大鼠模型在更年期綜合征中西醫(yī)實(shí)驗(yàn)研究中的應(yīng)用概述

辛明蔚 劉雁峰

更年期綜合征指婦女絕經(jīng)前后由于性激素減少所致的一系列軀體及精神心理癥狀，主要臨床表現(xiàn)有月經(jīng)紊亂、血管舒縮癥狀、精神神經(jīng)癥狀、泌尿生殖道癥狀、心血管疾病、骨質(zhì)疏松等。隨著生活水平提高，工作壓力加大，人口老齡化加劇，更年期綜合征的發(fā)病率逐年增高。為進(jìn)一步研究其發(fā)病機(jī)理，給臨床治療提供更多可靠、客觀可行的治療依據(jù)，近年來(lái)圍繞更年期綜合征做了一系列基礎(chǔ)研究和臨床研究?，F(xiàn)將近年大鼠模型在更年期綜合征中的應(yīng)用研究綜述如下。

1 動(dòng)物模型的選擇

1.1 去勢(shì)大鼠模型

1.1.1 手術(shù)摘除卵巢 手術(shù)摘除卵巢可人為地造成雌激素突然降低來(lái)模擬更年期綜合征的狀態(tài)。雌性大鼠麻醉后固定于解剖臺(tái)上，經(jīng)背側(cè)切口剝離雙側(cè)輸卵管用細(xì)線結(jié)扎，摘除雙側(cè)卵巢，術(shù)后5天起連續(xù)5天陰道涂片，觀察有無(wú)發(fā)情跡象，評(píng)價(jià)手術(shù)效果，以不出現(xiàn)動(dòng)情期反應(yīng)為造模成功。因?yàn)檫@種方法比較簡(jiǎn)單易行，因此是臨床常用的一種大鼠造模方法。

1.1.2 酒精性更年期綜合征大鼠模型 盧金福等[1]在無(wú)菌的條件下，將0.2 ml無(wú)水乙醇注射到大鼠雙側(cè)卵巢內(nèi)，每周觀察血清雌二醇、孕酮的變化及卵巢病變情況，連續(xù)4周。觀察本模型從1～4周雌二醇的水平持續(xù)顯著降低，認(rèn)為這種變化與臨床更年期綜合征卵巢功能衰退導(dǎo)致的雌激素水平下降的情況相吻合。病理檢查顯示：在前2周內(nèi)病變以炎癥為主，在后2周內(nèi)病變以囊腫、萎縮為主，尤其以4周卵巢萎縮更為嚴(yán)重。認(rèn)為乙醇引起大鼠卵巢的部分萎縮、雌二醇水平下降與臨床更年期綜合征有相似之處，該模型為更年期綜合征的研究與相關(guān)藥物的開(kāi)發(fā)提供了一個(gè)新的途徑。

1.1.3 X線照射破壞卵巢模型 曲顯俊等[2]將大鼠固定于平板上，暴露下腹部卵巢區(qū)，置于電子直線加速器2100C照射野下，野寬距4 cm，劑量率4 Gy/min，以高能X線(6MeV)照射2.5分鐘，總劑量9 Gy。照射后第10天起體重明顯減輕，照射后21天大鼠子宮、卵巢重量顯著降低，垂體重量明顯升高，提示卵巢受到損傷后，垂體反饋性增殖，自主活動(dòng)顯著增多，甘油三酯和膽固醇含量明顯升高等。該法通過(guò)X線破壞卵巢反映更年期的狀態(tài)。

1.1.4 重復(fù)應(yīng)激大鼠模型 連曉媛等[3]采用制動(dòng)應(yīng)激方法，將有規(guī)律性周期(4～5天)的雌性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組和應(yīng)激組。應(yīng)激時(shí)間安排在 8∶30～16∶30之間，每天制動(dòng)應(yīng)激1次，連續(xù)15天，第1～3天每天制動(dòng)應(yīng)激2小時(shí)，以后每3天延長(zhǎng)應(yīng)激時(shí)間1小時(shí)。并研究發(fā)現(xiàn)重復(fù)應(yīng)激可引起雌性大鼠卵巢功能紊亂或減退，性周期表現(xiàn)為延長(zhǎng)或無(wú)生理規(guī)律或無(wú)性周期交替而持續(xù)處于間情期；卵巢分泌雌二醇功能減退，分泌孕酮功能明顯紊亂，性周期中各階段血漿雌二醇水平顯著降低和/或生理周期失常或消失，孕酮水平顯著升高和生理分泌模式失常，部分動(dòng)物血漿孕酮水平向更年期綜合征動(dòng)物變化，此模型適用于防治女性卵巢功能紊亂和退化性疾病的藥物藥效學(xué)研究。

