接骨七厘膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究＊

蔡步林，龍?zhí)鹛?，鄭金鳳，李文莉

(湖南省食品藥品檢驗(yàn)研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410000)

接骨七厘膠囊由乳香、沒藥、當(dāng)歸、土鱉蟲、骨碎補(bǔ)、硼砂、龍血竭、自然銅和大黃9味中藥組成，具活血化瘀、接骨止痛的作用?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中已有硼砂、大黃、龍血竭的薄層色譜鑒別，而乳香等君藥沒有質(zhì)控指標(biāo)[1]。采用薄層色譜法對(duì)乳香進(jìn)行了定性鑒別，并采用高效液相色譜法測(cè)定骨碎補(bǔ)中柚皮苷的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供了快速、準(zhǔn)確的測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型series高效液相色譜儀;CG300型超聲儀。乳香對(duì)照藥材(供鑒別用，批號(hào)為0970-200202)，柚皮苷對(duì)照品(供含量測(cè)定用，批號(hào)為110722-200610)，均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;接骨七厘膠囊由企業(yè)提供(規(guī)格每粒0．26 g)，陰性樣品按處方自制;甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 乳香薄層色譜鑒別[2-3]

取本品內(nèi)容物1 g，研細(xì)，加乙醇50 mL，回流提取1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。按處方稱取缺乳香的其他藥材，制成缺乳香的陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液制備方法制成缺乳香的陰性對(duì)照品溶液。另取乳香對(duì)照藥材0．2 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條斑，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，放置2 h后，日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的斑點(diǎn)，缺乳香的陰性對(duì)照品溶液色譜中有部分斑點(diǎn)與對(duì)照藥材溶液色譜一致，但未見對(duì)照藥材溶液色譜中的黃綠色斑點(diǎn)(圖1)，故可作為質(zhì)量控制指標(biāo)，并規(guī)定“供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，應(yīng)顯相同的黃綠色斑點(diǎn)”。

2．2 柚皮苷含量測(cè)定[4-5]

2．2．1 色譜條件

色譜柱:Agilent TC C18柱(250 mm × 4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 -0．1%磷酸(30 ∶70);流速:0．8 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):283 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

2．2．2 溶液制備

取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物(批號(hào)為110903)，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，加水80 mL，置70℃熱水中保溫2 h，離心，取上清液減壓濃縮至約10 mL，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。按處方取除骨碎補(bǔ)外的其余藥材，制成缺骨碎補(bǔ)陰性樣品，照供試品溶液制備方法同法制成缺骨碎補(bǔ)陰性對(duì)照品溶液。

2．2．3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):分別吸取柚皮苷對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2。供試品溶液中柚皮苷能基線分離，分離度大于2．0，理論板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算不低于3 000，陰性對(duì)照品溶液在對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置無色譜峰出現(xiàn)，表明樣品中其他成分對(duì)柚皮苷測(cè)定無干擾。

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液(21．92 μg/mL)1，2，5，10 μL 和對(duì)照品溶液(219．2 μg/mL)1，2，5，10 μL，注入液相色譜儀測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量為(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=2．298 2X＋0．940 7，r=0．999 9(n=6)。結(jié)果表明，柚皮苷對(duì)照品進(jìn)樣量在0．021 92～2．192 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一供對(duì)照溶液，依法測(cè)定6次。結(jié)果峰面積的 RSD為0．8%(n=6)，表明儀器精密度良好。

圖1 乳香薄層色譜圖

圖2 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)樣品(批號(hào)為110903)，依法制備6份供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果平均含量為0．226 mg/粒，RSD為0．9%，重復(fù)性好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)為110903)，分別于配制后的 0，2，4，6，8，10，12，24 h 時(shí)，精密吸取 10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果柚皮苷峰面積 RSD為0．5%(n=8)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取裝量差異項(xiàng)下已知含量的樣品(批號(hào)為110903)，研細(xì)，取約0．5 g(共6份)，精密稱定，精密加入柚皮苷對(duì)照品適量，依法制備供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2．2．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，分別制備供試品溶液，依法測(cè)定并計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為110901，110902，110903的樣品中每粒含柚皮苷0．25，0．23，0．22 mg。

3 討論

經(jīng)過不斷摸索試驗(yàn)，制訂了乳香的鑒別方法。該方法特征斑點(diǎn)明顯，色譜分離清晰，可用作接骨七厘膠囊中乳香的專屬性鑒別。取對(duì)照品溶液，照紫外分光光度法在200～390 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在283．1 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，并參考2010年版《中國(guó)藥典(一部)》骨碎補(bǔ)含量測(cè)定項(xiàng)，選擇283 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。分別采用甲醇-水(30∶70)、甲醇-0．1%磷酸(30∶70)、乙腈 -水(25∶75)作為流動(dòng)相，結(jié)果表明，甲醇-0．1%磷酸(30∶70)流動(dòng)相可用于接骨七厘膠囊中柚皮苷的含量測(cè)定。

[1]WS3-424(Z-72)-2010Z，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S]．

[2]范 彬．歸附調(diào)經(jīng)顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志2011，18(11):55-58．

[3]孫 磊．乳香基原的本草學(xué)、植物學(xué)和成分分析研究[J]．中國(guó)中藥雜志，2011，2(36):112-116．

[4]程?hào)|巖．HPLC法測(cè)定結(jié)腸炎奇效顆粒中柚皮苷的含量[J]．中國(guó)藥師，2011，14(11):1 620-1 621．

[5]馬才敬．炮制骨碎補(bǔ)的提取及其柚皮苷的純化研究[J]．中國(guó)藥業(yè)，2012，2(21):43-44．