高效液相色譜法測定復(fù)方白芷乳膏中歐前胡素和異歐前胡素含量

何榮芬

(安徽省淮北市人民醫(yī)院，安徽 淮北 235000)

復(fù)方白芷乳膏是淮北市人民醫(yī)院的自制制劑，主要成分為白芷、維生素E。白芷具有美白除斑、潤膚、控油、延緩皮膚衰老的作用。白芷維生素E乳膏經(jīng)臨床驗證，療效好、使用方便、無刺激性、無不良反應(yīng)[1]。維生素E是自由基清除劑，使細胞的脂質(zhì)免受自由基氧化的損害，從而延緩衰老。筆者采用高效液相色譜法測定復(fù)方白芷乳膏中歐前胡素和異歐前胡素的含量，方法操作簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、靈敏度高，適用于制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Waters e2695 HPLC色譜系統(tǒng);Empower Waters工作站;Waters 2489 UV/visible Detector檢測器;超聲波處理器(濟寧奧波超聲電氣有限公司，批號為JAC-300);Mettler AE-240電子分析天平(0．1 mg，0．01 mg)。歐前胡素對照品(批號為 110826-200511，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，置五氧化二磷減壓干燥12 h以上使用);異歐前胡素對照品(批號為110827-201008，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，含量以99．4%計，置五氧化二磷減壓干燥12 h以上使用);復(fù)方白芷乳膏(淮北市人民醫(yī)院制劑，批號分別為 20120928，20121025，20121030);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Hypersil ODS2 C18柱(150 mm×4．6 mm，5 μm);流動相:甲醇 -水(62 ∶38);流速:1．0 mL/min;柱溫:25 ℃;進樣量:20 μL;檢測波長:254 nm[2]。在此條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

分別精密稱取歐前胡素對照品6．37 mg(置五氧化二磷減壓干燥14 h)，異歐前胡素對照品6．73 mg(置五氧化二磷減壓干燥14 h)，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品貯備液[3]。取本品2 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇20 mL，80℃水浴中放置10 min使其完全破乳，再置超聲儀中超聲10 min，放冷至室溫，用甲醇溶解至刻度，置冰浴冷卻1 h，取出后迅速過濾，取續(xù)濾液放冷至室溫，用0．45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液[4]。取處方中不含白芷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別精密量取對照品貯備液 1．0，2．0，4．0，6．0，10．0，20．0 mL，置 50 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1A)，以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(μg/mL)進行線性回歸分析，得回歸方程。歐前胡素 Y=78 855．639 8X＋1 167．223 7(r=0．99999)，進樣質(zhì)量濃度在 1．274 ～25．48 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系;異歐前胡素 Y=74 122．810 8 X-5229．1326(r=0．99999)，進樣質(zhì)量濃度在 1．338 ～ 26．76 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，連續(xù)進樣6次。結(jié)果歐前胡素峰面積為 405 800，406 400，408 900，409 600，410 900，413 800，RSD=0．72%;異歐前胡素峰面積為 394 500，395 100，395 800，398 700，399 800，401 800，RSD=0．74%。表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取樣品測定項下的同一供試品溶液(批號為20121025)在 0，2，4，6，8，10，12 h 時分別進樣測試，記錄色譜圖。結(jié)果歐前胡素峰面積的 RSD為1．76%，異歐前胡素峰面積的RSD為0．90%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗:取同一批號的樣品(批號為20121025)6份，各測定2次，照樣品測定項下方法測定，計算含量。結(jié)果歐前胡素的平均含量為標(biāo)示量的0．092%，RSD為0．79%;異歐前胡素的平均含量為標(biāo)示量的0．047%，RSD為1．28%。結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為20121025)9份，分別置10 mL容量瓶中，分成3組，每組分別精密加入 5．096 μg/mL 的對照品貯備液 2．0，2．4，3．0 mL，照供試品溶液制備方法，精密量取20 μL注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件測定。結(jié)果見表1和表2。

表1 歐前胡素加樣回收率試驗結(jié)果

2．4 樣品含量測定

取本品3批，各取2份，精密稱取適量，置50 mL容量瓶中，按供試品制備方法得供試品溶液。精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1B)，用回歸方程計算含量。結(jié)果見表3和表4。

3 討論

有文獻報道[5-7]，歐前胡素和異歐前胡素的測定波長選擇300 nm和254 nm。取同一對照品溶液，分別在300 nm和254 nm波長處測定，結(jié)果在254 nm波長處測定時歐前胡素和異歐前胡素的峰面積及峰高值均大于在300 nm測定值。故選擇254 nm為測定波長。

表2 異歐前胡素加樣回收試驗結(jié)果

表3 樣品歐前胡素含量測定結(jié)果

表4 樣品異歐前胡素含量測定結(jié)果

在供試品溶液色譜圖中，歐前胡素和異歐前胡素色譜峰之間還有別的組分峰，通過調(diào)節(jié)甲醇-水的比例，可以將歐前胡素和異歐前胡素與其他相鄰的色譜峰達到完全分離。本研究中采用甲醇 -水(62∶38)為流動相，Hypersil ODS2 C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm)，得到了滿意的效果。

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