1.1.5 更年期抑郁癥模型 董莉等[4]采用大鼠去勢(shì)及慢性不可預(yù)見(jiàn)應(yīng)激兩步法復(fù)合制作更年期抑郁癥動(dòng)物模型，有效地模仿婦女更年期由于卵巢功能衰退引起的情感障礙、情緒低落的臨床表現(xiàn)。模型大鼠在行為上的表現(xiàn)為在規(guī)定時(shí)間內(nèi)的水平活動(dòng)和垂直活動(dòng)次數(shù)均減少、糖水消耗量降低，與臨床更年期抑郁癥患者的表現(xiàn)相似。采用復(fù)合方法制作更年期抑郁癥動(dòng)物模型是可行性的、可靠的，可作為治療更年期抑郁癥藥物篩選以及用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)機(jī)制探討該病發(fā)病機(jī)制的有效手段之一。

1.2 自然衰老大鼠模型

孫靜汾等[5]采用15月齡大鼠與去勢(shì)模型作對(duì)照，兩模型陰道脫落細(xì)胞涂片及血清性激素水平均有圍絕經(jīng)期改變，證明本模型可以達(dá)到與去勢(shì)模型相同的造模效果，所以本模型的建立是成功的，但去勢(shì)模型大鼠沒(méi)有自然衰老過(guò)程，其他各個(gè)系統(tǒng)均為青年，與更年期綜合征機(jī)體老化有一定差距；另外，去勢(shì)模型大鼠卵巢的徹底切除與更年期綜合征大鼠卵巢功能的衰竭有著本質(zhì)的不同，本模型比去勢(shì)模型更接近事實(shí)本身，用此模型研究更年期綜合征更具有說(shuō)服力。然而目前出于經(jīng)濟(jì)利益的考慮，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心不飼養(yǎng)，因此這種自然老化的更年期綜合征大鼠來(lái)源非常稀少。

2 實(shí)驗(yàn)研究

2.1 發(fā)病機(jī)理研究

針對(duì)更年期綜合征的主要臨床表現(xiàn)，學(xué)者利用大鼠模型進(jìn)行了一系列的基礎(chǔ)研究以闡明其發(fā)病機(jī)理，主要內(nèi)容如下所述。

2.1.1 血管舒縮狀態(tài) 張慧等[6]研究同一溫度刺激下去卵巢大鼠組下丘腦視上核和室旁核細(xì)胞c-Fos蛋白表達(dá)不同，發(fā)現(xiàn)不同溫度刺激下，下丘腦視上核和室旁核對(duì)外界溫度刺激的敏感范圍縮小，敏感細(xì)胞密度降低。以上變化可能引起機(jī)體血壓、滲透壓以及體溫調(diào)節(jié)異常，出現(xiàn)頭暈、血壓不穩(wěn)和潮熱等一系列更年期綜合征相關(guān)癥狀。

2.1.2 精神神經(jīng)癥狀 許曉伍等[7]提出大鼠去卵巢后海馬CAl區(qū)神經(jīng)元線粒體第12天變性最明顯，提示線粒體變性可能導(dǎo)致女性更年期后神經(jīng)元退變或與阿爾茨海默病發(fā)病有關(guān)。姚柏春[8]研究發(fā)現(xiàn)嗅成鞘細(xì)胞通過(guò)改善植入神經(jīng)干細(xì)胞在阿爾茨海默病腦內(nèi)的存活、遷移和分化能力以及與宿主腦的聯(lián)系，提高神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠阿爾茨海默病的效果，提出神經(jīng)干細(xì)胞與嗅成鞘細(xì)胞共同移植更有利于提高神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元的分化率，更有利于阿爾茨海默病大鼠海馬CA1區(qū)突觸素的表達(dá)。頡賓芳等[9]發(fā)現(xiàn)大腦皮層及海馬區(qū)腦組織中甲狀腺素受體α1 mRNA的過(guò)表達(dá)及由此而加劇的神經(jīng)細(xì)胞tau蛋白磷酸化可能參與或促進(jìn)了大鼠阿爾茨海默病的發(fā)生發(fā)展。

