(xiàn)報(bào)道[2]β-環(huán)糊精包合丹皮酚，不僅降低其揮發(fā)性，同時(shí)增加了丹皮酚的水溶性，提高生物利用度，有利于臨床療效的穩(wěn)定。

1 周家駒，謝桂榮，嚴(yán)建新．中藥影響心腦血管系統(tǒng)活性成分[M]．北京：科學(xué)出版社，2012：216

2 王錚，任天池，喬淑珍.丹皮酚-β-環(huán)糊精包合物的研究[J]．中國(guó)藥學(xué)雜志，1989，24(7)：410