2.1.3 心血管疾病 金香蘭等[10]研究發(fā)現(xiàn)去卵巢后補(bǔ)充雌二醇，可使心血管中雌激素受體表達(dá)增加，提示絕經(jīng)后心血管中雌激素受體含量減少可能是導(dǎo)致絕經(jīng)后女性心血管病發(fā)病率迅速上升的重要機(jī)制之一。去卵巢后補(bǔ)充雌二醇可使血清中一氧化氮(NO)含量增加，內(nèi)皮素含量減少，說(shuō)明血中雌二醇可以影響或調(diào)節(jié)心血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO和內(nèi)皮素的含量。楊帆等[11]研究發(fā)現(xiàn)雌激素缺乏導(dǎo)致了更年期綜合征大鼠血壓的增加，口服小劑量17β-雌二醇補(bǔ)充治療可降低因雌激素缺乏導(dǎo)致的更年期綜合征大鼠血壓的增加，這可能是雌激素對(duì)心血管系統(tǒng)的重要保護(hù)機(jī)制之一。

2.1.4 骨礦含量改變及骨質(zhì)疏松 張蕾等[12]提出骨質(zhì)疏松癥大鼠骨髓細(xì)胞中巨核細(xì)胞蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶2表達(dá)水平增加，且多發(fā)生在骨髓內(nèi)分化成熟的骨細(xì)胞中；巨核細(xì)胞蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶2可能在骨質(zhì)疏松癥的發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。

目前對(duì)更年期綜合征的發(fā)病機(jī)理研究主要集中在雌激素缺乏后各個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)生的變化，研究熱點(diǎn)為精神神經(jīng)癥狀和心血管疾病，這與臨床癥狀的表現(xiàn)相符。

2.2 西藥作用機(jī)理研究

利用大鼠模型對(duì)西藥作用機(jī)理的研究主要集中在對(duì)各種人工激素和化學(xué)合成藥物對(duì)更年期綜合征臨床表現(xiàn)的作用及作用機(jī)理研究。

郭然等[13]研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖可以提高圍絕經(jīng)期大鼠血清白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)水平；降低白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平，從而改善圍絕經(jīng)期大鼠的免疫功能，殼聚糖是甲殼素脫乙?；玫降漠a(chǎn)物，無(wú)毒副作用，有抗腫瘤、抗菌、抗凝血等功效，還可以作為醫(yī)用敷料，具有藥用及保健功能。楊帆等[14]觀察腹腔注射褪黑素對(duì)去卵巢抑郁大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(FST)中的不動(dòng)時(shí)間、上竄時(shí)間和游泳時(shí)間的影響，提出雌激素缺乏導(dǎo)致了更年期綜合征大鼠在FST中有抑郁樣表現(xiàn)，腹腔注射褪黑素可改善因雌激素缺乏導(dǎo)致的更年期綜合征大鼠的抑郁樣表現(xiàn)。

雌激素治療更年期綜合征臨床應(yīng)用廣泛，但是可能會(huì)有引發(fā)子宮內(nèi)膜癌等許多不良影響，因此開(kāi)發(fā)新的有效的化學(xué)藥物治療更年期綜合征迫在眉睫，大鼠模型在新藥研究中的作用功不可沒(méi)。

2.3 中藥作用機(jī)理研究

利用大鼠模型對(duì)中藥的研究主要集中在對(duì)中藥單一成分、中藥復(fù)方、中藥有效部位群、中成藥、中藥制作工藝、量效關(guān)系及經(jīng)方的研究。

龔青等[15]的研究發(fā)現(xiàn)，卵巢切除后10周大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒血管功能下降，淫羊藿苷可改善卵巢切除大鼠胸主動(dòng)脈舒血管功能。淫羊藿苷可能成為絕經(jīng)后女性心血管疾病防治有效藥物之一。高峰等[16]提出淫羊藿苷治療去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥共有532條基因發(fā)生了差異表達(dá)，其中有175條基因上調(diào)357條基因下調(diào)，由此提出多種基因差異表達(dá)是淫羊藿苷治療去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥的可能分子機(jī)制。江波等[17]研究發(fā)現(xiàn)更年平調(diào)液能抑制心肌細(xì)胞凋亡而對(duì)心肌細(xì)胞起著重要的保護(hù)作用。馮冰虹等[18]根據(jù)中藥不同的理化性質(zhì)和功效，分別用有機(jī)溶劑乙醇或乙醚提取中藥的有效部位群，并將所提取有效部位群組成補(bǔ)腎活血方有效部位群，研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)更年期綜合征SD大鼠有抗氧化的作用。杜永紅等[19]研究提出補(bǔ)腎調(diào)沖方治療更年期綜合征的作用機(jī)制可能是通過(guò)升高下丘腦β-內(nèi)啡肽含量，使β-內(nèi)啡肽與促性腺激素釋放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)神經(jīng)元上的β-內(nèi)啡肽受體結(jié)合直接抑制促性腺激素釋放激素神經(jīng)元活動(dòng)，從而抑制垂體釋放促黃體生成素。肖愛(ài)嬌等[20]提出補(bǔ)益肝腎中藥具有改善更年期抑郁癥大鼠模型的學(xué)習(xí)記憶力，可能與其減輕海馬損傷有關(guān)。易延逵等[21]采用較先進(jìn)的超臨界流體萃取(SFE-CO2)技術(shù)、生物包合技術(shù)能夠提高更年顆粒的療效，為SFE-CO2技術(shù)、生物包合技術(shù)推廣應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

盂毅等[22]認(rèn)為改善衰老卵巢形態(tài)、上調(diào)衰老卵巢富含胱氨酸的酸性分泌蛋白(scretedproteinacidic and rich in cysteine，SPARC )mRNA表達(dá)可能是大豆異黃酮改善圍絕經(jīng)期卵巢微循環(huán)血管功能的機(jī)制之一。溫曉輝等[23]研究發(fā)現(xiàn)抵當(dāng)湯可防治去卵巢大鼠血脂異常，具有調(diào)節(jié)血脂、保護(hù)內(nèi)皮功能作用。沈欣等[24]研究梔豉湯400～800 mg·kg-1口服2周，對(duì)去卵巢大鼠有明顯的雌激素樣作用，并可調(diào)節(jié)因雌激素減少而引起的組織器官的退行性變和紊亂的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，且有一定的量效關(guān)系。吳洪海等[25]提出葛根素改善去卵巢對(duì)大鼠心肌影響的作用，對(duì)去卵巢大鼠心臟有保護(hù)作用。劉艷玲等[26]提出一解合方治療更年期抑郁癥可能是通過(guò)影響5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)受體亞型 5-HTRIAmRNA轉(zhuǎn)錄功能，進(jìn)而發(fā)揮抗抑郁作用。5-HTRIAmRNA轉(zhuǎn)錄功能可作為治療靶標(biāo)，值得進(jìn)一步研究。謝人明等[27-28]通過(guò)觀察口服婦科養(yǎng)榮膠囊后更年期綜合征雌性大鼠免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的變化，提出其具有提高更年期綜合征雌性大鼠體液免疫功能的作用，可升高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物子宮指數(shù)(P<0.01)和卵巢指數(shù)(P<0.05)；對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有提升體內(nèi)雌激素的趨勢(shì)，具有增加更年期綜合征雌性大鼠造血功能的作用[29]。

近幾年中藥研究取得比較大的進(jìn)展,為中藥新藥的研制和推廣做出比較大的貢獻(xiàn)，但是在進(jìn)行客觀化指標(biāo)研究時(shí)樣本較少，難以說(shuō)明問(wèn)題。在療效判定上尚無(wú)統(tǒng)一規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)，影響了療效的可信度。實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的觀察目前多以性激素分泌、調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量以及免疫功能、血脂、骨代謝等指標(biāo)為主，建議采用分子生物學(xué)等先進(jìn)技術(shù)手段，進(jìn)一步深入到細(xì)胞水平、分子水平的研究，將使中醫(yī)藥的研究進(jìn)入更深、更高層次。另外利用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段與方法，加強(qiáng)對(duì)單味藥的篩選、研制，開(kāi)發(fā)出療效確切、安全可靠的新型制劑，將是中醫(yī)藥走向世界的重要途徑之一。

2.4 針灸作用機(jī)理研究

針灸治療更年期綜合征有一定的療效，目前利用大鼠模型對(duì)針灸治療更年期綜合征的基礎(chǔ)研究主要針對(duì)其“治未病”的預(yù)防保健作用和對(duì)臨床癥狀的治療作用機(jī)理，以及取穴和穴位埋線治療作用等。

孫志芳等[30]觀察逆灸“關(guān)元”穴對(duì)12月齡自然更年期綜合征大鼠體內(nèi)中樞及外周熱休克蛋白70(heat shock proteins，HSP70)及其信使RNA(HSP70mRNA)的影響，提出逆灸“關(guān)元”穴對(duì)隨后自然更年早期大鼠中樞及外周應(yīng)激蛋白及基因的調(diào)節(jié)作用，可能是該療法實(shí)現(xiàn)保護(hù)作用的途徑之一。王淑娟等[31]提出保健灸法具有抗氧化的功能，并且可通過(guò)調(diào)控p53蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞的凋亡，延緩衰老。韓玉生等[32]研究針刺對(duì)更年期綜合征腦缺血大鼠缺血區(qū)腦組織膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)和標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞(OX42)蛋白表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)針刺能夠抑制膠質(zhì)細(xì)胞GFAP和OX42的活化，減輕腦缺血后的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而改善腦組織病理學(xué)損傷狀態(tài)，起到神經(jīng)保護(hù)作用。曾揚(yáng)等[33]的研究發(fā)現(xiàn)針刺對(duì)圍絕經(jīng)期偏頭痛有干預(yù)作用，其可能機(jī)理是針刺可以提高血清雌二醇、孕酮、β-內(nèi)啡肽含量，并降低血清P物質(zhì)含量，調(diào)節(jié)圍絕經(jīng)期內(nèi)分泌紊亂，達(dá)到防治偏頭痛的效果。程凱等[34]的研究中各電針組去卵巢大鼠血清雌二醇水平明顯升高，卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)、黃體生成素(luteinizing Hormone，LH)、GnRH水平則明顯降低。說(shuō)明三陰交、關(guān)元兩穴對(duì)去卵巢大鼠紊亂的下丘腦—垂體—卵巢軸功能和生殖內(nèi)分泌環(huán)境具有良性調(diào)節(jié)作用。李月梅等[35]研究發(fā)現(xiàn)穴位埋線治療更年期綜合征的作用可能與其能調(diào)整去勢(shì)雌性大鼠下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，糾正下丘腦紊亂的植物神經(jīng)功能有關(guān)。

總之，目前針灸對(duì)更年期綜合征的治療實(shí)驗(yàn)研究較多，均取得一定效果，但是對(duì)于模型的選擇和評(píng)價(jià)尚有欠缺，今后對(duì)于穴位的特異性、針灸的時(shí)效性及作用機(jī)制應(yīng)加強(qiáng)研究。

3 問(wèn)題與展望

3.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?/h3>

在更年期綜合征的實(shí)驗(yàn)研究方面，大鼠模型功不可沒(méi)，并取得了一定的成果，但是還存在一些問(wèn)題。在近年來(lái)實(shí)驗(yàn)研究中，自然衰老的更年期綜合征大鼠模型和去勢(shì)更年期綜合征大鼠模型應(yīng)用較多，而且能從一定程度上揭示更年期綜合征的本質(zhì)和藥物的作用機(jī)理，但更年期綜合征的發(fā)生是復(fù)雜的多因素的結(jié)果，與許多自身因素也有相關(guān)，因此模型的建立還是難以和實(shí)際的病理生理完全相符。而如何建立中醫(yī)病證動(dòng)物模型，更是目前實(shí)驗(yàn)研究亟待解決的問(wèn)題。

3.2 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的觀察

目前對(duì)于更年期綜合征雌激素下降相關(guān)癥狀的機(jī)理研究已比較深入，一些基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)達(dá)到了蛋白、分子水平，但中藥和針灸治療更年期綜合征的觀察指標(biāo)還多以下丘腦—垂體—卵巢軸(hypothalamus-pituitary-ovarian axis，HPO軸)功能和生殖內(nèi)分泌環(huán)境、調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量以及免疫功能、血脂、骨代謝等指標(biāo)為主，若能從影響更年期綜合征發(fā)病因素的多環(huán)節(jié)入手，更多層次地探討更年期綜合征的發(fā)病機(jī)制，將會(huì)使基礎(chǔ)研究與臨床研究更相吻合。

3.3 研究方向的選擇

目前該疾病的動(dòng)物模型研究主要是針對(duì)發(fā)病機(jī)理和藥物、針灸等作用機(jī)理研究，尚缺乏對(duì)其并發(fā)癥的深入研究，因此在研究方向的選擇上還應(yīng)當(dāng)拓寬思路，為該病的防治作更加深入的工作。

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